直接抗人球蛋白試驗(yàn)對(duì)輸血患者臨床療效的影響

蘇仁娜，胡美珠，趙 剛，賈雯婷

（內(nèi)蒙古自治區(qū)血液中心輸血研究室，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010070）

輸血是當(dāng)前常見(jiàn)的救護(hù)手段，對(duì)維持患者正常生命體征具有重要意義，但一些患者輸血后可能出現(xiàn)溶血凝血情況，影響輸血效果，因此輸血前進(jìn)行檢查十分關(guān)鍵。直接抗人球蛋白試驗(yàn)（DAT）是用于檢測(cè)紅細(xì)胞上致敏的不完全抗體或補(bǔ)體，是診斷機(jī)體溶血性貧血的方法，陽(yáng)性患者主要是自身抗體或免疫復(fù)合物被吸附在紅細(xì)胞膜上，從而影響紅細(xì)胞功能，在輸血前的交叉配血實(shí)驗(yàn)時(shí)會(huì)掩蓋同種抗體，對(duì)交叉配血及血液成分的選擇造成一定困擾，藥物溶血性貧血、新生兒溶血病等疾病及應(yīng)用人血制品后、器官移植后等均可導(dǎo)致患者產(chǎn)生自身抗體，DAT 呈現(xiàn)陽(yáng)性[1]。DAT 陽(yáng)性說(shuō)明患者紅細(xì)胞表面被不完全抗體和/或補(bǔ)體致敏，大部分患者體內(nèi)紅細(xì)胞破壞速度快于機(jī)體造血速度而伴有一定程度的貧血，需要輸注紅細(xì)胞治療。但目前有研究報(bào)道DAT 陽(yáng)性患者輸血有效率較低[2]。因此，本研究旨在深入研究DAT 陽(yáng)性在需要輸血患者中的疾病分布情況，DAT 陽(yáng)性患者輸注紅細(xì)胞后的輸血療效，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料回顧性分析內(nèi)蒙古自治區(qū)血液中心2020年4 月至2022 年7 月收治的需行輸注紅細(xì)胞治療的116例患者的臨床資料，將其中58 例DAT 陰性需要輸血的患者作為A 組，58 例DAT 陽(yáng)性需要輸血的患者作為B 組。A 組患者中男性33 例，女性25 例；年齡45～71 歲，平均（61.84±5.21）歲；BMI 18～22 kg/m2，平均（19.93±1.42）kg/m2。B 組患者中男性38 例，女性20 例；年齡47～75 歲，平均（62.58±7.43）歲；BMI 18～22 kg/m2，平均（19.85±1.62）kg/m2。兩組患者一般資料對(duì)比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），組間具有可比性。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合《臨床輸血學(xué)》[3]中需要輸血治療；臨床資料完整；近期未有輸血治療史。排除標(biāo)準(zhǔn)：輸血后仍有出血，且出血量無(wú)法準(zhǔn)確估計(jì)；輸血過(guò)程中因發(fā)生輸血不良反應(yīng)而未完成輸血。研究經(jīng)院內(nèi)醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 檢測(cè)方法

1.2.1 DAT 的檢測(cè)以及判定 入院后次日早晨，采集患者外周空腹靜脈血3 mL，加入裝有乙二胺四乙酸二鉀（EDTA-K2）抗凝劑的抗凝試劑管中，應(yīng)用離心機(jī)（長(zhǎng)沙湘智離心機(jī)儀器有限公司，型號(hào)：TDZ4-WS）以2 500 r/min 的轉(zhuǎn)速離心3 min，分離出紅細(xì)胞和血漿，將紅細(xì)胞用生理鹽水洗滌3 次，采用低離子液制備0.8%的紅細(xì)胞懸液，撕去抗人球蛋白檢測(cè)卡（奧森多臨床診斷有限責(zé)任公司提供）封膜，取其中50 μL 加入反應(yīng)卡的微管中，將微管直接放入微柱凝膠反應(yīng)卡專用醫(yī)用離心機(jī)（長(zhǎng)春博研科學(xué)儀器有限責(zé)任公司，型號(hào)：TD-A）中，1 000 r/min 的離心速度離心10 min，取出抗人球蛋白檢測(cè)卡判讀結(jié)果。紅細(xì)胞因抗原抗體反應(yīng)而發(fā)生凝聚或凝集時(shí)，不能透過(guò)微柱管反應(yīng)腔內(nèi)的凝膠介質(zhì)而留在凝膠的上端或中上部，提示陽(yáng)性；當(dāng)紅細(xì)胞完全沉于凝膠介質(zhì)的底部時(shí)，提示DAT 陰性，表明紅細(xì)胞表面不存有任何抗體。

