內鏡下胃癌活檢組織中組織蛋白酶D和人類表皮生長因子受體2表達及意義

韓少靜,郭永澤,鄭 揚,陳旭峰,宗 靜,向正國

(1.解放軍聯勤保障部隊第九〇四醫院消化內科,江蘇 無錫 214101;2.河北工程大學附屬醫院消化內科,河北 邯鄲 056008)

胃癌是臨床常見的消化道惡性腫瘤,其發生率及病死率均處于較高水平,給患者生命健康帶來巨大威脅[1]。手術是胃癌診斷及治療的主要方法,尤其是早期胃癌患者,其術后5年生存率超過94%,然而大多數患者確診為進展期胃癌,需要輔以放化療等綜合治療,臨床療效并不理想[2-3]。目前胃癌病因及發生機制尚未完全闡明,患者生存率難以提升,故探究胃癌新型治療方法及研發新型藥物成為關注的熱點及重點。近年來,分子生物學不斷發展,為胃癌早期診斷及靶向治療提供了新的技術手段。多項研究顯示,癌基因激活和抑癌基因失活在胃癌的發生及進展過程中發揮著至關重要的作用。組織蛋白酶D(Cathepsin-D,CTSD)作為一種侵襲調節分子,可直接參與細胞外基質和血管基底膜內蛋白成分水解過程,促進癌細胞的侵襲[4-5]。人類表皮生長因子受體2(Human epidermalgrowth factor receptor 2,HER2)已被證實在不同的腫瘤組織中均存在表達,在胃癌診療中的重要性逐步顯現[6-7]。因此,本研究探討內鏡下胃癌活檢組織中CTSD和HER2的表達及意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2018年1月至2019年1月于本院行內鏡活檢的胃癌患者81例為研究對象。其中,男性52例,女性29例;年齡≤60歲33例,>60歲48例;腫瘤直徑<5 cm 36例,≥5 cm 45例;中、高分化胃癌41例,低分化胃癌40例;Lauren分型中,腸型27例,彌漫型或混合型54例;幽門螺桿菌(HP)感染陽性58例,陰性23例;無淋巴結轉移37例,有淋巴結轉移44例;臨床分期中,Ⅰ-Ⅱ期35例,Ⅲ-Ⅳ期46例。病例納入標準:符合胃癌診斷標準[8];經病理學檢查證實為胃癌;術前未進行放化療等;臨床病理資料完整;患者或家屬簽署知情同意書。排除標準:有心、肝、腎等臟器功能嚴重障礙者;有其他器官腫瘤者;有慢性胃炎者;有自身免疫性疾病、血液系統疾病者。

1.2 研究方法

1.2.1 免疫組化法染色:取內鏡活檢標本,經4%福爾馬林固定后采用石蠟包埋。然后放在切片機連續切片,厚度約5 μm。取切片放入75 ℃烤箱,3 h后取出,采用二甲苯及梯度乙醇脫蠟至水。免疫組化法檢測CTSD、HER2在胃癌組織及癌旁正常組織中的表達,操作步驟嚴格按照試劑盒說明書進行操作。已知陽性標本為陽性對照,PBS代替一抗為陰性對照。CTSD、HER2單克隆抗體(批號:sc-37729、E24714)均購于武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司。判讀標準:無反應或細胞膜未發現染色,腫瘤細胞團微弱或隱約發現細胞膜染色(無論染色腫瘤細胞比例)為陰性;腫瘤細胞團有弱至中度基底側膜、側膜或完全的膜染色(無論染色腫瘤細胞比例,至少存在5個成簇腫瘤細胞著色)為疑似陽性;腫瘤細胞基側、膜、側膜或完全膜強染色(無論染色腫瘤細胞比例,至少存在5個成簇腫瘤細胞著色)為陽性。

1.2.2 隨訪:通過電話隨訪、門診復查的方式對患者進行為期5年的隨訪(自手術之日起至隨訪結束或死亡)。

1.3 統計學方法 采用SPSS 22.0統計學軟件分析數據。以[例(%)]表示計數資料,采用卡方檢驗分析CTSD、HER2表達與胃癌患者臨床特征的關系;采用Kaplan-Meier曲線進行生存分析,組間比較行Log-Rank檢驗;采用Cox比例風險回歸模型對胃癌患者預后進行多因素分析;P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 免疫組化染色結果 見圖1。CTSD在胃癌活檢組織中陽性表達率為46.91%(38/81例)。HER2在胃癌活檢組織中陽性表達率為20.99%(17/81例)。

圖1 內鏡下活檢胃癌組織中CTSD(左)和HER2(右)免疫組化染色結果(×200)

2.2 CTSD、HER2表達與胃癌患者臨床病理特征的關系 見表1。CTSD表達與胃癌分化程度、淋巴結轉移及臨床分期有關(均P<0.05)。HER2表達與胃癌分化程度、Lauren分型、淋巴結轉移及臨床分期有關(均P<0.05)。

表1 CTSD、HER2表達與胃癌患者臨床病理特征的關系[例(%)]

