兒童和成人髓母細胞瘤免疫組織化學對比分析

徐欣,張國臣,夏慶欣,劉曉萌,王翦,陳忠平

(1.鄭州大學附屬腫瘤醫院/河南省腫瘤醫院 a.神經外科;b.病理科,河南 鄭州 450008;2.中山大學腫瘤防治中心 神經外科/神經腫瘤科,廣東 廣州 510060)

髓母細胞瘤(medulloblastoma,MB)是原發于中樞神經系統的一種惡性程度極高的神經上皮性腫瘤,由于腫瘤細胞形態很像胚胎時期的髓母細胞而得名,是一種胚胎殘余細胞性腫瘤,兒童和成人均可發病,兒童多見,目前影響MB發病年齡的機制尚不明確[1]。本文回顧性分析MB患者的病理免疫組織化學(immunohistochemistry,IHC)結果,旨在初步探索影響MB發病年齡的因素,現報告如下。

1 資料與方法

1.1 標本來源

收集鄭州大學附屬腫瘤醫院神經外科和中山大學腫瘤防治中心神經外科/神經腫瘤科2014年1月至2022年6月手術切除經病理證實的76例MB患者,男50例,女26例,年齡1～49[12(8.25,22.50)]歲。根據WHO中樞神經系統腫瘤[2]分類分級:經典型41例,促纖維增生/結節型14例,廣泛結節型8例,大細胞/間變型10例,非定類3例,均為WHO Ⅳ級。病理類型非定類。

1.2 分組

以18周歲為界分為兒童組(50例)和成人組(26例),見表1。兩組年齡差異有統計學意義(P<0.05),符合以年齡分組的實際;兩組腫瘤部位之間差異有統計學意義(P<0.05),為了排除腫瘤部位對兩組IHC比較的影響,進一步將患者分為兒童中線組(47例)、兒童非中線組(3例)、成人中線組(15例)、成人非中線組(11例),使數據具有可比性。

表1 兒童和成人MB患者一般資料分析

1.3 IHC項目

由于每例患者IHC項目不完全相同,結合文獻[3-4]選取以下IHC指標進行分析:上皮膜抗原(epithelial membrane antigen,EMA)、細胞角蛋白(cytokeratin,CK)、突觸素(synapsin,Syn)、嗜鉻素A(chromogranin A,CgA)、神經元特異性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)、神經元核抗原(neuronal nuclear antigen,NeuN)、少突膠質細胞轉錄因子-2(oligodendrocyte transcription factor-2,Oligo-2)、膠質纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、S-100蛋白,以上試劑購自丹麥Dako公司;CD99、CD34、p53基因購自北京中杉金橋公司。

1.4 IHC檢測

所有標本均經10%中性甲醛固定,常規脫水,石蠟包埋,4 μm厚切片,行EnVision二步法IHC染色,實驗步驟按試劑盒說明書進行,設陽性和陰性對照,染色完成后,用酒精進行脫水、清洗,二甲苯透明,以中性樹膠和蓋玻片封片。

1.5 判斷標準

在光學顯微鏡高倍視野下尋找對應IHC陽性細胞,隨機選取5個高倍視野分別計算陽性細胞占比,以5個占比的平均值作最終判斷。陽性細胞占比<10%定義為陰性,占比≥10%為陽性。

1.6 統計學方法

2 結果

兒童中線組和成人中線組、兒童非中線組和成人非中線組所有IHC指標之間差異無統計學意義(P>0.05)。見表2。

表2 兒童和成人MB患者IHC對比分析

3 討論

MB最早是由Bailey和Cushing于1925年命名的一種專指幕下的惡性神經上皮腫瘤,屬于原始神經外胚層腫瘤,兒童患者占全部MB的70%左右,男性多見,本研究兒童患者占65.8%,男女比例約為1.92∶1,與文獻數據相符。通過數據產生一些疑問:同為MB,為何發病年齡可以從幾月齡至成年?影響MB發病年齡的因素是什么?兒童和成人MB之間的差異是什么?如果能找到一個突破點將兒童MB患者發病年齡延遲至成年,或將極大改善MB患者的預后。

本研究從最基礎的MB的IHC結果進行探討,分析兒童和成人MB組織學之間的差異性,文獻中探討MB患者IHC指標表達意義的研究并不少見,但是比較兒童和成人之間差異的文獻不多。