1.2.2 DAT 陽(yáng)性不同分型的檢測(cè)以及判定 直接取DAT陽(yáng)性者洗滌后的紅細(xì)胞標(biāo)本，加入低離子液制備成3%的紅細(xì)胞懸液，分別吸取50 μL 紅細(xì)胞懸液加入免疫球蛋白G（IgG）和C3d 抗體微柱凝膠抗體分型卡（瑞士達(dá)亞美公司提供），放于專用醫(yī)用離心機(jī)中以1 000 r/min 的速度離心10 min 后，取出觀察結(jié)果，若紅細(xì)胞漂浮在凝膠柱上端或中部，說(shuō)明IgG 或C3d 呈陽(yáng)性，若兩支試管均凝集則為IgG+C3d 陽(yáng)性。

1.2.3 血常規(guī)檢測(cè) 于輸血前、輸血后24 h 采集患者空腹靜脈血5 mL，采用血紅蛋白分析儀（HemoCue AB，型號(hào)：301 型）檢測(cè)血紅蛋白（Hb）水平，采用全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀（內(nèi)蒙古邁克生物科技有限公司，型號(hào)：BC-3000PLUS）檢測(cè)紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（RBC）和紅細(xì)胞壓積（Hct）。

1.3 觀察指標(biāo)①記錄DAT 陽(yáng)性不同分型輸血患者疾病類型分布情況。②比較兩組患者的輸血效果，輸注紅細(xì)胞前及輸注紅細(xì)胞后24 h 后測(cè)量Hb，計(jì)算Hb 升高預(yù)期值=[供者Hb（g/L）×輸入量（L）×90%]/[患者體質(zhì)量（kg）×0.085（L/kg）]，輸入量以全血為標(biāo)準(zhǔn)，各種紅細(xì)胞制劑折算為對(duì)應(yīng)原料全血量，90% 為檢驗(yàn)誤差，輸血后Hb 升高＞80% Hb 升高預(yù)測(cè)值則為顯效；輸血后Hb 升高50%～80% Hb 升高預(yù)測(cè)值為有效；輸血后Hb 升高＜50% Hb 升高預(yù)測(cè)值為無(wú)效[3]。總有效率=（顯效+有效）例數(shù)/總例數(shù)×100%。③記錄兩組患者輸血前后Hb、RBC、Hct 的變化。④記錄IgG、C3d 以及IgG+C3d 陽(yáng)性患者輸血后的治療效果，療效判定標(biāo)準(zhǔn)同②。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 20.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析本研究所有數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料以[例(%)]表示，兩組間比較采用χ2檢驗(yàn)，多組間比較采用χ2趨勢(shì)檢驗(yàn)；計(jì)量資料均使用S-W 法檢驗(yàn)證實(shí)服從正態(tài)分布，以()表示，采用t檢驗(yàn)。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 DAT 陽(yáng)性不同分型輸血患者疾病類型分布情況DAT陽(yáng)性輸血患者中分型為IgG 陽(yáng)性最多，占比為84.48%（49/58），疾病中血液病患者占比最高，占比為43.10%（25/58），其次是感染性疾病，占比為25.86%（15/58），見(jiàn)表1。

表1 DAT 陽(yáng)性不同分型輸血患者疾病類型分布情況[例(%)]

2.2 兩組患者輸血效果比較B 組患者輸血總有效率（60.34%）低于A 組（89.66%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表2。

表2 兩組患者輸血效果比較[例(%)]

2.3 兩組患者輸血前后Hb、RBC、Hct 比較輸血前后B組Hb、RBC、Hct 均低于A 組，輸血后B 組Hb、RBC、Hct上升值低于A 組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），見(jiàn)表3。

表3 兩組患者輸血前后Hb、RBC、Hct 比較()

表3 兩組患者輸血前后Hb、RBC、Hct 比較()

注：與輸血前比，*P＜0.05。Hb：血紅蛋白；RBC：紅細(xì)胞計(jì)數(shù)；Hct：紅細(xì)胞壓積。

2.4 DAT 陽(yáng)性不同分型輸血治療效果比較單純C3d陽(yáng)性患者和IgG+C3d 陽(yáng)性患者的輸血總有效率均為100.00%，高于單純IgG 陽(yáng)性患者的53.06%，3 組間對(duì)比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表4。

表4 DAT 陽(yáng)性不同分型輸血治療效果比較[例(%)]

3 討論

輸注紅細(xì)胞主要目的是緩解機(jī)體缺氧情況，但DAT陽(yáng)性對(duì)輸血療效存在一定的影響。DAT 通過(guò)和含有抗體的紅細(xì)胞反應(yīng)，在離心力作用下含有抗體的紅細(xì)胞無(wú)法通過(guò)凝膠縫隙，從而留在凝膠柱上端或中上部，結(jié)果呈陽(yáng)性。DAT 陽(yáng)性表明紅細(xì)胞表面被不完全抗體或補(bǔ)體致敏，導(dǎo)致紅細(xì)胞破壞速度快于機(jī)體造血速度，從而造成貧血，且貧血程度與陽(yáng)性程度成正比[4]。而患者接受輸血治療后，由于輸入的紅細(xì)胞繼續(xù)被致敏破壞，導(dǎo)致輸血治療后其Hb 提高不明顯，DAT 繼續(xù)呈現(xiàn)陽(yáng)性，因此發(fā)現(xiàn)患者陽(yáng)性的原因，消除導(dǎo)致陽(yáng)性的因素，才能保證輸血效果。

