P53、PDL1在彌漫大B細胞淋巴瘤中的表達相關性及其對預后的影響＊

張 茜 陳煥偉 呂學文 李 晟 戴偉平 梁業由

廣東省農墾中心醫院腫瘤內科六區 (廣東 湛江 524002)

彌漫大B細胞淋巴瘤作為臨床較多見的高度侵襲性淋巴瘤，也是非霍奇金淋巴瘤上常見類型之一，其發生率約占全部侵襲性淋巴瘤的80%左右，成為危害患者身心健康的常見病。研究顯示[1]，與正常淋巴細胞核相比，該類患者細胞的細胞核更大，同時呈現彌漫性生長。此外，彌漫大B細胞淋巴瘤的臨床分型較復雜多樣，且在遺傳學、組織形態學、臨床癥狀、療效上存在較高的異質性。故此，治療前需對患者的風險因素進行評估，通過對應的風險分層選擇針對性治療方案，在保障患者預后上具有重要作用。隨著醫學水平的完善發展，臨床發現R-CHOP化療方案的效果顯著，部分患者經治療后可達到預期效果，但仍有部分患者可能因為復發或者耐藥情況導致效果不佳[2-3]。目前，臨床評價預后的方式以國際預后指數為主，雖然能夠指導臨床治療，但其僅作為是臨床預后參數的組合，無法展現出該病發生發展過程中分子生物學的異質性，因此，積極尋找影響疾病預后的分子生物學指標成為關鍵[4]。據相關報道顯示[5]，P53、PDL1蛋白與該病存在密切關系，前者屬于應激反應性抑癌基因，在控制細胞周期、DNA修復及凋亡上存在重要意義，一旦該基因失活后可導致細胞增值與腫瘤化療抵抗。后者則屬于B7受體家族的重要成員，也是活化的T細胞，能夠和同源受體發生結合反應，并抑制信號，防止外周組織內活化的T細胞增值。但目前臨床關于P53、PDL1和彌漫大B細胞淋巴瘤相關的報道較少，本文就此展開分析，結果如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料選擇2020年5月至2022年12月廣東省農墾中心醫院腫瘤科經病理確診為DLBCL患者40例。此實驗經醫院倫理委員會批準。

入組標準：符合《中國彌漫大B細胞淋巴瘤診斷與治療指南》[6]中疾病相關診斷；均病理檢驗確診；患者及親屬均知情同意；病歷資料完整，并無缺項。排除標準：生存周期小于六個月；合并傳染性單核細胞增多癥、壞死性淋巴炎、轉移性腫瘤疾病、髓外白血病；存在免疫抑制治療史；試驗前接受放化療者。

1.2 方法收集所有患者的標本，選擇4%中性甲醛進行妥善固定，常規石蠟包埋，以4μm厚度進行持續切片，鋪片后按照二步法免疫組化檢測系統測定DLBCL組織中的P53、PDL1蛋白的表達。首先將切片放在65℃恒溫箱內烘烤，時間控制1h，采取二甲苯脫蠟，并常規進行梯度酒精水化，利用檸檬酸緩沖液煮沸修復抗原，再通過磷酸鹽(PBS)緩沖液進行沖洗，采取3%過氧化氫遏制內源性過氧化物酶活性，將一抗加入切片上，于4℃恒溫箱內孵育過夜，再次PBS緩沖液沖洗，加入通用型免疫球蛋白G抗體-辣根過氧化物酶多聚體，于37℃恒溫箱內孵育，時間15min，PBS緩沖液沖洗，選擇二氨基聯苯胺試劑染色，采取蘇木素輕度復染細胞核，再次使用PBS緩沖液沖洗，以梯度酒精脫水干燥，利用中性樹膠封片，另外將PBS代替一抗作為陰性對照。選擇兩名經驗豐富的病理專家觀察染色結果，其中P53蛋白處于細胞核內，利用顯微鏡發現細胞核存在棕黃色顆粒即P53陽性染色，若陽性細胞占比超出10%可判定成陽性，反之小于等于10%則是陰性。PDL1則處于細胞膜上，呈現棕黃色或者黃色，若著色強度的腫瘤細胞大于等于25%可判定成陽性，反之即陰性[7]。

另外，所有患者予以CHOP或者R-CHOP方案化療6-8周期，其中CHOP方案為：靜滴750mg/m2環磷酰胺+75mg/m2表阿霉素+1.4mg/m2長春新堿+100mg波尼松；R-CHOP方案：靜滴375g/m2利妥昔單抗+750mg/m2環磷酰胺+75mg/m2表阿霉素+1.4mg/m2長春新堿+100mg波尼松，21d為一療程。針對低中危患者4周期進行評估，而高危患者3周期評估療效，追蹤疾病無進展生存時間(PFS)及生存時間(OS)。

1.3 觀察指標統計所有患者P53、PDL1蛋白的陽性表達率，再對比P53、PDL1陽性與陰性患者的臨床資料(性別、年齡、Hans分型、分化程度、臨床分期、療效、風險程度、3年PFS率及OS率)，并利用Pearson相關性分析P53、PDL1蛋白與疾病的相關性。

