lncRNA Miat通過miR-182/Nogo-A調控氧化應激所致心肌細胞凋亡的機制

薄洪臣,謝魯寒,劉趙放,韓冰潔,劉 珊,倪瑋鈺,李連宏

心血管疾病(cardiovascular disease, CVD)是我國國民死亡的主要原因之一[1],從2005年開始,急性心肌梗死的病死率呈快速上升趨勢[2]。心肌梗死過程中的氧化應激是導致細胞凋亡的重要因素之一,氧化應激也成為醫學界研究的重點問題。LncRNA被認為是可能解決眾多醫學難題的重要分子之一,2006年心肌梗死相關轉錄物Miat首次被鑒定為lncRNA,位于22號染色體[3]。miR-182是位于人類7號染色體,在進化上保守的一個miRNA,其在癌癥、神經系統病變等多種疾病[4-5]的發病過程中具有重要的調控作用;miR-182在氧化應激和細胞凋亡進程中也發揮著重要作用;miR-182可以通過PI3K/Akt信號通路抑制白內障大鼠晶狀體中的氧化應激和上皮細胞凋亡[6],且miR-182在大鼠心肌細胞可見表達[7],故假設其與氧化應激所致的心肌細胞凋亡相關機制有所關聯。Nogo-A蛋白在阿爾茲海默病、癌癥、視覺和眼部疾病等多種系統生理病理過程中發揮作用[8-10],其在神經系統氧化應激過程具有調控作用[11];Nogo-A在心肌細胞中也有表達,文獻報道Nogo家族蛋白可作為心力衰竭的標志物[12]。本研究通過生物預測軟件RNAhybrid預測Miat與miR-182之間,生物信息網站Targescan預測miR-182與Nogo-A之間存在結合位點,探究Miat通過miR-182調控Nogo-A的表達和機制,闡釋了心肌梗死過程中因氧化應激所致的細胞凋亡的分子調控機制。

1 材料與方法

1.1 主要試劑與耗材DMEM高糖培養基(Gicbo公司),澳洲胎牛血清(FBS)(Gicbo公司),PBS緩沖液(Seven公司),兔抗Nogo-A、兔抗BCL-2抗體(Abclone公司),兔抗Bax抗體(Proteintech公司),兔抗Caspase-3、兔抗β-Tubulin抗體(Coolaber公司),兔熒光二抗、胰蛋白酶、si-RNA合成、miRNA mimics合成(上海吉瑪公司),Hanks’Solution(Coolaber公司),脂質Lipofectamin 2000(Invitrogen公司),CCK-8(Med Chem Express公司),全蛋白提取試劑盒(中國碧云天公司),BCA蛋白濃度測定試劑盒(中國全式金公司),6×Loading Buffer、蛋白Marker(上海雅酶生物公司),30%Acrylamide(丙烯酰胺)、APS(過硫酸銨)粉末、青霉素-鏈霉素溶液(100×)(Seven公司),Tirs-HCl(pH 8.8)、Tirs-HCl(pH 6.8)(中國樂柏生物公司),SDS粉末、TEMED(Coolaber公司),Hoechst 33342染色試劑盒(BD公司),Glycine(甘氨酸)(中國碧云天公司),臺盼藍(Coolaber公司),抗熒光淬滅劑(Beyotime公司),Trizol試劑(Beyotime公司),cDNA反轉錄試劑盒(Invitrogen公司),qPCR試劑盒(中國艾科瑞生物),DEPC水(中國艾科瑞生物),引物合成(Sigma公司),甘氨酸粉末(Invitrogen公司),氯化鈉(Biotal公司),無水甲醇(BD公司),Tris(Biotal公司),30%H2O2(大連醫科大學)。

1.2 細胞培養大鼠胚胎心室肌細胞系H9c2來源于中國細胞系資源庫(中國北京)。使用10%FBS(胎牛血清)+1%青霉素/鏈霉素配成的完全培養基在無菌培養皿中培養心肌細胞,待細胞鋪均勻后放入37 ℃、5%CO2恒溫培養箱中進行無菌培養,6 h后觀察細胞貼壁情況,24～36 h換液。

