血清G-17、PGRN、TFF3與Hp陽性胃潰瘍患者炎癥活動度的關系及對治療后潰瘍愈合效果的預測價值*

劉海波,郭慶波,王曉蕾,何慶云,楊淑霞,孟凡杰

濰坊市益都中心醫院檢驗科,山東濰坊 262500

胃潰瘍是臨床常見的消化道慢性系統性疾病,幽門螺桿菌(Hp)感染為其主要病因,此外該病還受飲食、藥物、應激精神及遺傳等因素影響,胃黏膜在胃酸及胃蛋白酶作用下消化自身最終形成潰瘍,可造成上腹部疼痛、出血甚至穿孔,嚴重影響患者身心健康[1-2]。胃潰瘍的病理變化為各種因素導致炎癥及氧化應激增加,破壞胃壁的黏膜屏障,其中Hp感染后誘導的胃黏膜慢性炎癥是重要因素[3]。隨著質子泵抑制劑的出現,Hp陽性胃潰瘍的治愈率有所提高,但難治性潰瘍、潰瘍復發及潰瘍癌變等仍是臨床亟待解決的問題[4]。因此,有效地監測Hp陽性胃潰瘍的病情變化并了解影響潰瘍愈合的相關因素,制訂針對性治療策略對于提高治療效果具有重要意義。胃酸分泌過多是造成胃潰瘍的直接原因,其分泌水平與胃泌素-17(G-17)水平相關[5],研究發現,隨著潰瘍的愈合,患者的血清G-17水平下降,說明G-17與潰瘍的愈合有關[6]。顆粒蛋白前體(PGRN)是一種新型的生長因子,參與細胞的生長、腫瘤發生、傷口愈合和炎癥反應等機體多種病理、生理進程,研究發現,其水平變化與胃潰瘍的臨床病理特征及預后有關[7]。三葉因子3(TFF3)是特定表達于胃腸道中的結構蛋白,其水平變化與胃腸黏膜的損傷、修復、增殖及惡變等病理、生理功能相關[8],研究認為,TFF3表達上調能促進潰瘍性結腸炎大鼠腸黏膜的愈合,說明TFF3的表達變化與炎癥性胃潰瘍的腸黏膜功能有關[9]。G-17、PGRN、TFF3均參與消化道炎癥性疾病的發生,其與Hp陽性胃潰瘍的關系仍需進一步明確。故本研究探討Hp陽性胃潰瘍患者血清G-17、PGRN、TFF3水平變化與炎癥活動度的關系及對治療后潰瘍愈合效果的預測價值,旨在為該疾病的治療研究提供參考。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2019年9月1日至2021年8月30日本院收治的Hp陽性胃潰瘍患者145例,作為潰瘍組。納入標準:(1)年齡≥18歲;(2)符合《消化性潰瘍診斷與治療規范(2016年,西安)》[10]中胃潰瘍的診斷標準;(3)經胃鏡、病理學檢查確診為活動性潰瘍(潰瘍數量≤2個,直徑<20 mm);(4)入組前1個月內未使用抗菌藥物、抑酸劑、胃黏膜保護劑等相關治療藥物;(5)14C-尿素呼吸實驗(14C-UBT)≥100 dpm/mmoL CO2為Hp陽性;(6)有完整的臨床病歷資料;(7)對本次研究內容均知情同意,且簽署同意書。排除標準:(1)存在潰瘍性惡變、癌前病變、胃食管反流及其他器官或組織惡性病變;(2)存在免疫系統疾病、血液系統疾病、其他急慢性或嚴重的器質性疾病;(3)過敏體質及無法正常溝通和交流。潰瘍組中,男79例,女66例;年齡18～75歲,平均(46.25±13.09)歲。另隨機納入本院同期體檢健康者40例為對照組,其中男23例,女17例;年齡20～74歲,平均(47.20±12.52)歲。兩組基線資料比較差異無統計學意義(P>0.05),具有可比性。本研究符合《世界醫學協會赫爾辛基宣言》的倫理道德準則,且已獲得本院倫理委員會批準。

1.2方法

1.2.1血清G-17、PGRN、TFF3水平檢測 于入院次日清晨獲取患者、體檢當日獲取體檢健康者的外周空腹靜脈血標本3 mL加入抗凝管中,3 500 r/min離心10 min(12 cm半徑)獲取血清,保存于-20 ℃待檢。使用酶聯免疫吸附試驗檢測G-17、PGRN水平,試劑盒購自武漢華美生物工程有限公司,將試劑盒取出后自然升至28 ℃,包被抗體,配制試劑和標準品,微孔板設置標準孔和待測樣本孔,分別添加標準品和待檢測樣本,甩干微孔板中液體加入配制好的標記抗體工作液,浸泡、沖洗、甩干,加入底物,建立標準曲線,按照試劑盒說明書進行操作,測定波長450 nm處的吸光度值,對應標準曲線計算G-17、PGRN水平。TFF3采用免疫比濁法檢測,試劑盒購自寧波瑞源生物科技有限公司,提前30 min從4 ℃冰箱中取出試劑盒、校準品及質控品恢復室溫備用,充分混勻復溶的質控品,吸入樣品杯后放入質控架檢測,以標準品濃度和相對應的吸光度作標準曲線,將樣本中的TFF3水平分別通過樣本的吸光度從標準曲線上讀出。

