基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)探討貫葉金絲桃黃酮類(lèi)成分對(duì)缺血性腦損傷的治療作用

張 巖，劉慶煥，王 宏，康 利，劉偉偉，陳 冠，傅 予

（天津市醫(yī)藥科學(xué)研究所，天津 300020）

貫葉金絲桃為藤黃科金絲桃屬植物貫葉金絲桃HypericumperforatumL.的干燥地上部分，具有多種藥理作用，為近年來(lái)研究的熱點(diǎn)草藥之一［1］。貫葉金絲桃中黃酮類(lèi)成分含量豐富，為其主要活性成分之一，具有抗炎、抗病毒、抗腫瘤等多種生理活性，可用于防治心腦血管疾?。?-4］。缺血性腦損傷具有高發(fā)病率和致殘率，為嚴(yán)重危害人類(lèi)生命健康的腦血管意外多發(fā)病［5］。研究證實(shí)黃酮類(lèi)化合物對(duì)缺血性腦損傷具有保護(hù)作用［6］，因此推測(cè)貫葉金絲桃中黃酮類(lèi)成分可能對(duì)缺血性腦損傷有一定保護(hù)作用。

網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)在揭示藥物、疾病關(guān)系方面具有整體性和系統(tǒng)性的特點(diǎn)，這與中藥多組分、多靶點(diǎn)的治病特點(diǎn)相吻合［7-8］。因此，本研究擬采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法揭示貫葉金絲桃中黃酮類(lèi)成分對(duì)缺血性腦損傷的治療作用，探討其多成分、多靶點(diǎn)的作用機(jī)制，并采用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)對(duì)其作用靶點(diǎn)進(jìn)行驗(yàn)證，以期為進(jìn)一步研究其治療缺血性腦損傷的作用機(jī)制奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)

1.1.1 貫葉金絲桃中黃酮類(lèi)活性成分及靶點(diǎn)篩選 基于中草藥藥理學(xué)分析平臺(tái)TCMSP （https：／／tcmspw.com／tcmsp.php） 檢索貫葉金絲桃中黃酮類(lèi)成分，并篩選口服生物利用度（OB） 值＞30%、類(lèi)藥性（DL） 值＞0.18 的黃酮類(lèi)成分；結(jié)合前期工作并檢索文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫(kù)獲取貫葉金絲桃中含有的已被證實(shí)的黃酮類(lèi)藥效成分，對(duì)于沒(méi)有收載的成分則利用ChemDraw 軟件繪制成分結(jié)構(gòu)并在molsoft 分析平臺(tái)上（http：／／www.molsoft.com／mprop／） 進(jìn)行類(lèi)藥性預(yù)測(cè)，選取類(lèi)藥性評(píng)分0.9 以上的成分。綜合檢索結(jié)果，最終獲得貫葉金絲桃中黃酮類(lèi)活性成分。

利用TCMSP 平臺(tái)檢索黃酮類(lèi)活性成分的相關(guān)靶點(diǎn)，對(duì)于平臺(tái)中沒(méi)有收錄靶點(diǎn)的成分，通過(guò)SwissTargetPredicition（https：／／www.swisstargetprediction.ch） 靶點(diǎn)預(yù)測(cè)平臺(tái)進(jìn)行靶點(diǎn)預(yù)測(cè)。

1.1.2 檢索缺血性腦損傷靶點(diǎn) 以“stroke” “cerebral ischemia” “ischemia” 為關(guān)鍵詞，利用TTD （https：／／bidd.nus.edu.sg／BIDD-Databases／TTD／TTD.asp） 數(shù)據(jù)庫(kù)、DrugBank （https：／／www.drugbank.ca） 數(shù)據(jù)庫(kù)檢索缺血性腦損傷疾病的相關(guān)靶點(diǎn)。

1.1.3 活性成分治療缺血性腦損傷潛在靶點(diǎn)預(yù)測(cè) 利用VENNY 2.1 平臺(tái) （https：／／bioinfogp.cnb.csic.es／tools／venny／index.html） 對(duì)成分靶點(diǎn)和疾病靶點(diǎn)構(gòu)建韋恩圖，并取交集以獲得兩者共有靶點(diǎn)，即為貫葉金絲桃黃酮類(lèi)成分治療缺血性損傷疾病的潛在靶點(diǎn)。

