糕點中脫氫乙酸檢測方法的改進

王俊杰

（河南中測技術檢測服務有限公司，河南鄭州 450000）

脫氫乙酸對霉菌、酵母菌等微生物的抑菌能力極強，是一種高效、廣譜、低毒的防腐劑，廣泛用于面包、糕點、果蔬汁、肉制品和醬腌菜等食品[1-4]。脫氫乙酸需要添加較高的劑量才能起效，如0.1%濃度可以有效抑制霉菌，0.4%濃度可以有效抑制細菌，因此很多從業者出于防腐效果的考慮，往往會超限量使用[5-10]。毒理學研究表明，脫氫乙酸會對人體的腎臟、肝臟以及中樞神經系統產生慢性毒性，并可能引發癌癥[11-16]。根據《食品安全國家標準 食品添加劑使用標準》（GB 2760—2014）[17]，我國目前規定糕點中的脫氫乙酸限量為0.5 g·kg-1，腌漬蔬菜、淀粉制品限量為1.0 g·kg-1，面包、果汁、肉制品、調料等其他產品的最大使用量不得超過0.3 ～0.5 g·kg-1。

《食品安全國家標準 食品中脫氫乙酸的測定》（GB 5009.121—2016）[18]規定了脫氫乙酸的液相色譜和氣相色譜檢測方法，其中應用最廣泛的是液相色譜檢測方法。本文在此標準的基礎上，改進了前處理方法，得到了更高的精度和加標回收率，為測定糕點中的脫氫乙酸提供了參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

標準品：餅干（指定值0.645 g·kg-1），大連中食國實檢測技術有限公司；脫氫乙酸標準儲備液（CAS 號：A22080082；ρ=2 000 μg·mL-1），壇墨質檢科技股份有限公司；乙酸銨（分析純），天津市永大化學試劑有限公司；甲醇（色譜純），美國默克公司；無水乙醇（分析純），天津市富宇精細化工有限公司。

1.2 儀器與設備

Waters 液相色譜儀，美國Waters 公司；二極管列陣檢測器，美國Waters 公司；XB-C18色譜柱（4.6 mm×150 mm，5 μm），中國月旭科技（上海）股份有限公司；優普純水機，美國Millipore 公司；電子天平，上海科創色譜科技有限公司；水浴鍋；超聲清洗儀；pH 試紙。

1.3 實驗方法

1.3.1 試劑配制

乙酸銨溶液（0.02 mol·L-1）：稱取1.54 g 乙酸銨，溶于水并稀釋定容至1 L；氫氧化鈉溶液（20 g·L-1）：稱取2 g 氫氧化鈉，溶于水并稀釋定容至100 mL。

1.3.2 標準溶液的配制

脫氫乙酸標準工作液：分別吸取脫氫乙酸標準儲備液10.0 μL、25.0 μL、50.0 μL、75.0 μL、100.0 μL、125.0 μL 和150.0 μL，置于1 mL 容量瓶中，用水稀釋至刻度，得到濃度分別為20 μg·mL-1、50 μg·mL-1、100 μg·mL-1、150 μg·mL-1、200 μg·mL-1、250 μg·mL-1和300 μg·mL-1的系列標準溶液。

1.3.3 樣品處理

精確稱取2 g 樣品（精確至0.001 g），置于25 mL離心管中，依次加入約10 mL 純水，5 mL 無水乙醇，渦旋搖勻，用氫氧化鈉溶液（20 g·L-1）調節pH 至8.0，加無水乙醇稀釋定容至25 mL，再次搖勻。超聲提取30 min，轉移至離心管中，10 000 r·min-1離心3 min，取上清液過0.22 μm 有機濾膜后上機測定。1.3.4 測定

以色譜峰的保留時間定性，確定脫氫乙酸的色譜峰，再根據峰面積外標法定量測得脫氫乙酸的具體含量。具體過程：將標準溶液和測定溶液注入液相色譜儀，分別測得相應的峰面積，以標準工作溶液濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，根據標準曲線得到測定溶液中的脫氫乙酸濃度。

1.4 液相色譜條件

色譜柱：C18（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流動相：乙酸銨+甲醇＝95+5（V/V）；流速：1.0 mL·min-1；柱溫：30 ℃；進樣體積：10 μL；檢測波長：293 nm；waters 2695/waters 2996 二極管列陣檢測器。

2 結果與分析

2.1 樣品前處理方法的選擇

按照GB 5009.121—2016 標準中的方法，對面包、糕點類樣品進行前處理時，分別加入硫酸鋅和氫氧化鈉等試劑、調節pH、超聲萃取后，需要用正己烷分層萃取，在這個過程中，由于步驟比較煩瑣，容易出現樣品中脫氫乙酸提取不充分、分層不清晰等情況，造成準確度和加標回收率不高，常低于80%。用改進后的方法，由于脫氫乙酸易溶于無水乙醇及氫氧化鈉溶液，提取比較充分，提高了結果的準確性及加標回收率，且此方法不用萃取分層，步驟簡單，對比結果見表1。

表1 兩種不同前處理脫氫乙酸的加標回收率

2.2 方法的準確性

稱取約2 g 標準品，按1.3.3 方法處理，測定峰面積，并計算回收率，檢測結果見表2。表2 數據表明，回收率符合實驗室質量控制相關標準[19-20]要求。

表2 兩種不同前處理脫氫乙酸的準確度

2.3 稱樣質量的確定

實驗過程發現，改進方法的稱樣量對結果的準確度和加標回收率有較大影響，通過稱取1 g、2 g和5 g 樣品對比發現，稱取約2 g 的結果最接近真值（0.645 g·kg-1），準確度最高。對比結果見表3。

表3 3 種不同稱樣質量測得脫氫乙酸的準確度

2.4 方法的重復性

在空白糕點中加入脫氫乙酸標準溶液制得濃度為0.250 g·kg-1的模擬樣品，按上述方法處理，重復進樣6 次，測定含量，計算相對標準偏差，結果見表4。經測定和計算，進樣6 次的RSD 為0.87%，說明方法的重復性較好。

表4 改進方法前處理模擬樣品含量

2.5 標準曲線與檢出限

取脫氫乙酸的標準工作液分別進樣，進樣體積為10 μL，測定峰面積。以濃度（μg·mL-1）為橫坐標、峰面積(μv·S-1)為縱坐標，進行回歸分析。通過測定和計算，濃度、峰面積的線性回歸方程為y=30 280x-58 508，相關系數為0.999 8。采用溶液稀釋法，不斷稀釋脫氫乙酸標準溶液，在不改變色譜條件的情況下進行測定，按樣品取樣量為2 g，檢出限為0.001 5 g·kg-1，該結果低于現行國標方法的檢出限[21]。

3 結論

本研究優化改進了糕點中脫氫乙酸測定的前處理方法，檢出限、重復性、準確度和加標回收率驗證結果表明，該方法能達到現行標準的要求。該方法節省了有機試劑的使用量，精簡了操作步驟，實驗過程更為省時省力，在食品實驗室大批量檢測時有較為明顯的優勢。