1.3 細胞計數待計數培養皿中細胞加入0.25%胰蛋白酶消化,800 r/min離心5 min,棄去上清液,加入1 mL完全培養基,輕輕吹打混勻,將細胞吹打成單個細胞存在的細胞懸液,移液槍吸取20 μL置于0.5 mL EP管中,加入60 μL臺盼藍染液,吹打混勻,吸取混合液打入計數板,顯微鏡下計算細胞數量,每1 mL細胞懸液所含細胞數=4大格細胞總數÷4×104×稀釋倍數。

1.4 CCK-8實驗將細胞以1×104個/孔鋪到96孔板中,加入適量培養基鋪勻,置于37 ℃孵箱培養24 h。對細胞進行相應處理后,棄去孔中培養基,PBS清洗2次,加入預混的10 μL CCK-8試劑及90 μL無血清培養基,放入孵箱孵育2～6 h。取出96孔板,酶標儀上檢測450 nm處的OD值,記錄保存數據進行分析,處理組OD450 nm=平均OD450 nm-空白孔OD450 nm。

1.5 轉染將細胞鋪至6孔板中,待細胞密度達70%時運用Lipofectamine 2000與稀釋的si-RNA輕輕混合形成si-RNA-轉染試劑混合物,加入孔中輕輕搖晃孔板混均。置于細胞培養箱中培養,6 h后棄掉培養基,更換為無雙抗的完全培養基。24～72 h檢測mRNA的表達,48～96 h檢測蛋白的表達。

1.6 Western blot檢測加入適量RIPA裂解液,水平放置搖床上裂解30 min,細胞用刮子刮下并吸入相應的管中,振蕩離心后取上清,參照說明書運用BCA法測定蛋白濃度,運用SDS-PAGE凝膠電泳分離蛋白,而后轉到PVDF膜上,5%脫脂牛奶室溫封閉2 h。加入稀釋的一抗,放入濕盒中4 ℃過夜,回收一抗,用TBST在搖床上洗膜15 min×3次。洗完后的膜用稀釋好的二抗37 ℃孵育1 h,TBST搖床上洗膜15 min×3次,操作過程全程避光。最后將洗完二抗的膜放在Odyssey凝膠成像分析儀上顯影,并保存實驗數據。

1.7 qRT-PCR采用qRT-PCR測定RNA的表達水平。首先提取細胞總RNA,按照反轉錄試劑盒說明書操作合成cDNA。得到cDNA后按照艾科瑞生物SYBR Green Pro Taq HS預混型qPCR試劑盒操作步驟進行PCR反應。

1.8 細胞凋亡染色實驗使用Hoechst染色法進行細胞凋亡染色。細胞處理后,吸盡培養液,加入Hoechst 33258染液,使其完全覆蓋皿底,染色5 min后去染色液,用PBS或0.9%NaCl洗3～5 min×3次,吸盡液體,滴加1滴抗熒光淬滅封片液于皿上,熒光顯微鏡下觀察致密亮藍色熒光強度,判斷細胞凋亡程度。

2 結果

2.1 H2O2誘導對H9c2心肌細胞活力的影響分別用100、200、400、600、800、1000、1200 μmol/L的H2O2處理H9c2心肌細胞18 h。CCK-8實驗檢測細胞活力結果顯示,使用800 mmol/L H2O2處理心肌細胞達到半抑制濃度(IC50),可作為實驗模擬的最佳濃度(圖1)。

圖1 CCK-8檢測心肌細胞H9c2在不同濃度H2O2處理下的細胞活力:800 μmol/L H2O2處理心肌細胞的細胞活力約為50%

2.2 H2O2誘導對H9c2心肌細胞凋亡的影響為了解H2O2處理后心肌細胞凋亡情況,應用Western blot檢測凋亡相關蛋白Bax、BCL-2、Caspase-3的表達量變化:與對照組相比,H2O2處理后細胞促凋亡相關蛋白Bax(P<0.05)、Caspase-3表達增加(P<0.01),抗凋亡蛋白BCL-2表達降低(P<0.01,圖2)。

