疑似非洲豬瘟感染實驗室診斷初探

李華高　荀紹雄　李方志　晏波　潘基　馬萬圣　潘愛查

摘要：大河鎮(zhèn)是養(yǎng)殖業(yè)重鎮(zhèn)，養(yǎng)殖業(yè)是農(nóng)民增收的支柱之一。非洲豬瘟是養(yǎng)豬業(yè)的頭號殺手，若生物安全防控落實不到位，對養(yǎng)殖業(yè)的損失就會極其慘重，到現(xiàn)在都研制不出合格的疫苗，從客觀上講，養(yǎng)殖業(yè)確實遇到了瓶頸。非洲豬瘟防控措施、方案，幾經(jīng)修改，現(xiàn)已轉(zhuǎn)為常態(tài)化的防控，隱性傳染不容易發(fā)現(xiàn)，癥狀不明顯，臨床上呈現(xiàn)的多數(shù)為混合性感染，因此進行實驗室診斷就顯得很重要。

關鍵詞：非洲豬瘟；疑似；感染；實驗室診斷

0 引言

自2018年8月初我國首次發(fā)生非洲豬瘟疫情以來，黨中央、國務院、省委省政府、市委市政府、縣委縣政府對此高度重視，認真組織，狠抓落實，各項防控工作有序推進。

非洲豬瘟是由非洲豬瘟病毒引起的豬的一種急性、熱性、高度接觸性動物傳染病。世界動物衛(wèi)生組織（ OIE）將其列為法定報告動物疫病，我國將其列為一類動物疫病，是我國重點防范的外來動物疫病之一。根據(jù)《中華人民共和國動物防疫法》等法律法規(guī)和農(nóng)業(yè)農(nóng)村部《非洲豬瘟疫情應急預案》、《云南省非洲豬瘟應急工作方案》、《曲靖市非洲豬瘟應急工作方案》、《富源縣突發(fā)重大動物疫情應急預案》有關要求，縣局會議精神，切實做好全鎮(zhèn)非洲豬瘟疫情防控工作，進一步壓實責任、明確任務、細化措施，結(jié)合大河實際，開展了非洲豬瘟防控一系列的工作。制定印發(fā)了《大河鎮(zhèn)非洲豬瘟疫病防控工作實施方案》（大政發(fā)[2018]47號）文件，明確了目標任務和各相關部門的工作職責。同時印發(fā)了《大河鎮(zhèn)非洲豬瘟疫病防控工作領導小組》（大政發(fā)[2018]48號）文件，成立了以鎮(zhèn)長為組長的領導小組，負責統(tǒng)籌協(xié)調(diào)做好非洲豬瘟防控工作。

1 材料與方法

1.1 養(yǎng)殖基本情況排查

按照縣指揮的安排部署，認真組織人員對全鎮(zhèn)各村及25個規(guī)模養(yǎng)殖場進行排查1470次，排查場（戶）43000余頭，未發(fā)現(xiàn)異常情況。11月10日，進行全鎮(zhèn)大排查。散戶由村委會、村獸醫(yī)進行排查，規(guī)模戶由畜牧站組織進行排查。此次大排查，未發(fā)現(xiàn)非洲豬瘟，累計排查生豬67415頭，其中母豬9733頭，仔豬23277頭，肥豬33456頭。摸清底子，掌握了生豬存欄情況，為下一步開展工作提供了依據(jù)。又分別安排了村獸醫(yī)，根據(jù)各自轄區(qū)情況，進行走村串戶，隨機抽查，適時了解畜禽健康狀況，早發(fā)現(xiàn)，早診斷，確保將非洲豬瘟日排查工作落到實處。

1.2 對異常情況重點排查和處理

大河鎮(zhèn)轄區(qū)內(nèi)大、中、小型養(yǎng)殖場共45個，經(jīng)2021年3月12日排查發(fā)現(xiàn)，某養(yǎng)殖場生豬存欄450頭，其中能繁母豬32頭。經(jīng)調(diào)取養(yǎng)殖生產(chǎn)檔案，查看免疫記錄，豬瘟、藍耳疫苗全部有免疫記錄，且在有效免疫期內(nèi)。發(fā)病120頭，其中母豬14頭，肥豬106頭，經(jīng)一星期死亡母豬6頭，肥豬64頭。臨床檢查：T值41.3℃，皮膚發(fā)紫，嘔吐。解剖：肝部腫大黃染，脾臟邊緣輕微梗死，無腫大，其他組織器官無異常。對病死豬70頭全部送大河鎮(zhèn)無害化處理中心進行集中無害化處理。

1.3 病料送檢

按無菌操作及采樣要求，對剛死亡的病死豬進行肝、心、脾、肺、腎等實質(zhì)器官的采集，委托云南農(nóng)業(yè)大學牧醫(yī)樓進行了實驗室診斷。在無菌條件下，取新鮮組織或關節(jié)液、心包液等置于肉湯中培養(yǎng)，置于 37℃生化培養(yǎng)箱培養(yǎng) 12～15h 后，然后用接種環(huán)蘸取菌液且劃線于 3%血瓊脂培養(yǎng)基中，置于 5%CO2 培養(yǎng)箱 37℃培養(yǎng) 24±2h后，觀察菌落形態(tài)并挑取可疑菌落進行革蘭氏染色鏡檢。

