微生物檢測技術(shù)在生活飲用水檢驗(yàn)中的應(yīng)用效果研究

高 敏，周偉偉

（陽谷縣疾病預(yù)防控制中心，山東聊城 252300）

生活飲用水是指供人生活的飲水和用水。生活飲用水在經(jīng)過凈化處理后微生物含量及數(shù)量已明顯降低，但生活中潛在的水源污染、管網(wǎng)污染、二次供水污染等仍可能會導(dǎo)致生活飲用水中的出現(xiàn)致病微生物或有毒有害物質(zhì)，從而使生活飲用水衛(wèi)生質(zhì)量不合格[1]。采用微生物檢測技術(shù)對生活飲用水中相關(guān)微生物指標(biāo)進(jìn)行檢測，能夠幫助人們判斷生活飲用水的衛(wèi)生質(zhì)量是否符合國家制定的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。一般情況下，生活飲用水中的常見的致病微生物有腸道致病菌、病毒、水性致病原蟲和蠕蟲等，其中菌落總數(shù)和腸道菌群（如總大腸菌群、耐熱大腸桿菌）等是檢測的重點(diǎn)。基于此，本文分析了微生物檢測技術(shù)在生活飲用水檢驗(yàn)中的應(yīng)用效果，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 樣品來源

生活飲用水樣品來源于2020 年1 月至2022 年1 月送檢的集中供水共520 份，包含末梢水132 份（25.38%）、二次供水365 份（70.19%），直飲水23 份（4.42%）；豐水期樣品260 份（50.00%），枯水期樣品260份（50.00%）。所有水樣品儲存均符合相關(guān)要求，無污染、滲漏狀況。

1.2 檢測方法

檢測依據(jù)為《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法 水樣的采集與保存》（GB/T 5750.2—2006）、《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法 微生物指標(biāo)》（GB/T 5750.12—2006）。

（1）菌落總數(shù)檢測。采用平板計(jì)數(shù)法進(jìn)行菌落總數(shù)檢測。吸取待測水樣1 mL，注入滅菌平皿中，傾注培養(yǎng)基，混勻水樣和培養(yǎng)基。將培養(yǎng)基放在培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)48 h，之后通過生物顯微鏡（B203 生物顯微鏡，重慶市奧特光學(xué)儀器有限責(zé)任公司）對水樣中的菌落總數(shù)進(jìn)行計(jì)數(shù)。

（2）總大腸菌群檢測。采用多管發(fā)酵法進(jìn)行總大腸菌群檢測，使用實(shí)驗(yàn)室制備的3 倍濃縮乳糖蛋白胨培養(yǎng)液培養(yǎng)24 h，培養(yǎng)溫度37 ℃，觀察產(chǎn)酸產(chǎn)氣情況。出現(xiàn)產(chǎn)酸產(chǎn)氣視為陽性管培養(yǎng)物，需要進(jìn)行進(jìn)一步操作，即接種在伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上，觀察菌落狀況，并進(jìn)行革蘭氏染色和鏡檢。

（3）耐熱大腸菌群檢測。采用多管發(fā)酵法進(jìn)行耐熱大腸菌群檢測，先進(jìn)行初步發(fā)酵試驗(yàn)，采用3 倍濃縮乳糖蛋白胨培養(yǎng)液于37 ℃條件下培養(yǎng)24 h。觀察產(chǎn)酸產(chǎn)氣情況，將出現(xiàn)產(chǎn)酸產(chǎn)氣的發(fā)酵管中的菌落分別接種于伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基，于44 ～45 ℃條件下培養(yǎng)24 h。觀察再次培養(yǎng)后發(fā)酵管的產(chǎn)酸產(chǎn)氣情況，選出產(chǎn)酸產(chǎn)氣的發(fā)酵管的菌落，接種于乳糖蛋白胨培養(yǎng)液中，置于37 ℃條件中培養(yǎng)24 h，再進(jìn)行鏡檢。

（4）大腸埃希氏菌檢測。采用多管發(fā)酵法進(jìn)行檢測，對總大腸菌群初步發(fā)酵試驗(yàn)中出現(xiàn)產(chǎn)酸產(chǎn)氣的陽性管進(jìn)行檢測，接種后于45 ℃條件下培養(yǎng)24 h，通過紫外燈照射觀察有無藍(lán)色熒光，若有則表明存在大腸埃希氏菌，則應(yīng)計(jì)算陽性管數(shù)。

1.3 觀察指標(biāo)及評定標(biāo)準(zhǔn)

（1）觀察指標(biāo)。觀察不同來源水樣品的微生物檢測結(jié)果以及豐水期、枯水期水樣品的微生物檢測結(jié)果，包括菌落總數(shù)、腸道菌群。

（2）評定標(biāo)準(zhǔn)。參照《生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》（GB 5749—2022）進(jìn)行評定。菌落總數(shù)≤100 CFU·mL-1判定為合格；腸道菌群（總大腸菌群、耐熱大腸菌群、大腸埃希氏菌）的合格標(biāo)準(zhǔn)為每100 mL 中最大可能數(shù)（MPN）不得檢出。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 25.0 軟件對相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同來源水樣品的微生物檢測結(jié)果比較