1.2.2炎癥活動度評價 于胃鏡檢查時取胃黏膜組織2～3塊送至病理活檢觀察炎癥反應活動度,輕度為炎癥細胞局限于黏膜淺層,不超過黏膜層的1/3(≤1/3),未侵及腺體上皮;中度為炎癥細胞浸潤較嚴重,約達到黏膜層的2/3(>1/3且≤2/3),侵及腺體上皮;重度為黏膜層有大量炎癥細胞浸潤,覆蓋全部黏膜層(>2/3),且大量侵襲腺體上皮[11]。

1.2.3潰瘍愈合效果評價及分組 潰瘍組采取常規治療,于療程結束后行胃鏡檢查評價潰瘍愈合效果,參照《消化性潰瘍中醫診療專家共識意見(2017)》[12],分為活動期(A期,A1、A2),愈合期(H期,H1、H2)和瘢痕期(S期,S1、S2)。痊愈為胃鏡下檢查潰瘍病灶瘢痕愈合或無痕跡愈合;顯效為潰瘍病灶達到愈合期或減輕2個級別;有效為潰瘍病灶達到愈合期或減輕1個級別;無效為內鏡下檢查無好轉。將痊愈、顯效患者納入愈合組,有效和無效患者納入未愈合組。

1.2.4一般資料收集 收集所有受試者的一般資料包括性別,年齡,體質量指數(BMI),病灶最大徑,吸煙,飲酒,精神壓力[壓力知覺量表(PSS-14)評分>43分[13]],發病部位(胃體、胃竇、胃角),不良飲食習慣(辛辣刺激或3餐無定時),睡眠不足[睡眠狀況自評量表(SRSS)評分>23分[14]]及血清G-17,PGRN,TFF3水平。

2 結 果

2.1潰瘍組與對照組血清G-17、PGRN、TFF3水平比較 與對照組比較,潰瘍組的血清G-17、PGRN、TFF3水平更高(P<0.05)。見表1。

表1 潰瘍組與對照組血清G-17、PGRN、TFF3水平比較

2.2潰瘍組不同炎癥活動度患者的血清G-17、PGRN、TFF3水平比較 潰瘍組中炎癥活動度輕度患者32例,中度患者65例,重度患者48例。炎癥活動度重度患者的血清G-17、PGRN、TFF3水平高于中度和輕度患者(P<0.05),且炎癥活動度中度患者的血清G-17、PGRN、TFF3水平高于輕度患者(P<0.05)。見表2。

表2 潰瘍組不同炎癥活動度患者的血清G-17、PGRN、TFF3水平比較

2.3影響治療后潰瘍愈合效果的單因素分析 胃潰瘍患者中有102例治療后潰瘍愈合(愈合組),43例治療后潰瘍未愈合(未愈合組)。愈合組與未愈合組的性別、年齡、BMI、飲酒、發病部位、不良飲食習慣、病灶最大徑比較,差異均無統計學意義(P>0.05),愈合組與未愈合組吸煙、精神壓力、睡眠不足者占比及血清G-17、PGRN、TFF3水平比較,差異均有統計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 影響治療后潰瘍愈合效果的單因素分析[n(%)或

2.4影響治療后潰瘍愈合的多因素Logistic回歸分析 以本研究資料為樣本,以治療后潰瘍愈合情況為應變量,以前述單因素分析(表3)中P<0.10的指標/因素為自變量,共6個。各變量賦值參見表4。回歸過程采用逐步后退法,以進行自變量的選擇和剔除,設定α剔除=0.10,α入選=0.05。共有4個變量被保留入回歸方程(P<0.05,OR>1)。血清G-17、PGRN、TFF3及精神壓力均為影響治療后潰瘍愈合效果的獨立危險因素(P<0.05)。見表5。

表4 變量賦值表

表5 影響治療后潰瘍愈合的多因素Logistic回歸分析結果

2.5血清G-17、PGRN、TFF3預測治療后潰瘍愈合效果的價值分析 聯合檢測時以其Logit(P/1-P)=0.051×G-17+0.027×PGRN+0.062×TFF3+為聯合應用的虛擬概率量指標。分析結果顯示,G-17、PGRN、TFF3單獨及聯合應用時,曲線下面積(AUC)分別為0.752(95%CI:0.581～0.921)、0.683(95%CI:0.415～0.957)、0.704(95%CI:0.425～0.979)、0.845(95%CI:0.741～0.939),其中聯合應用診斷效能更高,AUC及靈敏度、特異度、準確度均較各單獨應用指標有明顯提升。見表6、圖1。