2.3 CTSD、HER2表達與胃癌患者預后的關系 見圖2。CTSD表達陽性患者5年生存率低于陰性患者(26.32%與55.81%,P<0.05)。HER2表達陽性患者5年生存率與陰性患者比較,差異無統計學意義(29.41%與45.31%,P>0.05)。

圖2 CTSD(左)、HER2(右)表達與胃癌患者預后的關系

2.4 胃癌患者預后影響因素Cox回歸分析 見表2。以患者預后為因變量,以性別(男性=1,女性=0)、年齡(>60歲=1,≤60歲=0)、腫瘤大小(≥5 cm=1,<5 cm=0)、分化程度(中高分化=1,低分化=0)、Lauren分型(彌漫型或混合型=1,腸型=0)、HP感染(陽性=1,陰性=0)、淋巴結轉移(有=1,無=0)、臨床分期(Ⅲ-Ⅳ期=1,Ⅰ-Ⅱ期=0)、CTSD表達(陽性=1,陰性=0)和HER2表達(陽性=1,陰性=0)為自變量,進行Cox回歸分析。結果顯示,Lauren分型、HP感染、淋巴結轉移、臨床分期及CTSD表達為胃癌患者預后的獨立影響因素(均P<0.05)。

表2 胃癌患者預后影響因素Cox回歸分析

3 討 論

胃癌為胃黏膜上皮惡性病變,已被證實與HP感染、飲食結構以及生活習慣等因素密切相關,然而其具體的發生機制尚未完全闡明[9]。胃癌細胞侵襲能力極強,可以向周圍組織、血管和淋巴管侵襲,進而向遠處轉移;同時,局部病灶內血供增加,使腫瘤細胞局部增殖能力明顯增強[10-11]。胃癌的早期診斷率較低,大部分患者在確診時已處于進展期,僅70%左右的患者可采取手術治療,然而術后50%左右的患者還會出現復發及轉移,化療成為晚期患者治療的主要手段,但臨床療效并不理想,不良反應較多,且常發生耐藥[12-13]。因此,早期診斷并積極有效的治療是減少胃癌患者病死率的關鍵。近年來,隨著分子生物學的不斷發展,胃癌早期診斷及分子靶向治療成為關注的重點及熱點課題之一[14-15]。

CTSD是一種天門冬氨酸水解酶,表達于不同組織細胞及腫瘤細胞,可參與誘導腫瘤細胞生長、抑制腫瘤細胞凋亡及促進間質成纖維細胞生長等過程。CTSD在乳腺癌、肝癌等惡性腫瘤中均存在異常表達,與腫瘤浸潤及轉移密切相關,是患者預后較差的標志物之一。有研究[5]顯示,CTSD可參與調控胃癌病灶內腫瘤細胞遷移及侵襲。本研究結果顯示,CTSD在胃癌活檢組織中陽性表達率為46.91%,其表達與胃癌分化程度、淋巴結轉移及臨床分期有關,提示CTSD在胃癌形成及進展過程中發揮重要作用。此外,本研究發現,CTSD表達陽性患者5年生存率低于陰性患者,且CTSD表達為胃癌患者預后的獨立影響因素。

HER2是一種原癌基因,屬于上皮生長因子受體家族,通常表達于人類胎兒期,在成年人組織內的表達水平較低。HER2可通過激活蛋白受體活化下游相關通路,進而參與調控細胞增殖、轉化及凋亡等過程。HER2表達異常上調是主要的致癌驅動因素,已被證實與多種腫瘤相關,尤其是乳腺癌及胃癌,多項研究[16-17]證實了抗HER2靶向藥物的有效性。關于HER2在胃癌中的研究[18]發現,HER2基因突變鑒定有助于研發HER2基因靶向制劑,準確評估HER2狀態成為臨床指導胃癌個性化治療的基礎及前體。本研究結果顯示,HER2在胃癌活檢標本中陽性表達率為20.99%,其表達與胃癌分化程度、Lauren分型、淋巴結轉移及臨床分期有關,提示HER2可能對胃黏膜正常組織細胞癌變起到促進的作用,加速了腫瘤惡性演變過程。這可能是由于HER2可參與抑制腫瘤細胞凋亡并促進血管內皮生長因子生成,有利于增加血管通透性及血管形成[19-20]。本研究中,HER2表達陽性與陰性患者5年生存率比較差異無統計學意義,可能與納入樣本量較少有關。

綜上所述,胃癌活檢組織CTSD和HER2表達與胃癌分化程度、淋巴結轉移等臨床病理特征相關,且CTSD表達可作為胃癌患者預后的獨立影響因素,在胃癌診斷及預后評估中具有重要意義。