圖2 Western blot檢測Bax、BCL-2、Caspase-3蛋白表達水平:*P<0.05,**P<0.01

2.3 Hoechst染色檢測心肌細胞凋亡情況為了更直觀的觀察細胞凋亡情況,本實驗對對照組和H2O2處理組進行Hoechst33242凋亡染色,結果顯示:與對照組相比,H2O2處理組的細胞致密亮藍色熒光強度增高(P<0.001,圖3)。

圖3 Hoechst染色檢測各組凋亡情況:致密亮染的為凋亡細胞

2.4 H2O2處理后Miat、miR-182以及Nogo-A表達水平qRT-PCR檢測顯示:與對照組相比,H2O2處理后心肌細胞中Miat表達量升高(P<0.01),Nogo-A mRNA表達量升高(P<0.01),而miR-182表達顯著下降(P<0.01,圖4A～C);Western blot檢測顯示:H2O2處理組Nogo-A蛋白表達量較對照組升高(P<0.05,圖4D)。

圖4 A～C. qRT-PCR檢測H2O2處理后心肌細胞Miat(A)、miR-182(B)及Nogo-A(C) mRNA的相對表達量;D.Western blot檢測Nogo-A蛋白的表達水平:*P<0.05,**P<0.01

2.5 Miat通過miR-182調節H2O2引起的心肌細胞凋亡

2.5.1驗證Miat對miR-182的調控 利用miRNA結合位點預測軟件RNAhybird預測發現:Miat與miR-182之間存在靶向結合位點(圖5)。驗證si-Miat的轉染效率:對細胞轉染了3條si-Miat,下調效率均良好(P<0.01,圖6A);將si-Miat轉染進細胞后,與對照組相比,下調組miR-182表達升高(P<0.01,圖6B),Nogo-A mRNA表達下降(P<0.005,圖6C)。

圖5 Miat與miR-182存在靶向結合位點

圖6 A. qRT-PCR檢測si-Miat轉染效率;B. qRT-PCR檢測轉染si-Miat后miR-182的表達;C.qRT-PCR檢測轉染si-Miat后Nogo-A mRNA的表達;與對照組相比,**P<0.01,***P<0.001

2.5.2下調Miat對H2O2引起心肌細胞凋亡的影響 為進一步研究Miat在H2O2引起的細胞凋亡過程中的調控作用,將實驗分為對照組、H2O2處理組、H2O2處理+NC、H2O2處理+si-Miat四組,應用Western blot檢測下調Miat后Nogo-A及凋亡相關蛋白的表達變化:與對照組相比,H2O2處理組Nogo-A蛋白表達增加(P<0.05),Bax、Caspase-3表達增加(P<0.05),BCL-2表達降低(P<0.01);與H2O2處理+NC組相比,H2O2處理+si-Miat組Nogo-A蛋白表達下降(P<0.05),Bax、Caspase-3表達下降(P<0.05),BCL-2表達增加(P<0.05,圖7)。

圖7 Western blot檢測對照、H2O2處理、H2O2處理+NC、H2O2處理+si-Miat各組中Nogo-A蛋白及凋亡相關蛋白Bax、Caspase-3、BCL-2的表達水平:*P<0.05,**P<0.01

2.5.3Hoechst染色情況 為更直觀觀察Miat對H2O2引起的細胞凋亡的調控作用,應用Hoechst染色觀察各組細胞凋亡情況:結果顯示,與對照組相比,H2O2處理組細胞致密亮藍色熒光強度增高,表明細胞凋亡率增高(P<0.000 1,圖8);與H2O2處理+NC組相比,H2O2處理+si-Miat組可明顯觀察到細胞致密亮藍色熒光強度降低,即凋亡率降低(P<0.01)。

