毫針針刺足三里對失神經肌萎縮大鼠穴區電阻、溫度和能量代謝變化的影響

賴清 王鼎 吳永強 陳波 張婷 司原成 莫曦雅

摘要：目的 研究大鼠脛前肌失神經萎縮對毫針針刺腧穴穴區電阻、溫度及能量代謝的影響，為不同機能狀態影響毫針針刺作用差異的生物醫學機制提供實驗依據。方法 將32只清潔級SD大鼠隨機分為正常組和肌萎縮組，每組大鼠再配對分入針刺組和非針刺組2個亞組。使用A型肉毒素肌肉注射建立大鼠脛前肌化學性失神經支配肌萎縮模型，針刺組針刺“足三里”穴，捻轉頻率60次/min，行針5 min，留針10 min，共操作3輪后出針，每日操作1次，連續3 d。針刺結束后，測量穴區電阻和溫度，切取以穴點為圓心，直徑0.5 cm，深度0.5 cm區域的組織塊，采用酶聯免疫法檢測組織中ATP、ADP的含量并計算ATP/ADP。結果 針刺正常組大鼠可以降低腧穴的電阻、溫度，提高穴區ATP/ADP，差異均有統計學意義（P<0.01）；針刺肌萎縮組大鼠能降低穴區電阻、溫度，差異均具有統計學意義（P<0.01），且電阻降低幅度顯著大于正常組（P<0.01）；針刺肌萎縮組大鼠不能提高穴區ATP/ADP，與正常針刺組比較，差異具有顯著統計學意義（P<0.01）。結論 肌萎縮狀態下毫針針刺激活腧穴的作用與正常機體狀態存在不同，肌萎縮狀態可明顯減弱針刺對腧穴ATP/ADP的調節幅度，針刺對肌萎縮的治療作用可能主要通過增強腧穴電敏特性達成。

關鍵詞：毫針針刺；腧穴區域；失神經肌萎縮；生物物理學特性；能量代謝特性

中圖分類號：R246 文獻標志碼：A 文章編號：1007-2349（2023）03-0082-05

Effect of Acupoint Resistance， Temperature and Energy Metabolismof Rats with Denervation Muscular Atrophy after Acupuncture at Zusanli Point

LAI Qing， WANG Ding， WU Yong-qiang， CHEN Bo， ZHANG Ting， SI Yuan-cheng， MO Xi-ya

（School of Acupuncture and Massage， Guizhou University of Traditional Chinese Medicine， Guiyang 550025， China）

【Abstract】Objective： To study the effects of denervation atrophy of rat anterior tibial muscle on acupoint resistance， temperature and energy metabolism in the acupoints of acupuncture needles， and to provide experimental evidence for the biomedical mechanism of affecting the effect difference of acupuncture needles in different functional states. Methods： 32 clean SD rats were randomly divided into a normal group and a muscular atrophy group， and each group was paired into two subgroups， acupuncture group and non-acupuncture group. The rat model of chemical denervation muscle atrophy of tibialis anterior muscle was established by intramuscular injection of botulinum toxin type A. The acupuncture group was injected at Zusanli point， the twisting frequency was 60 times /min， the needle was inserted for 5 min， the needle was retained for 10 min， and the needle was extracted after 3 rounds of operation， once a day for 3 consecutive days. After the acupuncture， the resistance and temperature of the acupoint area were measured， and tissue blocks with the acupoint as the center of the circle with a diameter of 0.5cm and a depth of 0.5cm were cut. The contents of ATP and ADP in the tissues were detected and ATP/ADP was calculated by ELISA. Results： The acupuncture in normal group could reduce the resistance and temperature of the acupoints and increase ATP/ADP in the acupoints， and the differences were statistically significant（P<0.01）. The acupuncture in muscular atrophy group could reduce the resistance and temperature in the acupoint area， and the difference was statistically significant（P<0.01）， and the reduction of resistance was significantly greater than that in normal group（P<0.01）. The acupuncture in muscular atrophy group could not improve ATP/ADP in the acupoint area， and the difference was statistically significant compared with that of the normal acupuncture group （P<0.01）. Conclusion： The effect of acupuncture activation on acupoints under the condition of muscular atrophy is different from that of normal body condition. The condition of muscular atrophy can significantly weaken the adjustment amplitude of acupuncture on ATP/ADP of acupoints. The therapeutic effect of acupuncture on muscular atrophy may be mainly achieved through enhancing the electrical sensitivity characteristics of acupoints.

