浙江中部地區NF-κB1 基因rs28362491 位點多態性與CHD 嚴重程度及炎癥因子的相關性研究

李超 陳云 李俊 盛曉生

[摘要] 目的 探討核轉錄因子-κB1（nuclear transcription factor-κB1，NF-κB1）基因rs28362491 位點多態性與冠狀動脈粥樣硬化性心臟病（coronary atherosclerotic heart disease，CHD）患者的嚴重程度、炎癥因子的相關性。方法 前瞻性選取2018 年6 月至2021 年6 月浙江省金華市人民醫院CHD 患者173 例為觀察組，同期非CHD 的患者107 例為對照組，采用聚合酶鏈反應–限制性片段長度多態性技術分析NF-κB1 基因rs28362491 位點基因多態性，檢測腫瘤壞死因子-α（tumornecrosis factor–α，TNF-α）、白細胞介素（interleukin，IL）-6、IL-8 水平。結果 觀察組NF-κB1 基因rs28362491 位點DD基因型頻率高于對照組，Ⅱ、ID 基因型頻率低于對照組（P<0.05）。兩組D、I 等位基因頻率比較，差異有統計學意義（P<0.05）。觀察組中，DD 基因型組Gensini 評分均高于ID 和Ⅱ基因型組（P<0.05）；ID 組和Ⅱ基因型組病變支數、Gensini 評分比較，差異無統計學意義（P>0.05）。觀察組血清TNF-α、IL-6、IL-8 水平顯著高于對照組（P<0.05）。觀察組DD 基因型TNF-α、IL-6、IL-8 水平明顯高于ID 和Ⅱ基因型，差異有統計學意義（P<0.05）；ID 組和Ⅱ基因型組TNF-α、IL-6、IL-8 水平比較，差異無統計學意義（P>0.05）。結論 NF-κB1 基因rs28362491 位點多態性與CHD 嚴重程度及炎癥因子相關，DD 基因型可能上調TNF-α、IL-6、IL-8 水平，成為預測CHD 病變程度的危險因子。

[關鍵詞] NF-κB1；冠心病；基因多態性；炎癥因子

[中圖分類號] R541? ?[文獻標識碼] A? ?[DOI] 10.3969/j.issn.1673-9701.2023.12.001

冠狀動脈粥樣硬化性心臟病（coronary heartdisease，CHD）屬于心血管系統疾病，具有發病率高、致殘率高及致死率高等特點[1-3]。研究表明，CHD發病風險除受到環境因素影響外，與基因多態性密切相關[4]。核轉錄因子-κB1（nuclear transcription factor-κB1，NF-κB1）基因rs28362491 位點是NF-κB1 基因中唯一具有表達功能的單核苷酸多態性（singlenucleotide polymorphises，SNPs），與甲狀腺疾病、2 型糖尿病、系統性紅斑狼瘡、炎癥性腸病等慢性炎癥性疾病發生風險密切相關[5-6]。近年來，許多研究證實中國西北地區漢族及維吾爾族人群NF-κB1-rs28362491 位點多態性與CHD 的遺傳易感性相關，攜帶DD 基因型在CHD 中具有危險性[7]，但與CHD 嚴重程度和炎癥因子關系的相關報道較少。基于以上研究背景，本研究分析浙江中部地區NF-κB1 基因rs28362491 位點多態性與CHD 嚴重程度及炎癥因子的相關性，旨在為CHD 的診斷和治療提供合理的依據，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018 年6 月至2021 年6 月就診金華市人民醫院心血管內科疑似CHD 患者280 例，根據冠脈造影結果診治的173 例CHD 患者作為觀察組，107例非CHD 患者作為對照組。觀察組男102 例，女71例，平均年齡（62.22±5.99）歲；對照組男65 例，女42 例，平均年齡（61.73±5.83）歲。診斷標準：參照《美國心臟病學會和心臟協會CHD 心絞痛診斷指南》和《2007 年中國慢性穩定性心絞痛診斷與治療指南》制定的穩定性心絞痛[8]。本研究中所有受試者均為浙江中部地區漢族常住人群，相互間均無血緣關系；年齡18～75 歲，性別不限，排除先天性心臟病、嚴重急慢性感染、肝腎功能不全、惡性腫瘤等疾病，兩組患者的性別、年齡、糖尿病、高血壓、高脂血癥、吸煙等方面比較，差異無統計學意義（P>0.05），具有可比性。受試患者均簽署知情同意書，本研究經浙江省金華市人民醫院倫理委員會審核批準（倫理審批號：IBR-2021073-R）。