圖8 Hoechst染色檢測對照、H2O2處理、H2O2處理+NC、H2O2處理+si-Miat四組細胞的凋亡情況:**P<0.01;****P<0.000 1

2.6 miR-182通過Nogo-A調控心肌細胞凋亡

2.6.1驗證miR-182對Nogo-A表達的調控 利用TargetScan預測顯示miR-182與Rtn4 mRNA的3′-UTR存在結合位點(圖9A)。驗證miR-182 mimics的轉染效率:與NC組相比,miR-182 mimics組miR-182的表達量明顯升高(P<0.01,圖9B),表明轉染有效。在H9c2細胞中轉染miR-182 mimics后qRT-PCR檢測Nogo-A mRNA的表達量,與NC組相比,miR-182 mimics組Nogo-A mRNA表達降低(P<0.001,圖9C)。

圖9 A.生物信息網站TargetScan預測miR-182與Nogo-A mRNA的3′-UTR存在結合位點;B.qRT-PCR檢測轉染miR-182 mimics后miR-182的表達;C. qRT-PCR檢測轉染miR-182 mimics后Nogo-A mRNA的表達:**P<0.01;***P<0.005

2.6.2上調miR-182對H2O2引起心肌細胞凋亡的影響 為探索miR-182對H2O2引起的細胞凋亡的調控作用,應用Western blot檢測上調miR-182后各組凋亡相關蛋白的表達,結果顯示:與對照組相比,H2O2處理組Bax(P<0.01)、Caspase-3表達升高(P<0.01),BCL-2表達降低(P<0.000 1);與H2O2處理+NC組相比,H2O2處理+miR-182 mimics組Bax(P<0.05)、Caspase-3表達降低(P<0.05),BCL-2表達升高(P<0.05)。

Western blot檢測上調miR-182后Nogo-A表達變化,結果顯示:與對照組相比,H2O2處理組Nogo-A蛋白表達升高(P<0.000 1);與H2O2處理+NC組相比,H2O2處理+miR-182 mimics組Nogo-A蛋白表達量降低(P<0.05),H2O2處理+NC組與H2O2處理組Nogo-A蛋白表達變化差異無統計學意義(圖10)。

圖10 Western blot檢測對照、H2O2處理、H2O2處理+NC、H2O2處理+miR-182 mimics四組凋亡相關蛋白Bax、Caspase-3、BCL-2及Nogo-A蛋白的表達:*P<0.05;**P<0.01,****P<0.000 1

2.6.3Hoechst染色情況 為更直觀觀察miR-182對H2O2引起的細胞凋亡的調控作用,對各組細胞進行Hoechst凋亡染色。結果顯示:與對照組相比,H2O2處理組細胞致密亮藍色熒光強度增高(P<0.000 1);與H2O2處理+NC組相比,H2O2處理+miR-182 mimics組細胞致密亮藍色熒光強度降低(P<0.000 5),H2O2處理+NC組與H2O2處理組Hoechst染色情況無明顯變化(圖11)。

圖11 Hoechst染色檢測對照、H2O2處理、H2O2處理+NC、H2O2處理+miR-182 mimics四組凋亡情況:***P<0.001,****P<0.000 1

2.7 上調Nogo-A逆轉上調miR-182所緩解的心肌細胞凋亡為探究miR-182/Nogo-A軸對心肌細胞凋亡的調控作用,進行補救實驗驗證兩者之間的互相作用以及兩者對心肌細胞凋亡的影響。

2.7.1上調Nogo-A與miR-182后細胞凋亡相關蛋白表達的變化 對miR-182和Nogo-A分別上調以及兩者共上調,后對相應分組進行H2O2處理,檢測Nogo-A蛋白表達變化,結果顯示:與對照組相比,H2O2處理組Nogo-A表達升高(P<0.05);與H2O2處理+NC相比,H2O2處理+miR-182 mimics組Nogo-A表達降低(P<0.01);與H2O2處理+miR-182 mimics+Nogo-A NC組比較,H2O2處理+miR-182 mimics+Nogo-A組的Nogo-A表達升高(P<0.05,圖12)。

圖12 Western blot檢測對照、H2O2處理、H2O2處理+NC、H2O2處理+miR-182 mimics、H2O2處理+miR-182 mimics+NC、H2O2處理+miR-182 mimics+Nogo-A各組中凋亡相關蛋白Bax、Caspase-3、BCL-2及Nogo-A的表達水平:*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001