【Key words】Acupuncture Needles; Acupoint Area; Denervation Atrophy; Biophysical Properties; Energy Metabolism Characteristic

針刺效應的產生主要受刺激源、介質與受體的影響^［1］，穴位激活是產生針刺效應的關鍵環節。毫針針刺作為一種外源性刺激，常常能夠引發腧穴熱敏、電敏和能量代謝特性的改變，是穴區激活和機體自體調節功能啟動的表現^［2-3］。但目前針刺激活腧穴的物質基礎和機制尚不明確，而且機體作為針刺的受體，不同機體狀態對針刺穴位局部的激活會產生什么影響，也不清楚。因此，本課題將就針刺腧穴后其生物物理學特性與腧穴局部組織能量代謝水平變化的相關性進行研究，并觀察失神經肌萎縮病理狀態對針刺激活腧穴的影響，為揭示毫針針刺作用的生物醫學機制進一步提供實驗依據。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及分組 清潔級成年SD大鼠32只，體質量（200±10）g，雌雄不限，由長沙市天勤生物技術有限公司提供，動物合格證號：SCXK（湘）2019-0014。于貴州中醫藥大學動物實驗中心飼養，室溫（24±2）℃，相對濕度（50±5）%，每12h明暗交替，自由飲食、飲水。適應性飼養1周后，采用隨機數字表法將大鼠分為正常組和肌萎縮組，每組16只大鼠。每個組按照大鼠窩別、體重、活躍度等因素配對后隨機分別分入針刺組和非針刺組2個亞組，每組8只大鼠。實驗過程中對動物的處置均符合2006年國家科技部發布的《關于善待實驗動物的指導性意見》的相關規定。

1.2 主要試劑與儀器 注射用A型肉毒素（S10970037，蘭州生物制品研究所）、大鼠三磷酸腺苷（ATP）ELISA檢測試劑盒（ZK-R4622，深圳子科生物公司）、大鼠二磷酸腺苷（ADP）ELISA檢測試劑盒（ZK-R3711，深圳子科生物公司）、大鼠一磷酸腺苷（AMP）ELISA檢測試劑盒（ZK-R5101，深圳子科生物公司），水合氯醛（1113A20，北京雷根生物公司）。毫針（0.30 mm×25 mm/2003046，吳江云龍醫療器械公司），電子天平（WT型，杭州萬特衡器公司），紅外體溫計（CK-T1503，深圳長坤科技公司），直流低電阻測試儀（YP2512，深圳永鵬公司），凍存管（607001，NEST），液氮罐（YDS-20，青島海爾公司）。

1.3 造模方法 采用注射用A型肉毒素肌肉注射制備大鼠失化學性失神經肌肉萎縮模型^［4］。以10%水合氯醛（0.3mL/100g）腹腔注射麻醉；大鼠固定后于右側小腿脛前肌群處使用1 mL醫用注射器緩慢單點注射1 U（0.1 mL）注射用A型肉毒素（10 U/mL），出針后消毒干棉球按壓針孔5 S。繼續飼養14 d后完成造模。

1.4 針刺方法 各組大鼠稱重后，于右側“后三里”穴^［5］周備皮，以10%水合氯醛（0.3 mL/100g）腹腔注射麻醉，消毒大鼠“后三里”，用0.30 mm×25 mm的一次性無菌針灸針直刺入“后三里”穴區組織5 mm，捻轉頻率為60 r/min（誤差±2 r/min），幅度180°～360°，行針5 min后，留針10 min，重復3次，每日針刺操作1次，連續針刺操作3 d。正常組與肌萎縮組由同一人做相同的抓取、固定及針刺。