1.1.4 藥物成分-靶點(diǎn)-疾病網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 對(duì)貫葉金絲桃中黃酮類(lèi)成分、缺血性損傷疾病及其相關(guān)靶點(diǎn)構(gòu)建網(wǎng)絡(luò)分析模型并利用Cytoscape 軟件進(jìn)行可視化分析。

1.1.5 潛在靶點(diǎn)PPI 網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與分析 利用SRING 在線(xiàn)分析平臺(tái)（https：／／string-db.org／） 獲取潛在靶點(diǎn)蛋白與蛋白間相互作用關(guān)系（PPI），并將分析結(jié)果導(dǎo)入Cytoscape 3.2.1 軟件進(jìn)行可視化分析，并根據(jù)度值（Degree） 大小設(shè)置節(jié)點(diǎn)的大小、顏色，獲得最終的PPI 網(wǎng)絡(luò)。通過(guò)網(wǎng)絡(luò)節(jié)點(diǎn)中心性和網(wǎng)絡(luò)模塊2 種計(jì)算方式對(duì)PPI 網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行綜合分析，從中篩選貫葉金絲桃黃酮類(lèi)成分治療缺血性腦損傷的關(guān)鍵靶點(diǎn)。

1.1.6 靶點(diǎn)生物功能和通路分析 使用Metascape 數(shù)據(jù)庫(kù)，限定物種為人，設(shè)定閾值P＜0.01，綜合獲取貫葉金絲桃黃酮類(lèi)成分治療缺血性腦損傷相關(guān)靶點(diǎn)的生物功能注釋信息，并根據(jù)P值和富集結(jié)果對(duì)靶點(diǎn)基因本體論（GO） 和KEGG通路進(jìn)行篩選分析。

1.2 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

1.2.1 動(dòng)物 SPF 級(jí)健康雄性SD 大鼠40 只，體質(zhì)量160～180 g，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供［實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK （京） 2016-0006］，所有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)部分均符合天津市醫(yī)藥科學(xué)研究所動(dòng)物倫理委員會(huì)的要求（倫理號(hào)IMPS-EAEP-Z-Z2019017-01）。

1.2.2 藥物與試劑 貫葉金絲桃 （產(chǎn)地為四川，批號(hào)20190503） 購(gòu)于亳州中藥材批發(fā)市場(chǎng)，經(jīng)天津市醫(yī)藥科學(xué)研究所王文彤研究員鑒定為藤黃科植物貫葉金絲桃HypericumperforatumL.的干燥地上部分，取500 g 貫葉金絲桃藥材碎成粗粉，用60%乙醇加熱回流提取，過(guò)濾，濾液減壓回收乙醇至無(wú)醇味，加沸水溶解后抽濾，濾液用AB-8 大孔樹(shù)脂純化，不同體積分?jǐn)?shù)乙醇溶液洗脫，收集60%乙醇洗脫液，濃縮干燥，即得總黃酮提取物［9］。尼莫地平片（規(guī)格30 mg／片，批號(hào)2003004，天津市中央藥業(yè)有限公司）；AB-8 大孔吸附樹(shù)脂（批號(hào)20201110，英德市東鴻化工科技有限公司）；紅四氮唑 （TTC，貨號(hào)L09A10S83253，上海源葉生物科技有限公司）；線(xiàn)栓（貨號(hào)2432-A4，北京西濃科技有限公司）。

1.2.3 模型制備 術(shù)前大鼠禁食不禁水12 h，腹腔注射10%水合氯醛（3.5 mL／kg） 進(jìn)行麻醉，常規(guī)消毒，分離皮下組織，暴露頸內(nèi)動(dòng)脈（ICA）、頸外動(dòng)脈（ECA） 和右側(cè)頸總動(dòng)脈 （CCA），用5-0 號(hào)絲線(xiàn)結(jié)扎CCA 和ECA，在CCA 距離分叉處0.5 cm 左右剪一小口，將線(xiàn)栓送入切口并經(jīng)ICA 順行至中動(dòng)脈，遇到阻力時(shí)停止，即完成一側(cè)的MCAO 模型［10］，結(jié)扎ICA，縫合切口，2 h 后輕輕抽出線(xiàn)栓；假手術(shù)組只分離血管，不插線(xiàn)栓。術(shù)中白熾燈照射，使肛溫保持在（37±0.5）℃。

