多管發酵法在生活飲用水微生物檢驗中的應用效果

周偉偉 高敏 張寧 劉迎

摘 要：目的：探究多管發酵法在生活飲用水微生物檢驗中的應用效果。方法：采集2021年4個季度的生活飲用水樣本800份，根據不同檢驗方法將樣本分為多管發酵組、濾膜組，每組樣本400份，對比兩種方法對總大腸菌群、耐熱大腸菌群、大腸埃希菌和雜菌檢驗的合格率，以及對豐水期、枯水期生活飲用水微生物檢驗的總合格率。結果：多管發酵組總大腸菌群、耐熱大腸菌群、大腸埃希菌、雜菌的合格率與總合格率低于濾膜組，差異具有統計學意義（P＜0.05）；多管發酵組豐水期、枯水期生活飲用水微生物檢驗的總合格率均低于濾膜組，差異具有統計學意義（P＜0.05）。結論：多管發酵法可用于生活飲用水微生物檢驗，有助于科學判斷生活飲用水水質，值得推廣、應用。

關鍵詞：生活飲用水；檢驗方法；微生物檢驗；多管發酵法；濾膜法

Abstract： Objective： To explore the application effect of multi tube fermentation method in microbial testing of drinking water. Method： Collect 800 samples of domestic drinking water from four quarters in 2021， and divide them into multiple tube fermentation group and filter membrane group according to different testing methods. Each group has 400 samples， and compare the qualification rates of the two methods for total coliform group， heat-resistant coliform group， Escherichia coli， and miscellaneous bacteria testing， as well as the total qualification rates for microbial testing of domestic drinking water during wet and dry seasons. Result： The qualification rate and total qualification rate of total coliform， heat-resistant coliform， Escherichia coli， and miscellaneous bacteria in the multi tube fermentation group were lower than those in the filter membrane group， and the difference was statistically significant （P＜0.05）; the total qualification rate of microbial testing in drinking water during the high and low water periods of the multi tube fermentation group was lower than that of the filter membrane group， and the difference was statistically significant （P＜0.05）. Conclusion： The multi tube fermentation method can be used for microbial testing of drinking water， which is helpful for scientifically judging the quality of drinking water and is worth promoting?and applying.

Keywords： drinking water; inspection method; microbiological examination; multi-tube fermentation method; membrane filtration method

水是生命的本源，在人們的日常生活中具有無可替代的作用[1]。但近年來隨著社會經濟的發展，工農業、生活污染越來越嚴重，導致水質受到了一定程度的影響[2]。因此，對生活飲用水的水質進行檢驗非常必要。微生物檢驗是檢驗水質的重要手段，在認真遵照相關標準進行檢驗操作的前提下，可較為準確地檢驗出水中的菌落數量[3-4]。相關研究報道也指出，微生物檢驗能對生活飲用水的性質進行查驗，可及時找到病原菌，且有利于了解生物性有害物質的污染情況，能為水質的監測提供重要的參考依據，對提高水質有積極作用[5-7]。但不同檢驗方法的檢驗結果存在一定的差異性，因此探討一種更為有效的檢驗方法非常有必要。鑒于此，對2021年4個季度的800份生活飲用水樣本進行微生物檢驗，并對比多管發酵法與濾膜法的檢驗結果。

1 材料與方法

1.1 樣品

采集2021年4個季度的生活飲用水樣本800份，對樣本進行微生物檢驗，根據不同檢驗方法將樣本分為多管發酵組、濾膜組，每組樣本400份。兩組樣本均包括豐水期、枯水期的生活飲用水樣本各200份。同時為了確保樣本的均衡性，采集點的選擇采用隨機抽樣法。所有樣本采集后，均放在一次性無菌袋內儲存，并盡快送至實驗室進行檢驗。

1.2 儀器與試劑

培養箱（天津市萊玻特瑞儀器設備有限公司）；過濾儀（上海山姆環保設備有限公司）；培養基（北京百因諾生物科技有限公司）；顯微鏡（BXJ602，寧波舜宇儀器有限公司）；培養皿（滄州維康食品藥品包裝有限公司）；載玻片（江蘇世泰實驗器材有限公司）；分度吸管（蘇州市聯統儀器儀表試劑有限公司）；無菌鑷子（揚州亞申醫療科技有限公司）。

1.3 實驗方法

全部樣本在送至實驗室后4 h內進行檢驗，以防出現樣本污染，造成檢驗結果的偏差。檢驗過程中，嚴格根據有關規定執行操作，微生物檢驗項目包括總大腸菌群、耐熱大腸菌群、大腸埃希菌和雜菌。

1.3.1 多管發酵法

將1 mL水樣接種到10 mL雙料乳糖蛋白胨培養液中，將1 mL水樣接種到10 mL單料乳糖蛋白胨培養液中，另將1 mL水樣注入10 mL滅菌生理鹽水中，各接種5管，充分混勻，置于培養箱內，培養箱溫度設置（36±1）℃，培養時間（24±2）h。如所有培養管不出現產酸產氣，視為樣本中總大腸菌群陰性；若有產酸產氣，挑取產酸產氣發酵管中的菌落接種于伊紅美藍瓊脂板上，并置于培養箱，培養箱溫度設置36 ℃左右，培養時間18～24 h，定時觀察瓊脂板狀況。對符合以下特征菌落進行革蘭氏染色、鏡檢和證實試驗，①呈淡紫紅色，中心較深；②呈紫褐色；③深紫黑色，有金屬光澤。

