外周血let-7e-5p表達水平與缺血性腦卒中發(fā)病風險之間的關聯(lián)性

羅瀾 賀宇

摘要：目的 探討外周血let-7e-5p表達水平與缺血性腦卒中發(fā)病風險的相關性。方法 將2018年4月～2019年4月在公安縣人民醫(yī)院就診的缺血性腦卒中患者作為研究對象（觀察組），對照組為在本院進行常規(guī)檢查且年齡、性別滿足研究標準者，使用實時定量PCR法測定患者外周全血let-7e-5p表達水平，深入剖析缺血性腦卒中患者miRNA表達水平與發(fā)病風險間的關聯(lián)性。結果 外周全血let-7e-5p表達水平上升時，患者發(fā)病風險也會隨之出現(xiàn)快速升高的情況，校正處理傳統(tǒng)風險和血脂水平以后，依然與之存在著直接的聯(lián)系。在模型Ⅰ里面，ROC曲線下，外周全血let-7e-5p表達水平的面積與傳統(tǒng)危險因素的面積基本相同。納入miRNA后，外周全血let-7e-5p表達水平的面積卻出現(xiàn)了大幅度增加，表現(xiàn)出較強的差異性，且有統(tǒng)計學意義。結論 缺血性腦卒中發(fā)病風險與let-7e-5p表達水平之間存在著明顯的關聯(lián)。

關鍵詞：let-7e-5p表達水平；缺血性腦卒中；關聯(lián)性

缺血性腦卒中的基因調控作用受miRNA影響非常明顯，如腦缺血再灌注、腦水腫以及動脈粥樣硬化等[1]。表觀遺傳學取得的成績非常顯著，非編碼小RNA（miRNA）所發(fā)揮的作用得到了業(yè)界的一致好評。對于miRNA來說，其大小能夠滿足25個核苷酸非編碼RNA標準的要求，在剖析靶基因的3非編碼區(qū)的過程中，使用的主要方式為堿基互補配方，有效指導了沉默復合體降解靶mRNA的翻譯活動。

通過大量研究發(fā)現(xiàn)[2～4]，人類約1/3 基因的表達能夠借助人類miRNA得以快速調節(jié)，高效調節(jié)了各種形式的生理狀態(tài)和病理狀態(tài)。在缺血性腦卒中患者病情不斷地發(fā)展時，miRNA能夠對其腦缺血再灌注、腦水腫、動脈粥樣硬化等病理過程起到積極的基因調控作用。對缺血性腦卒中患者血液循環(huán)時，miRNA的表達水平進行客觀檢測，最終結論明確了循環(huán)miRNA能不能當做缺血性腦卒中的生物標志物[5]。

1資料與方法

1.1 一般資料

將2018年4月～2019年4月在公安縣人民醫(yī)院就診的缺血性腦卒中患者作為研究對象（觀察組），對照組為在本院進行常規(guī)檢查且年齡、性別滿足研究標準者，以上研究對象均為漢族，兩組患者一般資料比較差異無統(tǒng)計學意義。兩組患者調查表內容和生物樣本非常完整。

以相關分類標準為依據(jù)對缺血性腦卒中患者進行診斷，患者癥狀與其保持比較穩(wěn)定的關聯(lián)性，各種癥狀和體征要與分類標準基本相同，持續(xù)時間保持在24 h以上，MRI或CT檢查出現(xiàn)陽性改變時需將患有癌癥史、冠心病史等患者排除在外。所有被選擇的對照者都要經過全面的體質檢查和病史問詢，將存在神經系統(tǒng)疾病、癌癥、心臟手術和腦卒中病史的患者排除掉。采用問卷調查法對病例一般情況進行調查，問卷中包括家族史、既往病史和一般情況等內容。所有研究對象中，現(xiàn)在吸煙指的是在過去一年中每天都會吸煙，至少1根以上。同時，分析血常規(guī)檢驗、生化檢驗等結果，在患者入院24 h內完成血液樣本采集任務。

1.2 方法

抽取所有研究對象空腹狀態(tài)下的肘靜脈血5 ml，使用EDTA-K2抗凝管采血，在-80℃冰箱中進行全血儲存?zhèn)溆茫行崛∪械腞NA。mirVanaPARIS miRNA的主要生產企業(yè)為美國Life Technologies公司，對每位研究對象抽取200 μl血進行檢測。TaqMan miRNA逆轉錄試劑盒的生產企業(yè)為美國Life Technologies公司，完成對miRNA的逆轉錄，從而使逆轉錄得到快速、高效完成。0.05 μl的100 mmol/LdNTPs、5μl的反應體系、1.387 μl的無RNA酶水、1.67 μl的RNA、1μl的5x逆轉錄引物、0.063 μl的逆轉錄酶抑制劑、0.5μl的lOx逆轉錄緩沖液以及0.33 μl逆轉錄酶。稀釋逆轉錄產物時，使用25 μl的無RNA酶水完成相關操作，TaqMan MiRNA檢測試劑盒的主要生產企業(yè)為美國Life Technologies公司，開展PCR擴增，做到實時、定量。