圖1 血清G-17、PGRN、TFF3預測潰瘍愈合效果的ROC曲線

表6 血清G-17、PGRN、TFF3預測治療后潰瘍愈合效果的價值分析

3 討 論

Hp是被公認的人類消化道致癌物質,感染后能引起胃及腸道的黏膜損傷,并促進潰瘍的形成,最終導致癌變[15-17]。目前,臨床針對Hp感染引起的胃潰瘍主要從抑酸、抗Hp感染兩個方面進行治療,隨著三聯及四聯療法的廣泛應用,Hp陽性胃潰瘍的治療效果有所提高[18],但仍有部分患者發展為難治性潰瘍,愈合效果不佳。胃鏡檢查是目前評價胃潰瘍病情及愈合效果的“金標準”,但屬于侵入性操作,多數需要麻醉處理,操作難度大。因此,需要尋找檢測方便、可重復性強,能有效反映病情變化的血清標志物以輔助臨床評估胃潰瘍病情及愈合效果。

本研究結果顯示,潰瘍組的血清G-17、PGRN、TFF3水平均高于對照組,且炎癥活動度輕、中、重度者的血清G-17、PGRN、TFF3水平逐漸升高,說明其水平升高程度與Hp陽性胃潰瘍患者的炎癥活動度有關。胃潰瘍主要發生于慢性胃炎患者中,膽汁、胃酸的反流侵蝕胃黏膜造成的炎癥反應及Hp感染后引起的一系列炎癥病理反應是潰瘍形成的重要條件[19]。G-17是由胃腸G細胞分泌的胃腸激素,其具有刺激胃酸和胃蛋白酶原的分泌、促進胃黏膜細胞的增殖、加強胃腸道的蠕動等功能,高水平的G-17過度刺激胃酸和胃蛋白酶原,可消化自身黏膜,導致胃潰瘍的發生[20-21]。目前G-17水平已被證實與Hp感染密切相關[22]。PGRN是一種多效性生長因子,在細胞周期、生長、遷移、轉化及傷口愈合、腫瘤的發生等方面具有調節作用,其過表達可誘導包括白細胞介素(IL)-8、6、10及腫瘤壞死因子-α(TNF-α)在內的多種炎癥細胞因子的分泌[23-24],AKSOY等[25]認為,PGRN水平在健康者與胃潰瘍患者治療前后存在差異,并可作為胃潰瘍愈合的生物標志物,提示PGRN水平的變化與胃潰瘍的發生、發展及預后有關。TFF3是TFF家族成員,由大腸和小腸的杯狀黏液細胞分泌,具有保護胃腸道黏膜、抗凋亡、增加細胞遷移能力的作用[26]。動物實驗發現,在大鼠胃潰瘍模型中TFF3的表達升高,能通過激活NF-κB的負調節因子,發揮抗炎癥反應的作用[27],且在慢性萎縮性胃炎癌前病變患者中亦存在TFF3水平升高的情況[28],提示TFF3水平的升高與病情的變化有關。

本研究通過多因素Logistic回歸分析發現,血清G-17、PGRN、TFF3水平和精神壓力是影響潰瘍愈合效果的獨立危險因素,且經ROC曲線驗證,血清G-17、PGRN、TFF3均對治療后潰瘍愈合有良好的預測作用,聯合預測的價值更高。存在精神壓力是影響潰瘍愈合效果的獨立危險因素,可能是因為患者處于精神壓力狀態下,導致內分泌功能紊亂,進而削弱機體的免疫功能,影響潰瘍愈合。劉東濤等[29]研究證實,G-17是導致Hp陽性消化性潰瘍發生的危險因素,與本研究結果具有同質性,說明G-17參與Hp陽性胃潰瘍的進展。PGRN多作為炎癥性疾病的預后預測指標,TFF3則是胃癌的預后和診斷生物標志物[30]。以上結果說明,G-17、PGRN、TFF3具有胃腸道疾病生物標志物的研究價值。而本研究發現,在潰瘍組不同炎癥活動度及愈合效果不同患者中存在G-17、PGRN、TFF3的水平差異,此結果證實了G-17、PGRN、TFF3水平與病情炎癥程度有關,其水平越高,患者的炎癥反應越嚴重,治療難度大,即預后更差,效果不佳。血清G-17、PGRN、TFF3分別反映了胃酸的分泌程度、炎癥程度及胃黏膜損傷程度3個方面,聯合預測能更全面地反映病情。

綜上所述,血清G-17、PGRN、TFF3水平在Hp陽性胃潰瘍患者中異常升高,且與炎癥活動度有關,是影響潰瘍愈合的獨立危險因素,三者聯合檢測對治療后潰瘍愈合效果有較高的預測價值,可作為臨床輔助判斷患者病情和預后的生物標志物。