1.2.4 分組及給藥 將造模成功的大鼠按體質(zhì)量隨機(jī)分為模型組、尼莫地平組（陽(yáng)性對(duì)照，0.012 g／kg，相當(dāng)于臨床用量的6 倍）、總黃酮組（0.012 4 g／kg，折合為生藥量5.491 g／kg，相當(dāng)于臨床用量的4 倍）。造模當(dāng)天開(kāi)始灌胃給藥，每天1 次，連續(xù)7 d；假手術(shù)組和模型組灌胃給予等體積純凈水。

1.2.5 腦梗死面積比例測(cè)定 給藥結(jié)束后，大鼠斷頭取腦組織，冷鹽水沖洗，于-20 ℃放置10 min，切除嗅球、垂體、低位腦干，由前向后冠狀等分切成5 片。取腦片置于1% TTC 磷酸鹽緩沖液中，37 ℃避光溫育30 min，每5 min翻動(dòng)1 次，并用4% 多聚甲醛固定。正常腦組織呈玫瑰紅色，梗死組織呈白色，精確剝離梗死組織，電子天平精密稱(chēng)量梗死組織和全腦的質(zhì)量并記錄［11］。公式為腦梗死面積比例＝（梗死部位質(zhì)量／全腦質(zhì)量） ×100%。

1.2.6 HE 染色觀察腦組織病理變化 取大鼠腦組織，用10%甲醛溶液固定，常規(guī)HE 染色，于顯微鏡下觀察腦組織皮質(zhì)的形態(tài)學(xué)改變。

1.2.7 Western blot 法檢測(cè)腦組織INS、VEGFA、TNF-α 蛋白表達(dá) 取大鼠腦組織，提取總蛋白，經(jīng)電泳、轉(zhuǎn)膜、封閉后，孵育一抗、二抗，顯影發(fā)光后計(jì)算目的蛋白相對(duì)表達(dá)。

1.2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 通過(guò)SPSS 16.0 軟件進(jìn)行處理，計(jì)量資料以（±s） 表示，多組間比較用單因素方差分析。P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 貫葉金絲桃黃酮類(lèi)活性成分篩選 篩選得到貫葉金絲桃黃酮類(lèi)成分有5 種，分別為槲皮素、兒茶素、山柰酚、木犀草素和表兒茶素。結(jié)合前期檢測(cè)結(jié)果和文獻(xiàn)報(bào)道發(fā)現(xiàn)，貫葉金絲桃中異槲皮苷、金絲桃苷、阿福豆苷、紫云英苷、蘆丁均可進(jìn)入體內(nèi)代謝并具有藥理活性，經(jīng)預(yù)測(cè)槲皮素-3-O-β-D-吡喃阿拉伯糖苷類(lèi)藥性評(píng)分為0.93，說(shuō)明其成藥性良好。因此將上述11 種成分作為貫葉金絲桃黃酮類(lèi)活性成分進(jìn)行后續(xù)研究，活性成分信息見(jiàn)表1。

表1 貫葉金絲桃黃酮類(lèi)化學(xué)成分

2.2 黃酮類(lèi)活性成分治療缺血性腦損傷潛在靶點(diǎn)篩選 經(jīng)數(shù)據(jù)庫(kù)檢索和預(yù)測(cè)共獲得11 種活性成分的222 個(gè)潛在靶標(biāo)。TTD、DrugBank 數(shù)據(jù)庫(kù)中檢索的疾病靶點(diǎn)去除重復(fù)值，共得到539 個(gè)缺血性腦損傷靶點(diǎn)。利用VENNY 2.1 平臺(tái)構(gòu)建韋恩圖（圖1） 取交集，最終獲得活性成分治療缺血性腦損傷疾病的76 個(gè)潛在靶點(diǎn)。

圖1 成分-疾病靶點(diǎn)韋恩圖

2.3 藥物成分-靶點(diǎn)-疾病網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 “成分-靶點(diǎn)-疾病”網(wǎng)絡(luò)如圖2 所示，共有702 個(gè)節(jié)點(diǎn)，946 條邊，圖中綠色代表11 種黃酮類(lèi)成分，黃色表示成分靶點(diǎn)，藍(lán)色表示疾病靶點(diǎn)，紅色為76 種成分治療疾病的潛在靶點(diǎn)，其中成分節(jié)點(diǎn)大小按Degree 值的高低進(jìn)行設(shè)定，節(jié)點(diǎn)越大表示其可作用的潛在靶點(diǎn)越多，靶點(diǎn)邊線(xiàn)越多反映與其作用的成分越多，體現(xiàn)了貫葉金絲桃在治療缺血性腦損傷時(shí)具有多成分、多靶標(biāo)的特點(diǎn)。

