多管發(fā)酵法在生活飲用水微生物檢驗中的應用效果

周偉偉 高敏 張寧 劉迎

摘 要：目的：探究多管發(fā)酵法在生活飲用水微生物檢驗中的應用效果。方法：采集2021年4個季度的生活飲用水樣本800份，根據(jù)不同檢驗方法將樣本分為多管發(fā)酵組、濾膜組，每組樣本400份，對比兩種方法對總大腸菌群、耐熱大腸菌群、大腸埃希菌和雜菌檢驗的合格率，以及對豐水期、枯水期生活飲用水微生物檢驗的總合格率。結果：多管發(fā)酵組總大腸菌群、耐熱大腸菌群、大腸埃希菌、雜菌的合格率與總合格率低于濾膜組，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；多管發(fā)酵組豐水期、枯水期生活飲用水微生物檢驗的總合格率均低于濾膜組，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。結論：多管發(fā)酵法可用于生活飲用水微生物檢驗，有助于科學判斷生活飲用水水質，值得推廣、應用。

關鍵詞：生活飲用水；檢驗方法；微生物檢驗；多管發(fā)酵法；濾膜法

Abstract： Objective： To explore the application effect of multi tube fermentation method in microbial testing of drinking water. Method： Collect 800 samples of domestic drinking water from four quarters in 2021， and divide them into multiple tube fermentation group and filter membrane group according to different testing methods. Each group has 400 samples， and compare the qualification rates of the two methods for total coliform group， heat-resistant coliform group， Escherichia coli， and miscellaneous bacteria testing， as well as the total qualification rates for microbial testing of domestic drinking water during wet and dry seasons. Result： The qualification rate and total qualification rate of total coliform， heat-resistant coliform， Escherichia coli， and miscellaneous bacteria in the multi tube fermentation group were lower than those in the filter membrane group， and the difference was statistically significant （P＜0.05）; the total qualification rate of microbial testing in drinking water during the high and low water periods of the multi tube fermentation group was lower than that of the filter membrane group， and the difference was statistically significant （P＜0.05）. Conclusion： The multi tube fermentation method can be used for microbial testing of drinking water， which is helpful for scientifically judging the quality of drinking water and is worth promoting?and applying.

Keywords： drinking water; inspection method; microbiological examination; multi-tube fermentation method; membrane filtration method

水是生命的本源，在人們的日常生活中具有無可替代的作用[1]。但近年來隨著社會經(jīng)濟的發(fā)展，工農(nóng)業(yè)、生活污染越來越嚴重，導致水質受到了一定程度的影響[2]。因此，對生活飲用水的水質進行檢驗非常必要。微生物檢驗是檢驗水質的重要手段，在認真遵照相關標準進行檢驗操作的前提下，可較為準確地檢驗出水中的菌落數(shù)量[3-4]。相關研究報道也指出，微生物檢驗能對生活飲用水的性質進行查驗，可及時找到病原菌，且有利于了解生物性有害物質的污染情況，能為水質的監(jiān)測提供重要的參考依據(jù)，對提高水質有積極作用[5-7]。但不同檢驗方法的檢驗結果存在一定的差異性，因此探討一種更為有效的檢驗方法非常有必要。鑒于此，對2021年4個季度的800份生活飲用水樣本進行微生物檢驗，并對比多管發(fā)酵法與濾膜法的檢驗結果。

1 材料與方法

1.1 樣品

采集2021年4個季度的生活飲用水樣本800份，對樣本進行微生物檢驗，根據(jù)不同檢驗方法將樣本分為多管發(fā)酵組、濾膜組，每組樣本400份。兩組樣本均包括豐水期、枯水期的生活飲用水樣本各200份。同時為了確保樣本的均衡性，采集點的選擇采用隨機抽樣法。所有樣本采集后，均放在一次性無菌袋內(nèi)儲存，并盡快送至實驗室進行檢驗。

1.2 儀器與試劑

培養(yǎng)箱（天津市萊玻特瑞儀器設備有限公司）；過濾儀（上海山姆環(huán)保設備有限公司）；培養(yǎng)基（北京百因諾生物科技有限公司）；顯微鏡（BXJ602，寧波舜宇儀器有限公司）；培養(yǎng)皿（滄州維康食品藥品包裝有限公司）；載玻片（江蘇世泰實驗器材有限公司）；分度吸管（蘇州市聯(lián)統(tǒng)儀器儀表試劑有限公司）；無菌鑷子（揚州亞申醫(yī)療科技有限公司）。

1.3 實驗方法

全部樣本在送至實驗室后4 h內(nèi)進行檢驗，以防出現(xiàn)樣本污染，造成檢驗結果的偏差。檢驗過程中，嚴格根據(jù)有關規(guī)定執(zhí)行操作，微生物檢驗項目包括總大腸菌群、耐熱大腸菌群、大腸埃希菌和雜菌。

1.3.1 多管發(fā)酵法

將1 mL水樣接種到10 mL雙料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液中，將1 mL水樣接種到10 mL單料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液中，另將1 mL水樣注入10 mL滅菌生理鹽水中，各接種5管，充分混勻，置于培養(yǎng)箱內(nèi)，培養(yǎng)箱溫度設置（36±1）℃，培養(yǎng)時間（24±2）h。如所有培養(yǎng)管不出現(xiàn)產(chǎn)酸產(chǎn)氣，視為樣本中總大腸菌群陰性；若有產(chǎn)酸產(chǎn)氣，挑取產(chǎn)酸產(chǎn)氣發(fā)酵管中的菌落接種于伊紅美藍瓊脂板上，并置于培養(yǎng)箱，培養(yǎng)箱溫度設置36 ℃左右，培養(yǎng)時間18～24 h，定時觀察瓊脂板狀況。對符合以下特征菌落進行革蘭氏染色、鏡檢和證實試驗，①呈淡紫紅色，中心較深；②呈紫褐色；③深紫黑色，有金屬光澤。

