多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1調(diào)控β-1,4-甘露糖基轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)甲狀腺癌細(xì)胞增殖機(jī)制

劉梅 黃晶 張燕妮 李珊 胡紹波 劉芳 胡玉海 孫文早

甲狀腺癌(TC)的發(fā)病率逐年上升,已成為最常見的內(nèi)分泌相關(guān)惡性腫瘤[1]。大多數(shù)甲狀腺未分化癌(ATC)患者首次就診時(shí)即發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,經(jīng)傳統(tǒng)治療并不能明顯提高ATC患者的生存率[2]。目前TC的發(fā)病機(jī)制尚未闡明[3]。但近年隨著對(duì)TC分子生物學(xué)發(fā)病機(jī)制的深入研究,發(fā)現(xiàn)多種基因與TC的發(fā)病密切相關(guān)[4],這些基因的多靶點(diǎn)多激酶抑制劑已被開發(fā)并應(yīng)用于TC的臨床治療,但部分患者療效仍不理想[5]。因此,進(jìn)一步發(fā)掘新型介導(dǎo)TC發(fā)病及進(jìn)展的關(guān)鍵分子將為其治療提供新方向。β-1,4-甘露糖基轉(zhuǎn)移酶(ALG1)主要參與蛋白質(zhì)糖基化修飾的初始階段,前期在肝癌的研究中顯示高表達(dá)的ALG1具有抑制肝癌細(xì)胞遷移的作用[6]。然而,ALG1在TC中的具體研究尚少。多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)1在DNA損傷修復(fù)過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用[7]。研究表明,PARP1(Val762Ala)因缺乏多聚腺苷二磷酸(ADP)RNA酶活性而無法進(jìn)行堿基切除修復(fù),從而增加TC患病風(fēng)險(xiǎn)[8],但PARP1對(duì)TC發(fā)生發(fā)展的具體作用機(jī)制尚不明確。前期我們的研究表明,PARP1表達(dá)活化可能在TC的發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用[9],本研究擬在此基礎(chǔ)上,進(jìn)一步探討PARP1對(duì)TC細(xì)胞增殖、凋亡的影響,篩選出介導(dǎo)PARP1促進(jìn)TC進(jìn)展的關(guān)鍵糖基轉(zhuǎn)移酶,從而為TC的靶向治療提供理論依據(jù)。

材料與方法

1.材料:人正常甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞系(Nthy-ori 3-1,上海舜冉);TC細(xì)胞系(SW579及8305C)、人胚胎腎細(xì)胞(HEK293T,中國(guó)科學(xué)院細(xì)胞庫(kù));慢病毒表達(dá)載體(pLV)-EGFP/ALG1(武漢擎科);細(xì)胞培養(yǎng)基(RPMI1640)、細(xì)胞培養(yǎng)基(DMEM)、胎牛血清(美國(guó)Gibco);Trizol(美國(guó)……