末梢水、二次供水、直飲水的菌落總數(shù)結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），其中直飲水的菌落總數(shù)檢測合格率最低，為60.87%。末梢水、二次供水、直飲水的腸道菌群（總大腸菌群、耐熱大腸桿菌、大腸埃希氏菌）合格率差異不顯著（P＞0.05），見表1。

表1 不同來源水樣品的微生物檢測結(jié)果比較表[n（%）]

2.2 豐水期、枯水期水樣品的微生物檢測結(jié)果比較

豐水期水樣品的菌落總數(shù)合格率低于枯水期（P＜0.05），豐水期的腸道菌群檢測合格率與枯水期差異不明顯（P＞0.05），見表2。

表2 豐水期、枯水期水樣品的微生物檢測結(jié)果比較[n（%）]

3 討論

水中常見的微生物有細(xì)菌、病毒、真菌、噬菌體、原生動(dòng)物等，大多數(shù)需要處理后才能作為生活飲用水[2]。根據(jù)現(xiàn)行的《生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》（GB 5749—2022），生活飲用水應(yīng)不含有病原微生物和寄生蟲卵。然而受環(huán)境污染、水體滯留變質(zhì)、回流污染等各種因素的影響，近年來水污染問題突出，若生活飲用水中的微生物超標(biāo)，則可能會造成水源性傳染性疾病的暴發(fā)流行，對人們的健康及生命安全構(gòu)成威脅[3]。因此，需要對生活飲用水進(jìn)行檢驗(yàn)，并將檢測結(jié)果作為判斷水質(zhì)衛(wèi)生狀況的依據(jù)。

微生物檢測技術(shù)是檢驗(yàn)生活飲用水的常用方法，檢測項(xiàng)目主要包括菌落總數(shù)、總大腸菌群、耐熱大腸菌群等。微生物檢測技術(shù)檢測生活飲用水的步驟包括采集水樣、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)、結(jié)果分析，其中采集水樣主要是對生活飲用水進(jìn)行采集，如末梢水、二次供水、直飲水等，在采集水樣后需要在4 h 內(nèi)完成檢驗(yàn)[4]。實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)應(yīng)根據(jù)待測項(xiàng)目選擇適宜的檢驗(yàn)方法，如采用多管發(fā)酵法檢測總大腸菌群、耐熱大腸菌群，采用平皿技術(shù)法檢驗(yàn)菌落總數(shù)等。在實(shí)際應(yīng)用中，需要檢驗(yàn)人員根據(jù)檢測需求靈活選擇微生物檢測技術(shù)，確保檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

本研究主要對520 份水樣進(jìn)行微生物檢驗(yàn)，末梢水、二次供水、直飲水的菌落總數(shù)檢測結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），其中直飲水的菌落總數(shù)檢測合格率最低，為60.87%。可能是因?yàn)槟┥宜⒍喂┧浅鞘屑泄┧驹O(shè)施、制度管理、供水管道設(shè)施相對完善，衛(wèi)生狀況較好，而直飲水主要來源于農(nóng)村中小學(xué)，受設(shè)備簡陋、工程建設(shè)標(biāo)準(zhǔn)較低、消毒設(shè)施較為落后、消毒工藝不完善、缺乏完善的管理制度等因素影響，導(dǎo)致水質(zhì)衛(wèi)生狀況較差，菌落總數(shù)合格率偏低。總大腸菌群、耐熱大腸菌群、大腸埃希氏菌等腸道菌群可以反映糞便污染情況，水質(zhì)中存在大量大腸桿菌容易導(dǎo)致腸道傳染性疾病暴發(fā)流行[5]。本次檢測結(jié)果表明，末梢水、二次供水、直飲水的腸道菌群合格率差異不明顯（P＞0.05），表明末梢水、二次供水、直飲水均未出現(xiàn)糞便污染的情況。豐水期水樣品的菌落總數(shù)合格率低于枯水期（P＜0.05），豐水期的腸道菌群合格率與枯水期差異不明顯（P＞0.05），提示豐水期的水質(zhì)稍差，而枯水期的水質(zhì)較好。分析原因可能是豐水期一般在5—10 月，這一時(shí)段氣溫高、水量大且不穩(wěn)定、水中雜質(zhì)多、水流速較快使水中的雜質(zhì)難以沉淀，而且微生物在此階段也大量繁殖，導(dǎo)致豐水期的微生物檢出率較高，水質(zhì)較差；而枯水期主要出現(xiàn)在少雨或無雨的季節(jié)，水流少、流速緩慢、水中雜質(zhì)容易沉淀，水質(zhì)相對較好[6]。

4 結(jié)論

綜上所述，使用微生物檢測技術(shù)檢驗(yàn)生活飲用水中菌落總數(shù)、腸道菌群，能夠幫助相關(guān)部門了解不同來源（末梢水、二次供水、直飲水）及豐水期、枯水期的水樣品中微生物分布狀況，對于判定生活飲用水質(zhì)是否合格極為關(guān)鍵，具有較高的應(yīng)用價(jià)值。