三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用儀同時測定醬腌菜中紐甜、三氯蔗糖的方法研究

姜 薇，高增興，王珊珊，高金芳，張貴秋，馬英紅

（濰坊市產(chǎn)品質(zhì)量檢驗所，山東濰坊 261031）

隨著社會經(jīng)濟(jì)的不斷發(fā)展，人們的物質(zhì)生活水平持續(xù)提高，對高品質(zhì)生活越來越重視，健康、能量低的食物越來越受到人們的青睞。蔗糖是一種增加甜味的物質(zhì)，長期攝入容易引起齲齒、肥胖癥、高血壓、高血脂、高血糖等病癥，為在不影響人們的健康前提下解決口感問題，研發(fā)出了甜味劑，紐甜和三氯蔗糖應(yīng)運(yùn)而生。紐甜，白色結(jié)晶粉末狀，是一種非營養(yǎng)類增甜劑，甜度約為蔗糖的8 000 ～10 000 倍，因穩(wěn)定性良好而被廣泛應(yīng)用于食品中[1-2]。基于此性質(zhì)，醬腌菜等食品中經(jīng)常檢出紐甜，但紐甜進(jìn)入人體后會迅速代謝，在機(jī)體內(nèi)存留時間短，其代謝產(chǎn)物主要是脫脂化紐甜，這種物質(zhì)會隨著尿液或糞便等代謝物排出體內(nèi)，不會對人體造成傷害，與糖精鈉、甜菊糖苷、甜蜜素等增甜劑相比，有較為明顯的優(yōu)勢。三氯蔗糖顏色與狀態(tài)和紐甜相似，甜度是紐甜的3/40，優(yōu)點(diǎn)是低熱值、無臭、甜味品質(zhì)及熱穩(wěn)定性好，受光、熱、pH 值變化的影響較小，甜味特性接近蔗糖，無后苦味，是一種不會導(dǎo)致齲齒的強(qiáng)力甜味劑[3]。食用后不會引起血糖波動，對糖尿病患者比較友好[4-5]。

紐甜采用《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中紐甜的測定》（GB 5009.247—2016）中的方法進(jìn)行檢測，三氯蔗糖采用《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中三氯蔗糖（蔗糖素）的測定》（GB 22255—2014）中的方法進(jìn)行檢測，兩者前處理方法不同，上機(jī)檢測使用的設(shè)備不同，這大大降低了工作效率。使用同一前處理方法、同一設(shè)備上機(jī)檢測可大大提高工作效率。本方法采用HLB 固相萃取柱，使用同一前處理方法，使用三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用儀同時上機(jī)檢測，將檢測結(jié)果與原方法測定結(jié)果進(jìn)行比對，分析結(jié)果的準(zhǔn)確度。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

烤咸疙瘩（濰坊特產(chǎn)）；三乙胺，分析純，天津科密歐有限公司；甲酸，色譜純，天津科密歐有限公司；乙腈，色譜純，美國Thermo Fisher 有限公司；紐甜標(biāo)準(zhǔn)品，純度99%，北京壇墨質(zhì)檢有限公司，CAS 號為165450-17-9；三氯蔗糖標(biāo)準(zhǔn)品，純度99%，北京壇墨質(zhì)檢有限公司，CAS 號為56038-13-2；HLB 固相萃取柱，200 mg/6 mL，納譜分析技術(shù)有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用儀（配四元泵），美國Thermo Fisher 有 限 公 司； 超 純 水 機(jī)，Think-lab Corporation； 電 子 天 平， 萬 分 之 一，METTLER TOLEDO（上海）儀器有限公司；離心機(jī)，山東百歐醫(yī)療科技有限公司；氮吹儀，天津奧特賽恩斯儀器有限公司。

1.3 試驗方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)工作液的配制

紐甜儲備液（10 mg·mL-1）：稱取1 g 紐甜標(biāo)準(zhǔn)品，加水定容至100 mL。三氯蔗糖儲備液（10 mg·mL-1）：稱取1 g 三氯蔗糖標(biāo)準(zhǔn)品，加水定容至100 mL。紐甜標(biāo)準(zhǔn)溶液（100 μg·mL-1）：準(zhǔn)確吸取1 mL 紐甜儲備液，加水定容至100 mL。三氯蔗糖標(biāo)準(zhǔn)溶液（1 000 μg·mL-1）：準(zhǔn)確吸取1 mL 三氯蔗糖儲備液，加水定容至10 mL。混合標(biāo)準(zhǔn)工作液：分別吸取適量10 mg·mL-1紐甜、三氯蔗糖儲備液，用水將其配制成濃度為0.2 μg·mL-1、1.0 μg·mL-1、2.0 μg·mL-1、5.0 μg·mL-1、15.0 μg·mL-1和20.0 μg·mL-1的系列混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.3.2 前處理

分別吸取0.40 mL 甲酸和1.25 mL 三乙胺，加水定容至500 mL，pH 值約為4.5，得提取液。

準(zhǔn)確稱取10 g（精確到0.000 1 g）烤咸疙瘩，將其置于50 mL 具塞塑料離心管中，分別加入100 μg·mL-1標(biāo)準(zhǔn)溶液20 μL（紐甜定量限）、1 000 μg·mL-1標(biāo)準(zhǔn)溶液25 μL（三氯蔗糖檢出限），振蕩混勻，加入30 mL提取液，超聲15 min，定容至50 mL。5 000 r·min-1離心10 min，取上清液10 mL，過HLB 固相萃取柱，以5 mL 甲醇洗脫，將洗脫液置于氮吹儀（40 ℃水浴氮吹）中濃縮，以初始流動相定容至2 mL，過濾膜（0.22 μm），待上機(jī)分析。同時做空白試驗。1.3.3 色譜條件的選擇