圖2 成分-靶點(diǎn)-疾病網(wǎng)絡(luò)

2.4 潛在靶點(diǎn)PPI 網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與分析 利用SRING 在線(xiàn)分析平臺(tái)獲取潛在靶點(diǎn)的PPI，76 個(gè)靶點(diǎn)中只有74 個(gè)靶點(diǎn)具有相互作用，將具有相互作用的靶點(diǎn)進(jìn)行可視化分析，獲得最終的PPI 網(wǎng)絡(luò)（圖3），節(jié)點(diǎn)越大、顏色越紅表示與該節(jié)點(diǎn)相關(guān)作用的靶點(diǎn)越多，其在網(wǎng)絡(luò)中的地位越重要。

圖3 PPI 網(wǎng)絡(luò)

基于Cytoscape 軟件對(duì)PPI 網(wǎng)絡(luò)靶點(diǎn)進(jìn)行包括介度中心性（圖4A）、度中心性（圖4B） 和接近中心性（圖4C）在內(nèi)的網(wǎng)絡(luò)節(jié)點(diǎn)中心性進(jìn)行計(jì)算分析，分別篩選位于前十位的靶點(diǎn)建模；基于網(wǎng)絡(luò)模塊計(jì)算拓?fù)鋮?shù)，建立并選取評(píng)分最高的MCODE 模型（圖4D）。綜合2 種方式計(jì)算結(jié)果，取交集并進(jìn)行加權(quán)評(píng)分得到6 個(gè)關(guān)鍵性靶點(diǎn)INS、VEGFA、TNF、MAPK1、TP53、FOS，其中排名前三位的靶點(diǎn)分別為INS、VEGFA、TNF，推測(cè)其為貫葉金絲桃總黃酮治療缺血性腦損傷的關(guān)鍵靶點(diǎn)。

圖4 PPI 網(wǎng)絡(luò)分析模型

2.5 靶點(diǎn)生物功能和通路分析 GO 分析結(jié)果顯示，貫葉金絲桃關(guān)鍵靶點(diǎn)主要涉及了細(xì)胞質(zhì)膜微囊、質(zhì)膜筏和神經(jīng)元投射細(xì)胞質(zhì)等細(xì)胞成分；具有RNA 聚合酶Ⅱ基礎(chǔ)轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合、無(wú)序結(jié)構(gòu)域特異性結(jié)合、組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶結(jié)合等分子功能；并且參與了缺氧反應(yīng)中RNA 聚合酶Ⅱ啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄的正調(diào)控、急性炎癥反應(yīng)的負(fù)調(diào)控和神經(jīng)元投射維持等生物過(guò)程，表明貫葉金絲桃黃酮類(lèi)成分對(duì)缺血性腦損傷的治療作用與其對(duì)神經(jīng)調(diào)節(jié)和缺氧反應(yīng)調(diào)節(jié)有關(guān)，見(jiàn)圖5。

圖5 GO 分析結(jié)果

KEGG 通路富集分析發(fā)現(xiàn)，關(guān)鍵靶點(diǎn)發(fā)揮作用的主要通路為癌癥通路、卡波西肉瘤相關(guān)皰疹病毒感染、PI3KAkt 信號(hào)通路、流體剪應(yīng)力與動(dòng)脈粥樣硬化、人巨細(xì)胞病毒感染等信號(hào)通路，表明貫葉金絲桃黃酮類(lèi)成分對(duì)缺血性腦損傷的治療作用與其對(duì)這些通路的調(diào)控密切相關(guān)，見(jiàn)圖6。

圖6 KEGG 通路分析結(jié)果

2.6 貫葉金絲桃總黃酮對(duì)MCAO 大鼠缺血性腦損傷的影響

2.6.1 貫葉金絲桃總黃酮對(duì)MCAO 大鼠腦梗死面積比例的影響 如圖7、表2 所示，與假手術(shù)組比較，模型組大鼠腦組織出現(xiàn)明顯的腦缺血損傷現(xiàn)象，腦梗死面積比例增加（P＜0.01）；與模型組比較，陽(yáng)性藥組和總黃酮組大鼠腦梗死面積比例均減少（P＜0.01）。結(jié)果表明貫葉金絲桃總黃酮可以有效改善模型大鼠的腦缺血損傷程度。