1.2 方法

1.2.1 冠狀動脈造影術 采用Judkin 法造影冠狀動脈其中一條或者較大的分支，直徑狹窄≥50%，即可以診斷CHD[9]。冠狀動脈病變支數的判定：①單支病變：前降支、回旋支及右冠狀動脈中任何一支血管直徑狹窄≥50％；②雙支病變：前降支、回旋支及右冠狀動脈中任何兩支或者左主干狹窄≥0%；③三支病變：任意三支動脈狹窄≥50%。Gensini 評分法：冠脈管腔狹窄程度系數乘以各病變血管的系數，最后總評分為各分支血管評分之和。每支血管狹窄程度，狹窄≤25%計1 分，26%～_______50%計2 分，51%～75%計4 分，76%～90%計8 分，91%～99%計16 分，100%計32 分。各段冠狀動脈病變系數：左主干為5，前降支及回旋支近段為2.5，前降支中段為1，前降支遠段為1，回旋支中遠段為1，右冠狀動脈近中遠段為1，第一對角支為1，第二對角支為1，右心室后支為1，其他小分支為0.5。

1.2.2 NF-κB1 基因多態性檢測 空腹取靜脈血5ml，采用低滲法分離白細胞，提取DNA，利用聚合酶鏈反應– 限制性片段長度多態性技術擴增NF-κB1 基因啟動區-94 位點，進行NF-κB1 基因多態性檢測。

1.2.3 炎癥因子分析 取晨空腹肘正中靜脈血5ml，乙二胺四乙酸抗凝管收集，ALLEGRAX-15R 醫用低速離心機，離心1000 轉/min，離心15min，血清于–80℃冰箱儲存。采用酶鏈免疫吸附法檢測腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor–α，TNF-α）、白細胞介素（interleukin，IL）-6、IL-8 水平，試劑盒由北京百奧萊博科技有限公司提供。

1.3 統計學方法

采用SPSS 22.0 統計學軟件對數據進行處理分析，計量資料以均數±標準差（x s ）表示，組間比較采用t 檢驗，多組間比較采用方差分析；計數資料以例數（百分率）[n（%）]表示，組間比較采用χ2檢驗，P<0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組NF-κB1 基因rs28362491 位點多態性比較

NF-κB1基因rs2836249位點的基因型及等位基因頻率在觀察組和對照組的分布均符合Hard-Weinberg平衡定律。NF-κB1 基因rs28362491 位點DD 基因型頻率高于對照組，Ⅱ、ID 基因型頻率低于對照組（P<0.05），兩組D、Ι等位基因頻率比較，差異有統計學意義（P<0.05），見表1。

2.2 觀察組不同基因與冠狀動脈嚴重程度的相關性

觀察組中3 種不同基因組病變支數、Gensini 評分比較，差異均有統計學意義（P<0.05）。DD 基因型組Gensini 評分高于ID 和Ⅱ基因型組患者（P<0.05）。

ID 組和Ⅱ基因型組病變支數、Gensini 評分比較，差異無統計學意義（P>0.05），見表2。

2.3 兩組患者TNF-α、IL-6、IL-8 表達水平比較

觀察組患者的TNF-α、IL-6、IL-8 表達水平明顯高于對照組（P<0.05），見表3。

2.4 觀察組不同基因型炎癥因子水平比較

觀察組中3 種不同基因組TNF-α、IL-6、IL-8 水平比較，差異均有統計學意義（P<0.05）。DD 基因型組TNF-α、IL-6、IL-8 水平均高于ID 和II 基因型組（P<0.05）。ID 組和Ⅱ基因型組TNF-α、IL-6、IL-8水平比較，差異無統計學意義（P>0.05），見表4。

3 討論

越來越多研究支持，炎癥反應通過影響動脈粥樣硬化（atherosclerosis，AS），貫穿CHD 的形成、發展與預后的全過程[10]。炎癥因子一般起源于血管內皮和巨噬細胞的促炎細胞顆粒，在外周血液中被檢測。相關研究表明，TNF-α 由單核細胞和巨噬細胞產生，侵襲血管內皮細胞，誘導血栓形成，引起血管狹窄及心肌細胞壞死，最終導致心臟功能惡化[11-12]。葛麗英等[13]研究證實，IL-6、IL-8 水平與CHD 發生密切相關。本研究結果表明，觀察組患者血清中TNF-α、IL-6、IL-8 水平高于對照組。

