血清miR-195在宮頸鱗狀細(xì)胞癌診斷中的臨床意義

閆丹丹，高涵，王寧

1.中山大學(xué)附屬第七醫(yī)院婦產(chǎn)科，廣東深圳 518000；2.內(nèi)蒙古民族大學(xué)附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科，內(nèi)蒙古通遼 028000；3.大連醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院婦科，遼寧大連 116000

MicroRNA（miRNAs）可干擾mRNA的轉(zhuǎn)錄、翻譯，并具有促進(jìn)RNA降解的作用，在調(diào)節(jié)蛋白表達(dá)上具有重要作用[1-2]。miRNAs在細(xì)胞的凋亡、壞死，以及腫瘤細(xì)胞的增殖過程中具有顯著活性[3]。既往研究證實(shí)miR-195多種惡性腫瘤，如乳腺癌、消化系統(tǒng)腫瘤、泌尿系統(tǒng)腫瘤等均存在異常表達(dá)[4-5]，且在此類患者的的組織液中可檢測(cè)出穩(wěn)定表達(dá)的miRNA。故miR-195的異常表達(dá)已經(jīng)認(rèn)為是多種腫瘤活化的標(biāo)志物而應(yīng)用于臨床[6-8]。本研究收集2016年9—11月中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院中21例確診且初診為早期（Ⅰa1～Ⅱa2期）宮頸鱗狀細(xì)胞癌的患者血清標(biāo)本為觀察組，同期健康志愿者22名為對(duì)照組，比較該病患者與正常人群血清miR-195水平的差異，以明確其是否可作為宮頸鱗狀細(xì)胞癌診斷的潛在標(biāo)志物。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

收集21例于本院確診且初診為早期（Ⅰa1～Ⅱa2期）宮頸鱗狀細(xì)胞癌的患者血清標(biāo)本為觀察組，年齡41～68歲，平均（52.2±3.6）歲，宮頸癌臨床分期為Ⅰa期7例、Ⅰb期8例、Ⅱa期6例[臨床分期采用2009年國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（The International Federation of Gynecology and Obstetrics, FIGO）的分期標(biāo)準(zhǔn)]。對(duì)照組為同期健康志愿者22名，年齡40～65歲，平均（51.9±2.7）歲。兩組一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經(jīng)過本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（倫理編號(hào)201608011），入組前患者或家屬簽署知情同意書。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：精神狀況正常；預(yù)計(jì)生存時(shí)間＞6個(gè)月；于本院規(guī)律就診；臨床資料完整。

排除標(biāo)準(zhǔn)：嚴(yán)重肝腎功能障礙者；腫瘤卡氏評(píng)分＜60分者；未明確診斷宮頸癌者；精神狀況異常者。

1.3 方法

取靶標(biāo)志物血清RNA 10 μl，嚴(yán)格按照反轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，并在37℃ 60 min，85℃ 5 min條件下生成cDNA液。應(yīng)用miR-195正向引物與管家基因（U6）（均由上海生工提供），同時(shí)配置等計(jì)量滅菌用水為空白對(duì)照組，隨后進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)，反應(yīng)體系劑量為25 μl，共計(jì)40個(gè)循環(huán)，設(shè)定每個(gè)實(shí)驗(yàn)批次均有空白對(duì)照

1.4 觀察指標(biāo)

比較兩組研究對(duì)象的血清miR-195的表達(dá)水平，測(cè)定方法采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法，分析血清miR-195在宮頸鱗狀細(xì)胞癌中的診斷效能。

1.5 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以（）表示，組間差異比較采用t檢驗(yàn)；通過ROC曲線判斷血清miR-195在宮頸鱗狀細(xì)胞癌的診斷效能。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組研究對(duì)象miR-195表達(dá)水平比較

觀察組血清miR-195表達(dá)水平高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）。見表1。

表1 兩組研究對(duì)象miR-195表達(dá)水平比較()

表1 兩組研究對(duì)象miR-195表達(dá)水平比較()

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2.2 血清miR-195在宮頸鱗狀細(xì)胞癌中的診斷效能分析

血清miR-195診斷宮頸鱗狀細(xì)胞癌的ROC曲線下面積為0.675（95%CI：0.569～0.781，P=0.001），截?cái)嘀禐?9.86時(shí)的敏感性和特異性分別為71.43%、60.71%，見圖1。

圖1 血清miR-195在宮頸鱗狀細(xì)胞癌中的診斷效能分析

3 討論

宮頸癌具有多種發(fā)病機(jī)制，且屬于多基因聯(lián)合作用結(jié)果，其中預(yù)后最理想的為早期宮頸癌，其五年生存率超過90%[9-11]。隨著近年腫瘤學(xué)研究的深入，針對(duì)惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展的基因與遺傳學(xué)研究成為目前研究的重點(diǎn)和熱點(diǎn)，其中非編碼區(qū)miRNA越來(lái)越受到廣大學(xué)者的關(guān)注。研究提示miRNA在惡性腫瘤細(xì)胞的增殖、分化過程中均具有非常關(guān)鍵的調(diào)控意義，另外其還影響到惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)，同時(shí)致病微生物感染過程中亦具有明顯作用[12-14]。

本團(tuán)隊(duì)前期研究證實(shí)了miR-195參與了宮頸鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生，其在宮頸癌組織中表達(dá)下調(diào)，而且高表達(dá)的miR-195抑制Hela和SiHa細(xì)胞的增殖，提示miR-195可能是宮頸鱗癌相關(guān)的敏感性腫瘤標(biāo)志物。本研究結(jié)果提示觀察組血清miR-195表達(dá)水平高于對(duì)照組（P＜0.05）。另外ROC曲線分析結(jié)果提示：血清miR-195診斷的曲線下面積為0.675，其敏感性接近60%，而特異性則超過60.0%，以上結(jié)果亦提示miR-195可能是宮頸鱗癌相關(guān)的敏感性腫瘤標(biāo)志物。此結(jié)果與申晨歌[15]研究提示血清miR-195診斷宮頸鱗狀細(xì)胞癌的曲線下面積達(dá)到0.716的結(jié)果相近。雖然本研究結(jié)果提示miR-195作為腫瘤標(biāo)志物診斷宮頸鱗狀細(xì)胞癌的ROC曲線下面積相對(duì)較低，但其敏感性和特異度具有一定臨床價(jià)值，究其原因可能是本研究所納入對(duì)象樣本量有限，產(chǎn)生一定偏倚有關(guān)。本研究因缺乏宮頸上皮內(nèi)瘤變患者、宮頸腺癌以及晚期宮頸癌者，導(dǎo)致無(wú)法從多角度綜合探討血清miR-195對(duì)宮頸相關(guān)病變的診斷價(jià)值，此為本研究不足。本研究結(jié)果與曾晶晶等[16]研究提示宮頸癌miR-195相對(duì)表達(dá)量為（0.38±0.09），血清miR-195診斷宮頸鱗狀細(xì)胞癌的曲線下面積是0.715，敏感性和特異性均在60%左右的結(jié)論相一致。

綜上所述，miR-195是一種潛在的診斷宮頸鱗狀細(xì)胞癌的腫瘤標(biāo)志物，對(duì)臨床早期診斷與篩查宮頸鱗癌變有一定指導(dǎo)意義，同時(shí)可為術(shù)后隨訪提供指導(dǎo)。