1.3.2 濾膜法

對濾膜進行殺菌，使用無菌鑷子將微孔濾膜（0.45 μm）放在裝有蒸餾水的燒杯中，蒸餾水煮至沸騰，共3次，每次15 min，除去前兩次的沸水，以免有殘留物殘存，確保濾膜無菌。使用無菌鑷子夾取濾膜置于無菌濾床上，濾膜粗糙一面處于上方，加固過濾器，將100 mL樣本置于過濾器中，開啟閘門，氣壓設定為0.05 mmHg，進行抽濾。將過濾后的濾膜取出，用無菌鑷子夾取濾膜邊緣將濾膜置于含有品紅硫酸鈉的培養基上，濾膜平整置于培養基，以免出現氣泡，培養基倒置放在恒定37 ℃的培養箱中，培養48 h。

1.4 判定標準

參照《生活飲用水衛生標準》（GB 5749—2006）相關規定，樣本中均未檢驗出總大腸菌群、耐熱大腸菌群、大腸埃希菌和雜菌，視為樣本質量合格；若其中任何一項指標未達到規定，則視為樣本質量不合格。

1.5 觀察指標

①對比兩組微生物檢驗的合格率，包括總大腸菌群、耐熱大腸菌群、大腸埃希菌和雜菌的合格率與總合格率。②對比不同時期生活飲用水微生物檢驗的總合格率。

1.6 數據分析

應用SPSS 22.0軟件對數據分析，計數資料以%表示，進行χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果與分析

2.1 兩種方法生活飲用水微生物檢驗結果對比

多管發酵組總大腸菌群、耐熱大腸菌群、大腸埃希菌和雜菌的合格率與總合格率低于濾膜組，P均＜0.05。見表1。

2.2 兩種方法不同時期生活飲用水微生物檢驗結果對比

多管發酵組豐水期、枯水期生活飲用水微生物檢驗的總合格率均低于濾膜組，P均＜0.05。見表2。

3 結論與討論

水是人們生活的必需品，水質會直接影響人們的身體健康，甚至會對生命安全造成威脅[8]。但水質問題長期存在，特別是農村地區，水質不合格情況較為常見[9]。對生活飲用水進行微生物檢驗，有利于發現影響水質的影響因素，為政府部門強化水質管理提供參考，從而采取管理舉措，促進水質提升[10-11]。

病原微生物侵入人體，可誘發感染，常使患者出現腸道系統癥狀[12]。總大腸桿菌主要用于評定水質的衛生質量，對腸道疾病的傳播控制有一定的指導作用[13-14]。耐熱大腸菌群主要來自人和溫血動物的糞便，是評估水質的重要參考依據。

多管發酵組總大腸菌群、耐熱大腸菌群、大腸埃希菌、雜菌的合格率與總合格率均低于濾膜組，提示多管發酵法對生活飲用水微生物檢出率較高，便于檢出總大腸菌群、大腸埃希氏菌、耐熱大腸菌群，可科學判斷生活飲用水水質。多管發酵組豐水期、枯水期生活飲用水微生物檢驗的總合格率均低于濾膜組，進一步驗證了多管發酵法在生活飲用水微生物檢驗中的應用優勢。豐水期生活飲用水微生物檢驗的總合格率高于枯水期，提示豐水期的水質更好。

從以上分析發現，生活飲用水存在質量不合格的現象，應引起重視，加強監管控制。政府及相關部門應不斷提高生活飲用水管理，定期檢驗水質，以提高飲用水安全性。建議措施如下：①加強對水源地的保護，嚴禁在水源地鄰近區域進行排污、排放廢氣，嚴禁使用對水質有危害性的化肥；②加速對供水管網的改造，合理設定水價，號召居民使用政府統一供應的自來水；③加強水質監測，確保其質量符合國家衛生標準；④加強對居民安全用水的知識宣教，告知水污染的嚴重性、飲用不合格水的危害性；⑤加強對生活飲用水的安全管理，明確各管理人員的工作任務與職能，尤其應明確管理人員的編制，并給予相應的管理經費，以充分發揮管理者的作用，繼而提高管理效果，切實提高居民生活飲用水的管理水平；⑥對于財政支付承擔的自來水工程，應由政府代理予以監管，并由財政、審計等職能部門行使權力，明確水廠的產權，以防出現資產流失；⑦由物價部門對居民的飲用水進行成本核算，合理對飲用水進行定價，包括供水水價與入戶費，并統一自來水初裝與水費標準，以減輕居民的用水壓力；⑧成立以社區為單位的水質檢測中心，對居民的飲用水進行免費水質檢測；⑨由政府撥付資金，建立基金制度，從居民水費中撥出一部分資金作為維護基金，助力居民飲用水供應的長久穩定。

參考文獻

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