色譜柱：NanoChromCore C18（2.1 mm×100 mm，1.8 μm）；柱溫：30 ℃；流速：0.25 mL·min-1；進(jìn)樣量：5 μL；流動相：A 為0.01%甲酸溶液，B 為乙腈，具體洗脫梯度見表1。

表1 流動相洗脫梯度

1.3.4 質(zhì)譜條件的選擇

掃描方式：多級反應(yīng)監(jiān)測（Multiple Reaction Monitoring，MRM）；離子源：ESI，負(fù)離子模式；噴霧電壓：3 000 ℃；離子傳輸管溫度：325 ℃；蒸汽溫度：350 ℃；鞘氣：35 arb；輔助氣：10 arb。具體化合物離子信息見表2。

表2 化合物母離子、子離子及碰撞能量

2 結(jié)果與分析

2.1 檢測設(shè)備的選擇

三氯蔗糖在國家標(biāo)準(zhǔn)方法中無紫外光區(qū)特征吸收峰，故采用示差檢測器測定，但示差檢測器選擇性差，容易出現(xiàn)假陽性。紐甜在國家標(biāo)準(zhǔn)方法中使用紫外檢測器或二極管陣列檢測器，定性相對不準(zhǔn)確。本文采用三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用儀檢測，以提高檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，避免假陽性。如圖1 所示，紐甜和三氯蔗糖峰位處平穩(wěn)清晰，峰型對稱且目標(biāo)峰處沒有雜峰干擾，特異性和專一性良好。

圖1 空白樣品中添加20.0 μg·mL-1 紐甜和三氯蔗糖的色譜圖

2.2 流動相的選擇

紐甜在國家標(biāo)準(zhǔn)方法中使用離子對試劑緩沖液作為流動相，試劑配制較復(fù)雜。本方法采用0.01%甲酸溶液和乙腈作為流動相，簡化了試劑的配制過程，提高工作效率，如圖1 所示，紐甜和三氯蔗糖峰位處無雜峰出現(xiàn)。

2.3 定量限和檢出限的確定

按照食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)中的計算公式，紐甜定量限為0.2 mg·kg-1，三氯蔗糖檢出限為2.5 mg·kg-1。在空白樣品中按照紐甜定量限、三氯蔗糖檢出限濃度加標(biāo)，按1.3.2 前處理、按1.3.3 色譜條件、1.3.4質(zhì)譜條件上機(jī)檢測。結(jié)果表明，紐甜和三氯蔗糖信噪比均大于10，符合要求。

2.4 精密度試驗

取3 個不同濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，分別連續(xù)測定6 次，測試方法精密度，保留時間和峰面積的重復(fù)性結(jié)果見表3。結(jié)果顯示，紐甜不同濃度標(biāo)準(zhǔn)工作溶液保留時間和峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（Relative Standard Deviation，RSD）分別為0.168%～0.173%、0.158%～0.165%，三氯蔗糖不同濃度標(biāo)準(zhǔn)工作溶液保留時間和峰面積的RSD 分別為0.879%～0.915%、0.875%～0.901%，均小于5%，精密度良好。

表3 不同濃度混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液精密度試驗結(jié)果 單位：%

2.5 回收率測定

取烤咸疙瘩空白樣品按1.3.2 進(jìn)行前處理，按1.3.3 色譜條件、1.3.4 質(zhì)譜條件上機(jī)檢測，該樣品紐甜和三氯蔗糖檢測結(jié)果均為未檢出。紐甜和三氯蔗糖分別在3 個水平下做加標(biāo)回收試驗，結(jié)果見表4，紐甜回收率為94.05%～111.33%，三氯蔗糖回收率為90.13%～111.99%。紐甜、三氯蔗糖回收率均在80%～120%，符合要求。

表4 回收率結(jié)果 單位：%

3 結(jié)論

以0.01%甲酸溶液和乙腈作為流動相，建立三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用儀同時檢測紐甜和三氯蔗糖的方法。結(jié)果表明，峰位處平穩(wěn)清晰，無雜峰出現(xiàn)；紐甜定量限為0.2 mg·kg-1、三氯蔗糖檢出限為2.5 mg·kg-1，信噪比均大于10；紐甜、三氯蔗糖3 個不同濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液的保留時間和峰面積RSD 均小于5%，精密度良好；對空白樣品做紐甜、三氯蔗糖3個水平加標(biāo)回收試驗，回收率均在80%～120%，符合要求。綜上所述，該方法簡便、快捷，靈敏度高、精密度好、回收率符合要求。專用化學(xué)品,2005(15):15-17.

[2] 周家華,崔英德,曾顥.食品添加劑[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2008.

[3] 姜維強(qiáng).三氯蔗糖在食品中的運(yùn)用[J].化工設(shè)計通訊,2017,43(3):151.

[4] 陳曉霞,游景水,楊祖?zhèn)?等．高效液相色譜法測定保健食品中三氯蔗糖的含量[J].食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報,2015,6(5):1883-1888.

[5] 張莉.高效液相色譜法測定飲料中三氯蔗糖的含量[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志,2007(10):1784-1786.