EMA是上皮細胞分泌的一種乳脂小球膜糖蛋白,廣泛存在于人體各種上皮細胞中;CK是角質細胞中的一種骨架蛋白,主要分布于上皮細胞,與上皮細胞的增殖分化有關。雖然MB普遍被認為是一種神經上皮性腫瘤,但是上皮細胞IHC指標EMA和CK陽性率卻很低,分別為1.81%(1/55)和5.26%(3/57),兒童和成人之間差異無統計學意義,具體原因和機制暫不明確。

Syn是一種與突觸囊泡相連的突觸前酸性轉膜蛋白,具有特異性,可在大多數神經源性和神經內分泌腫瘤中表達;CgA是一組存在于嗜鉻細胞分泌顆粒中的可溶性酸性蛋白,常用來標記各種神經內分泌細胞及其來源的腫瘤,確切功能仍不十分清楚;NSE是參與糖酵解途徑的烯醇化酶中的一種,廣泛存在于神經元和神經內分泌細胞的胞質內,對神經元具有營養和保護功能,在MB中Syn比CgA更敏感,比NSE更特異。苗娜等[5]研究85例MB患者病理發現Syn陽性率達64%,馬海涵等[6]報道NSE在成人小腦MB中大部分呈強陽性。本研究Syn、CgA、NSE陽性率分別為95.95%(71/74)、43.14%(22/51)、96.88%(62/64),高于文獻報道。另外,NeuN是一種可溶性核蛋白,主要表達于發育成熟的神經細胞和神經內分泌細胞的細胞核和細胞質內,本研究NeuN陽性率為66.67%(22/33)。從神經內分泌IHC指標可以看出,MB被認為是神經內分泌腫瘤的說法合乎規范。但是各組之間差異無統計學意義,并不能解釋MB患者發病年齡的差異性。

CD99是一種細胞黏附因子,其功能尚未完全了解,張鵬等[7-8]報道CD99在MB的陽性率為57.94%(62/107),CD99的表達與MB預后負相關,并推測CD99有可能成為治療MB的一個新靶點,但是CD99與患者性別、年齡、腫瘤的組織學分型和分子分型均無相關性。另一種細胞黏附因子CD34,可以選擇性地表達于人類及其他哺乳動物造血干/祖細胞表面,并隨細胞的成熟逐漸減弱至消失[9]。本研究中CD99陽性率為73.17%(30/41),CD34陽性率為71.43%(25/35),且兩組間差異無統計學意義。可見CD99和CD34陽性率均較高,兩者陽性率極為接近,MB的發生發展可能與兩者未隨細胞的成熟逐漸消失有關,且兩者可能起協同作用,但是具體機制目前尚不清楚。S-100蛋白是一種酸性鈣結合蛋白,主要存在于中樞神經系統各部星狀神經膠質細胞的胞液中,因在飽和硫酸銨中100%溶解而得名[10],Yilmaz等[11]發現S-100蛋白在后顱窩MB和室管膜瘤中的陽性率為43%,且兩種腫瘤間差異無統計學意義。本研究S-100蛋白陽性率為55.88%(38/68),各組之間差異無統計學意義,可以認為S-100蛋白在成人MB中的作用與兒童MB相似,機制亦不明確。Oligo-2主要在少突膠質細胞前體細胞早期定向分化中起重要作用,確切作用及調控機制尚不清楚[12]。李濤等[13]報道兒童后顱窩MB中Oligo-2表達陽性率為66.6%(74/111),但未進行后續分析,本研究Oligo-2表達陽性率為55.88%(12/28),各組差異無統計學意義,Oligo-2在MB患者發生發展中的作用有待進一步研究。GFAP主要分布于中樞神經系統的星形膠質細胞,參與細胞骨架的構成并維持其張力強度。p53基因為人體抑癌基因,野生型促使癌細胞凋亡,從而防止癌變,p53的突變型會提高癌變。本研究兩者陽性率分別為66.67%(50/75)、50.00%(13/26),各組差異無統計學意義,GFAP在MB的發生發展中作用不詳,而p53基因突變可能在非中線MB患者中起作用,機制不詳。

4 結論

目前常見的IHC指標在MB中均未見明顯差異,從IHC角度不能解釋兒童和成人MB患者發病年齡的差別,影響MB發病年齡的原因目前仍不確定。不過,隨著MB分子分型研究的進一步成熟[14],未來一定會發現影響MB發病年齡的突破點,并針對性研發治療方案,從而延緩MB患者尤其是兒童患者的發病年齡,爭取更好的預后。