圖7 各組大鼠腦組織TTC 染色

表2 貫葉金絲桃總黃酮對(duì)MCAO 大鼠腦梗死面積比例的影響（±s，n＝5）

表2 貫葉金絲桃總黃酮對(duì)MCAO 大鼠腦梗死面積比例的影響（±s，n＝5）

注：與假手術(shù)組比較，**P＜0.01；與模型組比較，＃＃P＜0.01。

組別腦梗死面積比例／%假手術(shù)組0模型組26.25±3.56**尼莫地平組7.87±2.53＃＃總黃酮組10.25±2.70＃＃

2.6.2 貫葉金絲桃總黃酮對(duì)MCAO 大鼠腦組織病理變化的影響 如圖8 所示，假手術(shù)組大鼠大腦皮層神經(jīng)細(xì)胞、膠質(zhì)細(xì)胞及毛細(xì)血管形態(tài)正常，結(jié)構(gòu)完整，核仁清晰，胞漿無(wú)紅染；模型組大鼠缺血側(cè)大腦皮層神經(jīng)元大片消失，錐體細(xì)胞明顯減少，排列紊亂，胞體變小，尼氏小體消失，核固縮深染，胞漿紅染，變性壞死后形成大量空泡，小膠質(zhì)細(xì)胞增生明顯，腦組織水腫，細(xì)胞間隙增寬；與模型組比較，陽(yáng)性藥組和總黃酮組大鼠缺血側(cè)大腦皮層病變明顯減輕，壞死神經(jīng)元減少，錐體細(xì)胞數(shù)量增多，形態(tài)結(jié)構(gòu)趨于正常，細(xì)胞核較規(guī)則，少量神經(jīng)元胞體變小，偶見(jiàn)膠質(zhì)細(xì)胞或巨噬細(xì)胞增生。結(jié)果表明貫葉金絲桃總黃酮可改善缺血性腦組織皮層病變，恢復(fù)神經(jīng)元細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)。

圖8 各組大鼠腦組織皮層HE 染色（×200）

2.6.3 貫葉金絲桃總黃酮對(duì)MCAO 大鼠腦組織INS、VEGFA 和TNF-α 蛋白表達(dá)的影響 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究結(jié)果顯示，INS、VEGFA 和TNF-α 為貫葉金絲桃總黃酮治療缺血性腦損傷中評(píng)分最高的3 個(gè)關(guān)鍵靶點(diǎn)。為了驗(yàn)證網(wǎng)絡(luò)分析結(jié)果的準(zhǔn)確性，本研究對(duì)大鼠腦組織INS、VEGFA 和TNFα 蛋白表達(dá)進(jìn)行了檢測(cè)，如圖9、表3 所示，與假手術(shù)組比較，模型組大鼠腦組織INS、VEGFA 和TNF-α 蛋白表達(dá)均升高（P＜0.01）；與模型組比較，總黃酮組大鼠腦組織INS和TNF-α 蛋白表達(dá)降低（P＜0.05，P＜0.01），VEGFA 蛋白表達(dá)升高（P＜0.05）。

圖9 各組大鼠腦組織INS、VEGFA 和TNF-α 蛋白表達(dá)

表3 貫葉金絲桃總黃酮對(duì)MCAO 大鼠腦組織INS、VEGFA 和TNF-α 蛋白表達(dá)的影響（±s，n＝5）

表3 貫葉金絲桃總黃酮對(duì)MCAO 大鼠腦組織INS、VEGFA 和TNF-α 蛋白表達(dá)的影響（±s，n＝5）

注：與假手術(shù)組比較，**P ＜0.01；與模型組比較，＃P ＜0.05，＃＃P＜0.01。

組別INSVEGFATNF-α假手術(shù)組0.14±0.020.08±0.020.20±0.04模型組0.39±0.03**0.27±0.08**0.55±0.08**總黃酮組0.31±0.07＃0.41±0.06＃0.34±0.06＃＃