核因子κB（nuclear factor kappa-B，NF-κB）是一種重要的核轉錄因子，參與機體炎癥反應，主要由NF-κB 和RelA 基因編碼組成[14]。NF-κB 介導炎癥細胞信號轉導通路在AS 的發生、發展中發揮關鍵作用，故NF-κB 的活化可能是CHD 發生的重要因素[15]。NF-κB1 為NF-κB 重要組成部分，其基因位于人類第4 號染色體長臂2 區4 帶（4q24），由24 個外顯子和內含子組成，跨度為1.56×105bp，編碼NF-κB 亞單位p105 與p50，調節轉錄因子反應[16]。p50/p65 異源二聚體作為NF-κB 轉錄軸的組成部分，誘導促炎細胞因子的轉錄而具有促炎作用。相反，p50 在p50 同型二聚體中具有抗炎特性，其能夠抑制促炎細胞因子，刺激單核巨噬細胞分泌IL-10，起到持續的抗炎作用[17]。rs28362491 位點多態性表現為ATTG 堿基的插入/缺失，編碼野生純合基因型（ins/ins，Ⅱ），雜合突變基因型（ind/del，ID），純合突變基因型（ del/del ，DD） 3 種基因[18]。大量證據表明，NF-κB1-rs28362491 多態性與CHD 遺傳易感相關，D等位基因和DD、ID 基因型可能增加CHD 的發病風險[19]，究其原因可能是影響p50/p50 的濃度，導致促炎/抑炎平衡失調[20-21]，但與CHD 的嚴重程度研究不多，且研究證實Gensini 評分可反映冠狀動脈病變嚴重程度，其與患者的預后呈負相關。本研究中，觀察組NF-κB1 基因rs28362491 位點DD 基因型和D等位基因分布頻率顯著高于對照組，表明D 等位基因可能是CHD 發生的遺傳易感基因。另外，通過觀察組NF-κB1-rs28362491 多態性分布情況，DD 基因型的冠脈病變三支支數增多以及Gensini 評分增高，進一步說明等位基因D 增多與CHD 的發生、發展密切相關。

本研究結果顯示，觀察組NF-κB1-rs28362491位點DD 與ID+Ⅱ基因型比較，DD 基因型TNF-α、IL-6、IL-8 水平高于ID+Ⅱ基因型（P<0.05），提示CHD 患者NF-κB1-rs28362491 位點與炎癥反應有一定的聯系，推測NF-κB1-rs28362491 位點ATTG 缺失（等位基因D）不能與核蛋白結合，抑制NF-κB 轉錄效率，導致p50 蛋白合成能力下降，引起p50/p65異源二聚體和p50/p50 同源二聚體失衡，損害內皮細胞，刺激平滑肌細胞增殖，最終促進CHD 的發生、發展，因此對CHD 的高危人群進行NF-κB1 基因篩查，從而早診斷、早預防、早治療。

綜上所述，NF-κB1 基因rs28362491 位點多態性與浙中地區漢族人群CHD 的發生和發展密切相關，DD 基因型可能通過影響TNF-α、IL-6、IL-8 表達，使機體處于高炎癥狀態，成為易感基因型，易導致冠脈病變程度加重。

[參考文獻]

[1] HODZIE E， PERLA S， IGLICAG A， et al. Seasonalincidence of acute coronary syndrome and its features[J].Mater Sociomed， 2018， 30（1）： 10–14.

[2] 中國心血管健康與疾病報告編寫組. 中國心血管健康與疾病報告2019 概要[J]. 中國循環雜志， 2020， 35（9）：833–854.

[3] HE Y， LI Y， YANG X， et al. The dietary transition and itsassociation with cardiometabolic mortality among Chineseadults， 1982-2012： A cross-sectional population-basedstudy[J]. Lancet Diabetes Endocrinol， 2019， 7（7）： 540–548.

[4] CABRERAC C P， NGF L， NICHOLLS H L， et al. Over1000 genetic loci influencing blood pressure withmultiple systems and tissues implicated[J]. Hum MolGenet， 2019， 28（R2）： R151-R161.