2 實驗樣品采集與運輸原則

2.1 組織和實質(zhì)器官的采集

在選擇樣品采集部位時，最好采集病變和健康交界部位的組織或臟器。病料的采集必須采用無菌操作。最好采取送檢發(fā)病期和瀕死期動物，如動物已死亡、冬天需在死亡2h以內(nèi)、夏天需在死亡1h以內(nèi)采樣，用手術剪無菌采集病變部位的肝、脾、肺等病料，放雙層自封袋或塑料袋內(nèi)，標記清楚，結(jié)扎密封。

病毒學檢測病料可冷藏送檢，或可置于-20℃以下冰箱冷凍1晚上待病料凍結(jié)實后快遞送檢。細菌學及藥敏試驗檢測病料不需要冷凍，在保溫箱里放冰塊、4℃冷藏快遞送檢。每群豬或每棟雞不少于3頭或3只動物的病料組織。

2.2 血清采集

采集好的血液樣品傾斜放置，凝固后會自動析出血清，將血清吸出注入另一個新的滅菌離心管中；有條件的可用離心機分離出血清，將血清吸出放置新的滅菌離心管中，標記清楚，置于-20℃冰箱冷凍12h，將冰凍血清放入保溫箱內(nèi)加冰袋快遞送檢。

2.3 飲用水采集

采集同棟畜舍水井、水箱、水線的水，無菌取300ml 水后放至滅菌玻璃瓶或剛開封的礦泉水瓶（倒掉礦泉水），迅速擰緊瓶蓋，標記清楚，6h內(nèi)送至實驗室，如果6h送不到，請用保溫箱進行冷藏保存，即在保溫箱里放冰塊，且用報紙等包住。

3 檢測結(jié)果

圖1，圖2分別為1號、2號樣品菌液在血瓊脂平板上形成圓形、微凸、表面光滑、濕潤、邊緣整齊、半透明的菌落，直徑約0.3～1mm，大多數(shù)菌株呈草綠色α溶血，部分菌株不產(chǎn)生溶血環(huán)。

圖3，圖4分別為1號、2號血瓊脂培養(yǎng)基產(chǎn)生溶血環(huán)的單個菌落革蘭氏染色鏡檢結(jié)果，發(fā)現(xiàn)單個及成對存在、形態(tài)均一的藍紫色陽性桿菌。

4 結(jié)果

經(jīng)過實驗室診斷，該豬場患有豬鏈球菌病，導致了豬氣喘病等混合性感染致死。

5 小結(jié)與討論

該養(yǎng)殖場此次發(fā)病，自己要承受巨大的損失，看似偶然，其實是必然的。經(jīng)過仔細的調(diào)查分析，存在的問題確實很多，從大的方面看，有以下幾點是值得討論的，也是值得沉思，養(yǎng)殖場應當盡量避免的，必須提前進行有效規(guī)避的。

5.1 選址

養(yǎng)殖場的選址按照《動物防疫合格證》申辦條件上的要求去做，盡量遠離村莊，河流。該養(yǎng)殖場位于河道邊上，且在下游，容易受上流水源的影響，直接與村莊相接，人、物、畜禽的密切接觸，防控難度非常大。

5.2 布局一定要科學合理

該養(yǎng)殖場占地面積1860m2，豬舍緊密相接，20世紀80年代半開放式，外留露天運動場2.3m2，中間孤形與豬睡覺的地方隔開，遇到極端天氣豬舍無法升溫保暖。豬舍緊密相連，是養(yǎng)殖場 的通病，中間缺乏緩沖地段，夏天不能有效散，尤其是肥豬舍，極易導致呼吸系統(tǒng)疾病的發(fā)生，遇到重大傳染病根本無法有效隔離和及時止損。人畜混居，飼養(yǎng)員、獸醫(yī)員、養(yǎng)殖場老板，兒童、學生全部住養(yǎng)殖場內(nèi)，尤其是這幾年畜禽重大傳染病，人畜共患病，對人對豬都是非常不利的?，F(xiàn)在的養(yǎng)殖防控理念是“關口前移，人病獸防”，必將是一種趨勢。

5.3 保持環(huán)境衛(wèi)生

養(yǎng)殖場對環(huán)境衛(wèi)生的要求很高，按照正常的，也是最簡單的檢驗方法是人住進豬舍，只要自己覺得能適應，豬就肯定能適應。該養(yǎng)殖場飼料倉庫、獸藥、衣服全部共堆一間屋子，防鼠防霉措施全無。

5.4 注意消毒

消毒室設計不合理，與雜物間無異，消毒藥水沒有及時更換，進出的車輛不能有效消毒，細菌病毒入場極其便利。

6 結(jié)論

未來的養(yǎng)殖業(yè)，養(yǎng)殖生豬必須要把非洲豬瘟生物安全防控放在首位，認真抓好豬的基礎免疫工作，提升生豬養(yǎng)殖水平，提高豬群的整體抵抗力，不相信神藥，認真落實非洲豬瘟防控措施，不走捷徑。

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