3 討論

本研究結(jié)果顯示，貫葉金絲桃在治療缺血性腦損傷疾病中體現(xiàn)了多成分、多靶點(diǎn)協(xié)同治療的特點(diǎn)，其治療靶點(diǎn)間存在著相互關(guān)系，共同發(fā)揮作用，其中INS、VEGFA、TNF、MAPK1、TP53 和FOS 在整個(gè)復(fù)雜的靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)中具有核心調(diào)節(jié)作用，排名前三位的關(guān)鍵靶點(diǎn)為INS、VEGFA 和TNF。VEGF 為檢測(cè)腦梗死的一個(gè)重要指標(biāo)，參與了血管的滲透性、腦組織水腫及神經(jīng)功能的調(diào)節(jié)［12］。TNF 為重要的炎癥因子，其包含2 個(gè)成員TNF-α 和TNF-β，TNF-α 影響腦缺血區(qū)域細(xì)胞的壞死及凋亡程度［13］。研究顯示TNF-α 與INS 協(xié)同作用于腦梗死的發(fā)生發(fā)展過(guò)程，影響急性腦梗死患者的神經(jīng)受損狀況及預(yù)后，并且TNF-α 可促使VEGF 產(chǎn)生調(diào)控障礙，促進(jìn)腦卒中的形成和發(fā)展［14］。

KEGG 通路富集發(fā)現(xiàn)，貫葉金絲桃黃酮類(lèi)成分可通過(guò)癌癥通路、卡波西肉瘤相關(guān)皰疹病毒感染、PI3K-Akt 信號(hào)通路、流體剪應(yīng)力與動(dòng)脈粥樣硬化、人巨細(xì)胞病毒感染等多個(gè)通路發(fā)揮作用，表明貫葉金絲桃中黃酮類(lèi)成分對(duì)缺血性腦損傷的治療具有多成分、多靶點(diǎn)、多通路的作用特點(diǎn)，充分體現(xiàn)了中藥整體性、系統(tǒng)性的治病機(jī)制。

缺血性腦損傷的形成是由于局部腦血流的突然持續(xù)中斷，導(dǎo)致了大腦處于缺血缺氧狀態(tài)，造成了神經(jīng)功能障礙等腦組織損傷甚至壞死［15］，因此對(duì)缺血缺氧狀態(tài)及恢復(fù)神經(jīng)功能損傷的調(diào)節(jié)是治療缺血性腦損傷的重要途徑。經(jīng)網(wǎng)絡(luò)分析發(fā)現(xiàn)貫葉金絲桃黃酮類(lèi)成分關(guān)鍵靶點(diǎn)參與了缺氧反應(yīng)中RNA 聚合酶Ⅱ啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄的正調(diào)控、急性炎癥反應(yīng)的負(fù)調(diào)控和神經(jīng)元投射維持等生物過(guò)程，表明貫葉金絲桃黃酮類(lèi)成分可用于神經(jīng)調(diào)節(jié)、缺氧反應(yīng)調(diào)節(jié)和炎性反應(yīng)調(diào)節(jié)，初步印證了貫葉金絲桃黃酮類(lèi)成分可用于治療缺血性腦損傷，并能減輕缺血性腦損傷引起的神經(jīng)炎性反應(yīng)。

為了驗(yàn)證網(wǎng)絡(luò)分析結(jié)果，本研究通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步探討了貫葉金絲桃總黃酮改善缺血性腦損傷的治療作用，結(jié)果表明貫葉金絲桃黃酮類(lèi)成分可減輕大鼠腦缺血損傷程度，改善缺血性腦組織皮層及神經(jīng)元細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)病變，上調(diào)缺血腦組織VEGFA 蛋白表達(dá)，下調(diào)INS 和TNF 蛋白表達(dá)，進(jìn)而使腦缺血狀態(tài)和神經(jīng)功能得以恢復(fù)。

綜上所述，本研究證實(shí)了貫葉金絲桃總黃酮對(duì)缺血性腦損傷的治療作用，該作用可能是通過(guò)調(diào)控關(guān)鍵靶點(diǎn)INS、VEGFA 和TNF-α 的表達(dá)來(lái)實(shí)現(xiàn)，這與網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析結(jié)果一致，說(shuō)明該研究方法準(zhǔn)確可靠，能為貫葉金絲桃總黃酮在缺血性腦損傷治療方面的開(kāi)發(fā)應(yīng)用及作用機(jī)制深入研究提供科學(xué)依據(jù)。