本研究中，DAT 陽(yáng)性輸血患者中分型為IgG 陽(yáng)性最多，疾病中血液病患者占比最高，其次是感染性疾病。分析其原因?yàn)椋翰￠L(zhǎng)期輸注血液制品，易因同種異型抗原的免疫刺激導(dǎo)致相應(yīng)抗體的產(chǎn)生，而感染性疾病DAT 陽(yáng)性的產(chǎn)生可能與感染所致內(nèi)環(huán)境改變及藥物誘導(dǎo)有關(guān)，其中藥物導(dǎo)致的DAT 陽(yáng)性機(jī)制有多種，如藥物吸附/半抗原機(jī)制、免疫復(fù)合物機(jī)制、藥物誘導(dǎo)的非特異性免疫吸附等，部分藥物可導(dǎo)致紅細(xì)胞膜抗原改變直接誘導(dǎo)自身抗體的產(chǎn)生[5]。分型為IgG 的患者以繼發(fā)因素較為多見(jiàn)，病因包括各種感染、藥物誘發(fā)、與自身免疫性疾病及造血系統(tǒng)疾病等相關(guān)，因此臨床較為常見(jiàn)[6]。該研究結(jié)果與梅城等[7]的研究結(jié)果相符。但周朝霞等[8]的研究表明IgG+C3d 陽(yáng)性標(biāo)本抗體分型占比最多，其結(jié)果同本研究結(jié)果相反，發(fā)生此結(jié)果的原因考慮在于納入的樣本量存在差異，不同疾病類型與DAT 陽(yáng)性分型結(jié)果之間存在一定相關(guān)性。

輸注血液一般可以改善機(jī)體缺氧狀態(tài)，而患者輸注血液后Hb 升高是輸血效果評(píng)價(jià)的重要指標(biāo)之一。另外，本研究中A 組輸血總有效率高于B 組，輸血前后B 組Hb、RBC、Hct 均低于A 組，輸血后B 組Hb、RBC、Hct 上升值低于A 組，表明于DAT 陽(yáng)性會(huì)影響患者的輸血效率。分析原因是由于DAT 陽(yáng)性患者紅細(xì)胞的壽命由于被不完全抗體破壞而縮短，導(dǎo)致輸入紅細(xì)胞時(shí)配血不合，發(fā)生溶血反應(yīng)，且輸入的紅細(xì)胞進(jìn)入患者體內(nèi)會(huì)被致敏因素持續(xù)破壞，因此輸血治療后Hb 增加不明顯，輸血總有效率較低[9]。

由于分型為C3d 的常見(jiàn)于惡性疾病、感染等引起的冷凝集素綜合征，而紅細(xì)胞的破壞由補(bǔ)體介導(dǎo)，因此紅細(xì)胞容易在肝臟發(fā)生較為嚴(yán)重的血管外溶血，輸注紅細(xì)胞后C3d可繼續(xù)結(jié)合并破壞紅細(xì)胞，繼而降低輸血效率，且IgG+C3d型導(dǎo)致的溶血更嚴(yán)重，輸血效率也會(huì)降低[10]。本研究結(jié)果還顯示，單純C3d 陽(yáng)性和IgG+C3d 陽(yáng)性患者的輸血總有效率均為100%，高于單純IgG 陽(yáng)性患者的53.06%，3 組間對(duì)比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明3 種分型的輸血效率存在差異，此外DAT 陽(yáng)性患者輸血前的臨床藥物干預(yù)、抗體強(qiáng)度不同也可能會(huì)影響輸血療效，但本研究納入的C3d、IgG+C3d 陽(yáng)性患者樣本量較小，屬本研究的不足之處，也提示在日后的研究中應(yīng)擴(kuò)大樣本量再次進(jìn)行研究以核實(shí)該結(jié)論。

綜上，DAT 陽(yáng)性分型中，單獨(dú)IgG 陽(yáng)性最多，且輸血的患者主要集中在血液病中，其次是感染性疾病中，DAT陽(yáng)性會(huì)影響患者的輸血效率，3 種分型的輸血效率存在差異；但本研究樣本量較少且未對(duì)臨床藥物干預(yù)和抗體強(qiáng)度的輸血效果進(jìn)行觀察，可能會(huì)影響結(jié)果的準(zhǔn)確性，后續(xù)將擴(kuò)大樣本量并增加上述指標(biāo)的觀察進(jìn)行更深入的研究，為臨床提供更可靠的數(shù)據(jù)。