1.5 檢測方法和觀察指標

1.5.1 腧穴穴區電阻檢測 大鼠俯臥位固定，以腧穴為中心，直徑5 mm的圓為電阻觀測范圍，無關電極固定在右后肢足掌中，在被測穴位點和上下左右各1.5 mm處使用探測電極進行電阻檢測，取平均值進行記錄。

1.5.2 腧穴穴區溫度檢測 大鼠繼續俯臥位固定，在“后三里”垂直上方（4.0±1.0）cm用紅外體溫計進行溫度檢測，每隔10 s記錄1次，測定1 min，取6次平均值進行記錄。

1.5.3 腧穴穴區ATP/ADP計算 （1）動物取材：大鼠脫頸處死后立即取材：于大鼠右側后肢進一步消毒、備皮，切開皮膚后分別以大鼠穴位點為圓心，取下直徑約0.5 cm、垂直深度0.5 cm的皮下組織塊（重量約200 mg）。按照順序將取下的組織塊逐一用生理鹽水清洗，裝入凍存管并進行編號，放入-20 ℃冰箱暫存，所有動物取材完畢后統一放入液氮罐（-196 ℃）保存。（2）ATP、AMP檢測：將取下的組織塊按ELISA檢測試劑盒的檢測方法進行檢測。（3）計算ATP/ADP。

1.6 統計學方法 所有數據均以均數±標準差（x±s）表示，采用SPSS25.0統計軟件進行檢驗，同組內針刺與非針刺亞組間數據對比采用配對樣本t檢驗進行；不同組間針刺或非針刺組間數據比較采用獨立樣本t檢驗進行。以P<0.05為有統計學意義。

2 結果

2.1 一般情況比較 正常組大鼠攝食、飲水及大小便正常，反應機敏，毛發整齊有光澤，步態正常。造模14 d后肌萎縮組大鼠飲食、二便無明顯異常，毛色整潔，右側小腿脛前肌群較左側明顯萎縮，腓骨小頭骨性標志較左側明顯凸起，皮下組織消薄，足趾抓地無力，呈拖趾步態。正常組和肌萎縮組針刺治療后，穴區皮膚未見血腫及破損，肌萎縮模型大鼠右側小腿肢脛前肌萎縮未見明顯好轉，爬行時右后足偶爾可抬離地面，呈拖趾步態或跛行步態。

2.2 機體不同狀態下毫針針刺力學刺激對腧穴電阻的影響 正常組、肌萎縮組在針刺后，穴區電阻均較非針刺組降低（P<0.01），穴區溫度均較非針刺組顯著降低（P<0.01），正常組針刺后，穴區ATP/ADP較非針刺組顯著增加（P<0.01）。見表1。

2.3 機體不同狀態下毫針針刺力學刺激對腧穴電阻、溫度和ATP/ADP調節幅度的影響 肌萎縮組針刺后腧穴電阻降低幅度大于正常組（P<0.01），肌萎縮組與正常組相比，針刺對穴區ATP/ADP調節幅度有顯著差異（P<0.01）。見表2。

3 討論

失神經肌萎縮是針刺臨床的常見病和適應癥，在中醫學中屬于“痿證”范疇。傳統理論認為，“治痿獨取陽明”，陽明經絡之氣合于膝關節下、脛骨前緣的足三里穴。現代研究表明^［6-9］：針刺能提高失神經萎縮肌肉肌細胞橫截面積，促進肌衛星細胞增殖和分化，減輕肌細胞凋亡程度，增加肌細胞濕重，促進失神經肌萎縮動物運動功能的恢復。