療效：完全緩解(CR)：病灶消失并維持3周以上；部分緩解(PR)：病灶縮小并維持3周以上；穩定(SD)：病灶縮小但不明顯，維持3周以上；疾病進展(PD)：病灶擴大或者轉移，病情惡化[8]。

風險程度：血清乳酸脫氫酶超出正常水平1倍即為低中危；行為狀況評分2-4分即高危。

1.4 統計學處理全文數據選擇SPSS 20.0系統計算，(χ-±s)為計量數據，選擇t檢驗；百分比為計數數據，選擇χ2檢驗，P＜0.05為數據存在統計學差異，另外利用Pearson相關性分析計算相關性，P＜0.05表示有相關性。

2 結 果

2.1 所有患者P53、PDL1蛋白的表達情況經檢測，發現P53陽性表達率42.50%，而PDL1陽性表達率37.50%。見表1。

表1 所有患者P53、PDL1蛋白的表達情況[n=40，n(%)]

2.2 P53、PDL1蛋白表達與臨床資料的關系P53、PDL1蛋白表達在性別、年齡、Hans分型、分化程度、臨床分期上無顯著差異(P＞0.05)，但在療效、風險程度、3年PFS率及OS率上差異顯著(P＜0.05)。見表2。

表2 P53、PDL1蛋白表達與臨床資料的關系

2.3 P53、PDL1與疾病的相關性通過Pearson相關性分析，發現P53、PDL1均與疾病呈現正相關性(P＜0.05)。見表3。

表3 P53、PDL1與疾病的相關性

3 討 論

彌漫大B細胞淋巴瘤屬于血液系統較多見的惡性腫瘤，存在較高的異質性與侵襲性，大部分患者預后較差，直接降低生活質量[9-10]。因此，早期診斷、及時采取有效治療在改善患者預后上意義重大。目前，臨床對于該病的治療方案以化療為主，如CHOP或者R-CHOP等方案，雖然取得過一定的治療效果，但仍有少數患者出現病情復發的情況[11]。故此，如何改善該類患者療效及預后成為臨床研究重點。

研究發現，彌漫大B細胞淋巴瘤的發生及發展與多種機制、蛋白基因的異常表達存在關聯，且臨床已有報道證實多種基因蛋白參與了該病發生發展的過程。故此，早期通過相關因子的檢測可盡快明確患者病情惡化或者不良預后的風險，為后續調整治療方案及靶向治療提供指導作用[12-13]。P53基因處于17號染色體短臂，包含突變型與野生型兩大類，前者可導致該基因失活，并利用多種途徑引起細胞周期進程失衡或者腫瘤細胞凋亡，最終造成細胞增殖失控。此外P53基因通常突變成4-7外顯子突變，處于DNA結合區域的編碼區，包含同義突變、無義突變、錯義突變等，加上P53基因屬于腫瘤細胞上較多見的突變基因，于各類腫瘤上的發生率存在一定差別，而彌漫大B細胞淋巴瘤上P53基因的突變率占30%左右[14]。后者則可控制多條通路的下游靶基因，在腫瘤生長期間的防御機制上具有重要作用，可控制細胞DNA修復進程，對細胞周期阻滯及凋亡的影響較大[15]。另外，TP53基因作為臨床常見的抑癌基因，于腫瘤細胞上呈現較高表達，且該基因轉錄翻譯的蛋白P53在細胞生長及增值修復上極為重要。TP53基因一旦突變即可造成P53蛋白喪失功能，并造成腫瘤細胞生長抑制能力降低[16-17]。加上P53基因調控細胞周期組織、衰退與凋亡等過程，因此P53蛋白陽性表達成為彌漫大B細胞淋巴瘤的預后因素，同時與疾病呈現正相關性，故此，P53成為判斷預后的重要指標。而PDL1作為阻礙腫瘤免疫逃逸的主要靶點，其在多種實體腫瘤上意義重大，故此，靶向PDL1成為血液惡性腫瘤的潛在用途。此外，PDL1在多種類型的淋巴瘤組織及淋巴瘤細胞系上表達，而正常淋巴組織上未發現PDL1的表達，從而證實其與淋巴瘤的惡性程度存在密切關系，可對患者預后進行評價[18-20]。從本次研究結果中看到：P53陽性表達率42.50%，而PDL1陽性表達率37.50%；P53、PDL1蛋白表達在性別、年齡、Hans分型、分化程度、臨床分期上無顯著差異(P＞0.05)，但在療效、風險程度、3年PFS率及OS率上差異顯著(P＜0.05)；通過Pearson相關性分析，發現P53、PDL1均與疾病呈現正相關性(P＜0.05)，說明P53、PDL1可在彌漫大B細胞淋巴瘤組織上表達，且與療效及預后存在一定關系。

綜上所述，P53、PDL1可在彌漫大B細胞淋巴瘤組織上表達，且與患者預后有關，可成為評價預后的重要指標。