[5] ISAURAIFC D S， CAMILAA D L， MARIAL A M， et al.IL-1β， IL-18， NF-κB1 and IFNG gene interactions areassociated with severity of rheumatoid arthritis： A pilotstudy[J]. Autoimmunity， 2020， 53（2）： 95–101.

[6] AMAR G， STUTI G， MOHIT M， et al. Association ofNF-κB1 gene polymorphism （rs28362491） with levels ofinflammatory biomarkers and susceptibility to diabeticnephropathy in Asian Indians[J]. World J Diabetes， 2017，8（2）： 66–73.

[7] 劉倩. NF-κB1 啟動子區l-94ins/del ATTG 基因多態性和CHD 的相關性研究[D]. 蘭州： 蘭州大學， 2017.

[8] 中華醫學會心血管病學分會介入心臟病學組， 中華醫學會心血管病學分會動脈粥樣硬化與CHD 學組， 中國醫師協會心血管內科醫師分會血栓防治專業委員會， 等. 穩定性CHD 診斷與治療指南[J]. 中華心血管病雜志， 2007， 46（9）： 680–694.

[9] 從國彬， 張濤， 王恩漫， 等. CHD 患者冠脈血流儲備分數與循環微粒的關系[J]. 中國老年學雜志， 2018，2（38）： 322–324.

[10] MOORE K J， KOPLEV S， FiSHER E A， et al.Macrophage trafficking， inflammatory resolution， andgenomics in atherosclerosis[J]. J Am Coll Cardiol， 2018，72（18）： 2181–2197.

[11] 劉世林， 黃文軍， 閆博宇. Homer1、IL-1β、RBP4、TNF-α 及LKB1 在CHD 中的表達及意義[J]. 廣東醫學， 2019， 40（3）： 399–402.

[12] SONG C L， WANG J P， XUE X， et al. Effect of circularanril on the inflammatory response of vascular endothelialcells in a rat model of coronary atherosclerosis[J]. CellPhysiol Biochem， 2017， 42（3）： 1202.

[13] 葛麗英， 韓會香， 吳桂玲. CHD 合并高脂血癥患者血脂水平與炎癥因子表達的相關性分析[J]. 臨床醫學，2020， 40（11）： 30–32.

[14] JIANG C， TONG Y L， ZHANG D， et a1. Sinomenineprevents the development of cardiomyopathy in diabeticrats by inhibiting innammatory responses and blockingactivation of NF-κB[J]. Gen Physiol Biophys， 2017，36（1）： 65–74.

[15] ONG S B， HERNANDEZ-RESENDIZ S C， RESPOAVILANG E， et al. Inflammation following acutemyocardial infarction： Multiple players， dynamic roles，and novel therapeutic opportunities[J].Pharmacol Ther，2018， 186： 73–87.

[16] ESKANDARI E， HASHEMI M， EBRAHIMI M， et al.The functional 4-bp insertion/deletion ATTG polymorphismin the promoter region of NF-κB1 reduces the risk ofBC[J]. Cancer Biomark， 2016， 16（1）： 109–115.

[17] 王亞麗， 王偉， 譚蛟. CHD 患者血清NLRP3 炎性小體、NF-κB 的表達及其與Gensini 評分的關系[J]. 臨床醫學， 2021， 41（7）： 1–4.

[18] YU X J， ZHANG D M， JIA L L， et a1. Inhibition ofNF-κB activity in the hypothalamic paraventicularnucleus attenuates hypertension and cardiac hypertrophyby modulating cyrokines and attenuating oxidative stress[J].Toxicol Appl Pharmacol， 2015， 284（3）： 315–322.

[19] 劉倩， 劉欣躍， 李林靜， 等. NF-κB1 基因啟動子區-94ins/del ATTG 多態性與CHD 關聯性的薈萃分析[J].臨床檢驗雜志， 2016， 34（3）： 225–228.

[20] COTO E， REGUERO J R， AVANZAS P， et al. Genevariants in the NF-κB pathway （NF-κB1， NF-κBIA，NF-κBIZ） and risk for early-onset coronary arterydisease[J]. Immunol Lett， 2019， 208： 39–43.

[21] CHEN Q J， LAI H M， ZHAO L， et al. Associationbetween the NF-κB1-94ins/del ATTG polymorphism（rs28362491） and coronary artery disease： A systematicreview and Meta-analysis[J]. Genet Test Mol Biomarkers，2016， 20（3）： 105–111.

（收稿日期：2022–08–17）

（修回日期：2023–03–08）