1.3.2 濾膜法

對濾膜進行殺菌，使用無菌鑷子將微孔濾膜（0.45 μm）放在裝有蒸餾水的燒杯中，蒸餾水煮至沸騰，共3次，每次15 min，除去前兩次的沸水，以免有殘留物殘存，確保濾膜無菌。使用無菌鑷子夾取濾膜置于無菌濾床上，濾膜粗糙一面處于上方，加固過濾器，將100 mL樣本置于過濾器中，開啟閘門，氣壓設定為0.05 mmHg，進行抽濾。將過濾后的濾膜取出，用無菌鑷子夾取濾膜邊緣將濾膜置于含有品紅硫酸鈉的培養(yǎng)基上，濾膜平整置于培養(yǎng)基，以免出現(xiàn)氣泡，培養(yǎng)基倒置放在恒定37 ℃的培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)48 h。

1.4 判定標準

參照《生活飲用水衛(wèi)生標準》（GB 5749—2006）相關規(guī)定，樣本中均未檢驗出總大腸菌群、耐熱大腸菌群、大腸埃希菌和雜菌，視為樣本質量合格；若其中任何一項指標未達到規(guī)定，則視為樣本質量不合格。

1.5 觀察指標

①對比兩組微生物檢驗的合格率，包括總大腸菌群、耐熱大腸菌群、大腸埃希菌和雜菌的合格率與總合格率。②對比不同時期生活飲用水微生物檢驗的總合格率。

1.6 數(shù)據(jù)分析

應用SPSS 22.0軟件對數(shù)據(jù)分析，計數(shù)資料以%表示，進行χ2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果與分析

2.1 兩種方法生活飲用水微生物檢驗結果對比

多管發(fā)酵組總大腸菌群、耐熱大腸菌群、大腸埃希菌和雜菌的合格率與總合格率低于濾膜組，P均＜0.05。見表1。

2.2 兩種方法不同時期生活飲用水微生物檢驗結果對比

多管發(fā)酵組豐水期、枯水期生活飲用水微生物檢驗的總合格率均低于濾膜組，P均＜0.05。見表2。

3 結論與討論

水是人們生活的必需品，水質會直接影響人們的身體健康，甚至會對生命安全造成威脅[8]。但水質問題長期存在，特別是農(nóng)村地區(qū)，水質不合格情況較為常見[9]。對生活飲用水進行微生物檢驗，有利于發(fā)現(xiàn)影響水質的影響因素，為政府部門強化水質管理提供參考，從而采取管理舉措，促進水質提升[10-11]。

病原微生物侵入人體，可誘發(fā)感染，常使患者出現(xiàn)腸道系統(tǒng)癥狀[12]。總大腸桿菌主要用于評定水質的衛(wèi)生質量，對腸道疾病的傳播控制有一定的指導作用[13-14]。耐熱大腸菌群主要來自人和溫血動物的糞便，是評估水質的重要參考依據(jù)。

多管發(fā)酵組總大腸菌群、耐熱大腸菌群、大腸埃希菌、雜菌的合格率與總合格率均低于濾膜組，提示多管發(fā)酵法對生活飲用水微生物檢出率較高，便于檢出總大腸菌群、大腸埃希氏菌、耐熱大腸菌群，可科學判斷生活飲用水水質。多管發(fā)酵組豐水期、枯水期生活飲用水微生物檢驗的總合格率均低于濾膜組，進一步驗證了多管發(fā)酵法在生活飲用水微生物檢驗中的應用優(yōu)勢。豐水期生活飲用水微生物檢驗的總合格率高于枯水期，提示豐水期的水質更好。

從以上分析發(fā)現(xiàn)，生活飲用水存在質量不合格的現(xiàn)象，應引起重視，加強監(jiān)管控制。政府及相關部門應不斷提高生活飲用水管理，定期檢驗水質，以提高飲用水安全性。建議措施如下：①加強對水源地的保護，嚴禁在水源地鄰近區(qū)域進行排污、排放廢氣，嚴禁使用對水質有危害性的化肥；②加速對供水管網(wǎng)的改造，合理設定水價，號召居民使用政府統(tǒng)一供應的自來水；③加強水質監(jiān)測，確保其質量符合國家衛(wèi)生標準；④加強對居民安全用水的知識宣教，告知水污染的嚴重性、飲用不合格水的危害性；⑤加強對生活飲用水的安全管理，明確各管理人員的工作任務與職能，尤其應明確管理人員的編制，并給予相應的管理經(jīng)費，以充分發(fā)揮管理者的作用，繼而提高管理效果，切實提高居民生活飲用水的管理水平；⑥對于財政支付承擔的自來水工程，應由政府代理予以監(jiān)管，并由財政、審計等職能部門行使權力，明確水廠的產(chǎn)權，以防出現(xiàn)資產(chǎn)流失；⑦由物價部門對居民的飲用水進行成本核算，合理對飲用水進行定價，包括供水水價與入戶費，并統(tǒng)一自來水初裝與水費標準，以減輕居民的用水壓力；⑧成立以社區(qū)為單位的水質檢測中心，對居民的飲用水進行免費水質檢測；⑨由政府撥付資金，建立基金制度，從居民水費中撥出一部分資金作為維護基金，助力居民飲用水供應的長久穩(wěn)定。

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