NETs在腦卒中患者血栓中的含量及對治療、預后的影響

古力加乃提·麥麥吐遜 麥路德木·麥麥吐遜 于慧娟 韋麗熱 嚴偉

腦血管中風是全球第二大死因,每年死亡率約為550萬,同時也是全球致殘的主要原因,約有50%的幸存者患有慢性殘疾[1]。而急性缺血性中風是最常見的中風類型,占腦卒中的69.6%～70.8%,主要由腦血管血栓形成導致的血流量降低,進而引發腦缺血,影響腦、神經功能[2]。腦缺血的治療關鍵在于及時恢復腦血流,挽救缺血半暗帶區,其中使用重組組織型纖溶酶原激活劑的靜脈溶栓是唯一獲批的急性缺血性中風再通治療手段,然而由于其狹窄的治療窗口等原因,只能用于小部分患者,隨著醫療水平的進步,機械血栓切除成為治療急性腦缺血的重要治療手段[3,4]。近年來關于中性粒細胞胞外誘捕網(neutrophil extracellular traps,NETs)相關報道較多,有學者認為NETs與動脈粥樣硬化及血栓形成密切相關,但其在腦卒中的研究鮮有報道[5]。而動脈粥樣硬化又是急性缺血性腦卒中的常見危險因素之一,推測NETs可能參與急性缺血性腦卒中取栓治療后的預后[6]。本研究旨在探討NETs在腦卒中患者血栓中的含量及對取栓治療、預后的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2020年10月至2021年12月我院神經內科住院的急性缺血性腦卒中患者90例,患者采用血管內機械取栓治療并成功取出血栓。納入標準:(1)相關診斷標準均符合《中國急性缺血性腦卒中診治指南2014》[7];(2)經數字減影血管造影或臨床CT血管造影檢查明確為大血管(大腦中動脈M1或M2段及頸內動脈)閉塞;(3)美國國立衛生研究院卒中量表(NIH stroke scale,NIHSS)>6分[2];(4)發病前改良Rankin量表(Modified Rankin Scale,mRS)分值<2分[8];(5)患者及法定代理人簽署知情同意書。排除標準:(1)1個月內發生過嚴重系統性出血并接受手術治療;(2)有凝血功能異常病史;(3)顱腦CT腦內出血;(4)經治療血壓依然高于180/110 mm Hg;(5)經治療血糖含量依然>22.2 mmol/L或者<2.7 mmol/L;(6)有重要腎功能不全及肝、心、臟器功能衰竭;(7)生命體征如體溫、呼吸、血壓以及心率難以維持,出現腦疝或危及生命的情況。

1.2 預后評估 參照mRS評分標準對患者預后進行評分,其中5分為患者需臥床且大小便失禁,生活無法自理,需專人持續照顧;4分為患者無法行走,患有重度殘疾;3分為患者可自己行走,患有中度殘疾;2分為患者基本生活可自理,但無法完成所有日常活動,患有輕度殘疾;1分為患者可獨立完成日常活動,患有輕度癥狀;0分無癥狀。90例急性缺血性腦卒中患者治療3個月后,將mRS評分≥3分作為預后不良組,≤2分為預后良好組,其中預后不良組患者共37例,預后良好組患者共53例,無死亡病例。

1.3 主要試劑與儀器 上海酶聯生物科技有限公司提供人NETs酶聯免疫吸附測定法(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)試劑盒(批號:ml060524);上海遠慕生物科技有限公司提供人降鈣素原ELISA試劑盒(批號:YM-8364);美谷分子儀器(上海)有限公司提供SpectraMax i3x酶標儀(型號);德國艾本德股份公司提供Centrifuge5810R型低速離心機。

1.4 方法

1.4.1 樣本采集:90例缺血性腦卒中患者術中成功取出血栓組織,勻漿后,以5 000 r/min離心8 min,取上清液于無菌EP管中,于-20℃冰箱中保存,待檢。

1.4.2 ELISA法檢測血栓中NETs、降鈣素原水平:按照人NETs、降鈣素原ELISA試劑盒說明書配制一系列濃度的標準品溶液,酶標儀測定450 nm處不同濃度標準品的吸光度值,繪制標準品回歸曲線。取出冰箱中保存的上清液,測定450 nm處的吸光度值,對照標準曲線計算NETs、降鈣素原含量。

1.4.3 一般資料收集:收集90例缺血性腦卒中患者一般資料,如:年齡、性別、卒中原因、體質指數、糖尿病、高血壓、發病至血管再通時間、吸煙史、飲酒史。對血管再通改良腦梗死溶栓(modifified thrombolysis in cerebral infarction,mTICI)進行血流評估,其中mTICI在2 b級(超過下游缺血區的50%得到灌注)、3級(下游缺血區完全灌注)判定為血管開通成功;0～2a級(2a級為未超過下游缺血區的50%得到灌注,1級為極少灌注或無灌注,0級為無灌注)為再通失敗[9]。評估患者側支循環建立情況[10]:Ⅰ～Ⅱ級(Ⅱ級為病灶周邊可見側支血流,Ⅰ級為未見側支血流)為未建立;Ⅲ-Ⅳ級(Ⅳ級為可見側支血流,速度較快,Ⅲ級為可見側支血流,速度較慢)為建立。