針刺對穴位的激活有多種表現形式，電阻是較為常見的反映腧穴狀態的生物物理學指標^［10］。周丹等^［11］觀察針刺時不同的穴位配伍對穴區電阻的影響，發現不論是合募配穴還是原絡配穴，針刺即刻及針刺后10分鐘穴區電阻均有下降。孫艷紅等^［12］利用經穴皮膚電阻動態檢測系統觀察不同體質在校大學生在針刺足三里、上巨虛20 min內穴區電阻的變化情況，發現針刺后大部分腧穴的電阻有不同程度的下降，且下降趨勢不受針刺手法和受試者體質的影響。本研究中，針刺組腧穴處的電阻較非針刺組顯著降低（P<0.01），肌萎縮組針刺后的電阻值較正常組更低（P<0.01），針刺前后電阻差值更大（P<0.01），說明針刺能極大地提高腧穴電敏性，在失神經肌萎縮狀態下，穴位的處的導電性能進一步提升，可能是是針刺產生治療效應的主要因素。

針刺對溫度的調節受到操作方法、選穴及機體狀態的影響^［13］。沈書泓^［14］利用紅外熱成像技術觀察到針刺陰虛體質受試者命門穴20min后，其督脈循行線上的各腧穴溫度均顯著降低。張平等^［15］觀察心肌缺血損傷大鼠在針刺內關穴后心包經各經穴的溫度變化，發現針刺后內關穴、郄門穴及天泉穴處的溫度均有所下降。本研究采用平補平瀉的操作方法針刺大鼠足三里，觀察到針刺組穴區溫度顯著降低（P<0.01），且不受失神經肌萎縮狀態的影響。

陳波等^［16］認為，針刺效應的產生與ATP等能量物質的功能與密切相關。細胞中ATP、ADP、AMP能相互轉化，為組織代謝活動提供能量，并維持細胞能量代謝穩態。當組織中供能物質ATP不足時，2個單位ADP在相關酶作用下氧化磷酸化為1個單位ATP和1個單位AMP，氧化磷酸化的速率主要受ATP/ADP比率的影響^［17］。相關研究表明，針刺能夠有效提高心肌組織、腦組織、肌肉組織等部位的能量物質含量，提升其能量代謝水平^［18-20］，此類研究多聚焦于針刺對相關臟腑肌肉能量代謝的影響。本研究關注針刺干預對穴位局部組織能量代謝的影響，發現正常組大鼠針刺后穴區ATP/ADP比率得到極大提升（P<0.01），ATP含量處于較高水平。說明正常情況下，針刺后腧穴組織處于高能活化狀態。肌萎縮組針刺后，ATP/ADP比率與針刺前無明顯變化，但與正常組相比，ATP/ADP的增幅存在明顯差異（P<0.01），說明失神經肌萎縮狀態削弱了針刺對腧穴處能量代謝的影響。

本研究中針刺正常大鼠使其穴區處于高能活化狀態，局部可能存在旺盛的物質合成和代謝，組織中神經遞質、電解質、微量元素等富集^［21］，所以腧穴導電性能提升，電阻下降。有研究者認為^［2］：針刺對機體穩態的調控可在電敏狀態下被促進，以達到治療疾病的目的。本研究中肌萎縮病理狀態下，針刺后穴區組織電敏性進一步提升，可能是針刺產生治療效應的重要前提。穴位體表的溫度是皮下組織向上傳遞的熱量與皮膚表面熱量向周圍輻射相平衡的結果^［22］。本研究中正常大鼠穴區組織所產生的能量可能更多的供給活躍的物質合成代謝，并未完全以熱能的形式釋放至體表，故針刺后穴區溫度降低；肌萎縮狀態下穴區溫度較正常情況沒有差異，針刺后穴區溫度降低，表明毫針刺激改變了腧穴處的紅外熱學特性，其作用機制將待進一步的研究發現。

綜上所述，肌萎縮狀態下毫針針刺激活腧穴的作用與正常機體狀態存在不同，肌萎縮狀態可明顯減弱針刺對腧穴ATP/ADP的調節幅度，針刺對肌萎縮的治療作用可能主要通過增強腧穴電敏特性達成。

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（收稿日期：2022-08-20）