PCR分體系構成情況：10 μl反應體系、4.5 μl的逆轉錄產物、0.5 μl的20xTaqMan miRNA探針和5 μl的TaqM an通用PCR反應液。計算miRNA的相對表達量時，主要使用-ΔCt法來完成，其公式為ΔCt=CtmiRNA-CtU6，內參基因為U6[6～7]。

1.3 觀察指標

分析患者miRNA表達水平與缺血性腦卒中的關聯(lián)性，以及miRNA作為分子生物標志物的可行性。

1.4 統(tǒng)計學分析

缺血性腦卒中分子標志物的曲線下面積主要使用受試者工作特征（ROC）曲線來開展全面分析，在對不同模型的曲線下面積進行對比時，使用的主要軟件類型為Medcalc軟件。使用重新分類分析法對miRNA的綜合判別指數(shù)（IDI）和凈重分類指數(shù)（NRI）進行分析。使用Spearman分析法對miRNA與臨床指標間的相關性進行分析。

2結果

2.1 關聯(lián)性

對照組外周全血let-7e-5p表達水平相對表達量為（4.06±1.22），觀察組外周全血let-7e-5p表達水平的相對表達量為（4.98±1.06），觀察組表達水平明顯高于對照組，差異具有統(tǒng)計學意義（t=9.86，P＜0.01）。缺血性腦卒中患者發(fā)病風險與let-7e-5p表達水平存在直接的關系，及時校正血脂和危險因素進行后，缺血性腦卒中發(fā)病風險持續(xù)升高會給let-7e-5 p表達水平的增加帶來直接的影響，具有統(tǒng)計學意義（OR=1.87，P＜0.01；OR=2.05；95%CI：167～2.42，P＜0.01）。見表1。

注：在模型1（傳統(tǒng)危險因素的曲線下面積）中，miRNA是的自變量；在模型2中，miRNA和傳統(tǒng)危險因素被全部包含在自變量中，并將吸煙、性別、年齡、飲酒、糖尿病史和高血壓史全部包含在內；在模型3中，傳統(tǒng)危險因素、miRNA和血脂水平被包含于自變量中，包括甘油三醋和總膽固醇。

2.2 miRNA作為分子生物標志物的可行性

綜合使用ROC曲線后，深入剖析let-7e-5p表達水平作為分子生物標志物的具體情況，最終得出的結論為具有較強的可行性。在模型Ⅰ里面，ROC曲線狀態(tài)下，外周全血let-7e-5p表達水平的面積與傳統(tǒng)危險因素（總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白膽固醇等高）的面積基本相同。納入miRNA后，外周全血let-7e-5p表達水平的面積卻出現(xiàn)了大幅度增加，與傳統(tǒng)危險因素進行比較后，差異明顯，具有較強的統(tǒng)計學意義。見表2。

3討論

早期診斷和治療對于降低卒中引起的死亡率以及改善預后具有重要意義。目前缺血性腦卒中診斷主要依賴影像學檢查和臨床表現(xiàn)，尚缺乏有效可靠的血液生物標記物，增加了對缺血性腦卒中開展早期篩查的難度[8]。因此，積極尋找有效的血液生物標記物有著極其重要的臨床價值。

本研究結果顯示，觀察組患者表現(xiàn)出的相關信息直接影響著缺血性腦卒中患者與外周血let-7e-5p表達水平之間的關聯(lián)性，且二者之間的關聯(lián)性非常強。在傳統(tǒng)危險因素的基礎之上，將let-7e-5p引入其中，會使疾病的診斷與預測準確性得到明顯的提高，為后期將外周血let-7e-5p表達水平作為核心生物標記物奠定了堅實的基礎[9]。相關研究顯示[10～11]，let-7e-5p在Ⅱ型糖尿病大鼠心肌微血管內皮細胞里出現(xiàn)了上升情況，與血管生成功能紊亂之間存在著千絲萬縷的聯(lián)系。在心血管疾病發(fā)病機制中，let-7e-5p起到了至關重要的作用。血液粘度升高、內膜損傷和腦動脈粥樣硬化等都會導致腦動脈血栓出現(xiàn)，血小板聚集性發(fā)生根本的改變以后，血液流動性就會發(fā)生不同程度的變化，血小板質量和內皮損傷起到了重要的作用。在腦卒中患者急性發(fā)病時，血小板會快速消耗，導致血小板數(shù)量快速下降，刺激骨髓巨核細胞增生和血小板形成，血小板快速生長后，其體積和分布寬度都會發(fā)生不同程度的變化。在該研究中，研究對象的相關指標要比對照組高很多，剩余指標變化不突出。通過對血小板參數(shù)信息進行綜合分析發(fā)現(xiàn)，腦卒中患者的病情變化與血小板有著直接的關系，能夠對患者病情變化做出客觀分析[12]。

綜上，缺血性腦卒中發(fā)病風險與let-7e-5p表達水平之間存在著明顯的關聯(lián)。

參考文獻

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