2 結果

2.1 2組患者一般資料比較 與預后良好組相比,預后不良組發病至血管再通時間、mTICI分級占比顯著增加,側支循環建立占比降低,差異均有統計學意義(P<0.05);年齡、性別、體質指數、糖尿病、卒中原因、高血壓、吸煙史、飲酒史差異均無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 2組患者一般資料比較

2.2 2組患者血栓中NETs水平比較 與預后良好組相比,預后不良組NETs水平顯著升高,差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 2組患者血栓中NETs水平比較 μg/ml,

2.3 2組患者血栓中降鈣素原水平及NIHSS評分比較 與預后良好組相比,預后不良組降鈣素原水平及NIHSS評分顯著升高(P<0.05)。見表3。

表3 2組患者血栓中降鈣素原水平及NIHSS評分比較

2.4 缺血性腦卒中患者NETs水平與降鈣素原水平、NIHSS評分的相關性 Pearson法分析顯示,血栓組織中NETs水平與降鈣素原水平、NIHSS評分分別呈正相關。見表4。

表4 血栓組織中NETs水平與降鈣素原水平、NIHSS評分的相關性分析

2.5 影響缺血性腦卒中患者取栓治療預后的因素 以缺血性腦卒中患者取栓治療的預后為因變量,以發病至血管再通時間、側支循環建立、mTICI分級、降鈣素原水平、NETs、NIHSS評分水平為自變量,Logisitic回歸分析顯示,發病至血管再通時間、降鈣素原水平、側支循環建立、mTICI分級、NETs水平、NIHSS評分是缺血性腦卒中患者不良預后的危險因素(P<0.05)。見表5。

表5 Logisitic回歸分析影響缺血性腦卒中患者預后的多因素

3 討論

急性缺血性腦卒中屬于臨床常見的腦血管疾病,發病及病程進展較快,致死率及致殘率均較高,發病率也呈現上升趨勢,多數患者治療后常伴有不同程度的神經功能缺損,給患者及家庭帶來沉重的負擔[11]。缺血性腦卒中的發病機制復雜,機械切除血栓治療已成為急性缺血性卒中患者的主要治療方法,可迅速開通血管,時間窗口相對較長,但需要考慮多種因素如微循環障礙、栓塞等情況,無法使患者得到有效灌注,進而出現不良預后如偏癱、昏迷甚至死亡[12]。

中性粒細胞是白細胞中最豐富的細胞類型,在先天免疫系統中起著至關重要的作用,是抵抗微生物的第一道屏障,中性粒細胞釋放組蛋白、蛋白質顆粒和雙鏈DNA形成纖維樣結構,稱為NETs。在血液中NETs可以誘導血栓形成,以防止傳染性病原體的傳播,然而過度的NETs生成可介導微血管血栓形成,誘導內皮細胞死亡,導致腦血管疾病的發生[13]。有文獻報道,NETs被證明在缺血性卒中血栓中存在,與不良卒中呈正相關,提示其在人類缺血性中風期間具有臨床相關性[14]。Lim等[15]研究發現急性冠狀動脈綜合征及急性缺血性卒中患者血漿中NETs的循環水平顯著增加,可作為一種新循環標志物用于急性冠狀動脈綜合征及急性缺血性卒中的初步診斷。Kang等[16]研究發現在缺血性中風階段,NETs水平在3～5 d達到峰值,并抑制新生血管形成和血管重塑。Vallés等[17]研究發現急性缺血性卒中患者血漿顯著高于健康人,與嚴重程度和死亡率相關,可作為急性缺血性卒中的預后標志物及治療靶點。本研究發現預后不良組NETs水平較預后良好組顯著升高,可能與急性缺血性卒中的預后有關,與Vallés等[17]研究一致。NIHSS評分主要從意識障礙、面癱、凝視、視野等多個方面進行評估,可反映患者神經缺損嚴重程度[18]。降鈣素原是早期感染的敏感指標,其水平升高通常表明預后較差,患者存在多臟器衰竭或感染[19]。本研究發現預后不良組降鈣素原水平及NIHSS評分較預后良好組顯著升高,提示腦卒中后可能存在炎性細胞浸潤和炎癥反應,患者存在神經功能缺損,表明降鈣素原水平及NIHSS評分可有助于預測患者預后。Pearson法分析顯示,血栓組織中NETs水平與降鈣素原水平、NIHSS評分分別呈正相關,提示NETs水平與降鈣素原水平、NIHSS評分相互影響,共同干預急性缺血性卒中患者預后。Logisitic回歸分析結果顯示,發病至血管再通時間、側支循環建立、mTICI分級、降鈣素原水平、NETs水平、NIHSS評分是缺血性腦卒中患者不良預后的危險因素。因此在對患者取栓前可進行病情評估,針對不良預后的危險因素進行積極干預,以提高患者預后。

綜上所述,缺血性腦卒中患者血栓中NETs水平顯著增加,關注其含量及發病至血管再通時間、降鈣素原水平、NIHSS評分危險因素,有助于提高缺血性腦卒中患者預后。