應用Western blot檢測各組中Nogo-A蛋白表達變化,結果顯示:與對照組相比,H2O2組Bax(P<0.001)、Caspase-3(P<0.01)表達升高,BCL-2表達下降(P<0.05);與H2O2+NC組相比,H2O2+miR-182 mimics組Bax低、Caspas-3表達降低(P均<0.05),BCL-2表達升高(P<0.01);與H2O2+miR-182 mimics+Nog-A NC組相比較,H2O2+miR-182 mimics+Nogo-A組Bax、Caspase-3表達升高(P均<0.05),BCL-2表達降低(P<0.05,圖12)。

2.7.2Hoechst凋亡染色情況 為更直觀觀察Nogo-A與miR-182間的互相作用以及兩者對心肌細胞凋亡的影響,應用Hoechst染色觀察各組細胞凋亡情況。結果顯示:與對照組相比,H2O2處理組凋亡率升高(P<0.001);與H2O2處理+NC相比,H2O2處理+miR-182 mimics組凋亡率降低(P<0.05);與H2O2處理+miR-182 mimics+Nogo-A NC組相比,H2O2處理+miR-182 mimics+Nogo-A組凋亡率升高(P<0.05,圖13)。

圖13 Hoechst染色檢測對照、H2O2處理、H2O2處理+NC、H2O2處理+miR-182 mimics、H2O2處理+miR-182 mimics+Nog-A NC、H2O2處理+miR-182 mimics+Nogo-A六組細胞凋亡情況:*P<0.05,***P<0.001

2.8 Miat通過miR-182/Nogo-A調控心肌細胞凋亡為研究Miat和miR-182/Nogo-A的調控關系,對心肌細胞進行si-Miat與miR-182 inhibitor共轉染后進行H2O2處理,觀察心肌細胞的各指標的變化。

2.8.1Miat與miR-182雙下調后凋亡相關蛋白及Nogo-A表達的變化 Western blot檢測顯示:與對照組相比,H2O2處理組Nogo-A表達升高(P<0.01);與H2O2處理+NC相比,H2O2處理+si-Miat組Nogo-A表達降低(P<0.05),H2O2處理+NC組與H2O2處理組的Nogo-A表達差異無統計學意義;與H2O2處理+si-Miat+inhibitor NC組相比,H2O2處理+si-Miat+miR-182 inhibitor組的Nogo-A表達升高(P<0.05);H2O2處理+si-Miat+inhibitor NC組與H2O2處理+si-Miat組Nogo-A表達無明顯變化。

Western blot檢測結果顯示:與對照組相比,H2O2處理組Bax(P<0.05)、Caspase-3(P<0.01)表達升高,BCL-2表達下降(P<0.001);與H2O2處理+NC組相比,H2O2處理+si-Miat組Bax(P<0.01)、Caspase-3(P<0.05)表達降低,BCL-2表達升高(P<0.01);與H2O2處理+si-Miat+NC組相比,H2O2處理+si-Miat+miR-182 inhibitor組Bax、Caspase-3表達升高(P均<0.05),BCL-2表達降低(P<0.05,圖14)。

圖14 Western blot檢測對照、H2O2處理、H2O2處理+NC、H2O2處理+si-Miat、H2O2處理+si-Miat+inhibitor NC、H2O2處理+si-Miat+miR-182 inhibitor各組細胞凋亡相關蛋白Bax、Caspase-3、BCL-2及Nogo-A的表達水平:*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001

2.8.2Hoechst染色情況 利用Hoechst染色更直觀觀察各組細胞凋亡情況,結果顯示:與對照組相比,H2O2處理組凋亡率升高(P<0.000 1);與H2O2處理+NC組相比,H2O2處理+si-Miat組凋亡率降低(P<0.000 1),H2O2處理+NC組與H2O2處理組相比凋亡率變化無統計學意義;與H2O2處理+si-Miat+inhibitor NC組相比,H2O2處理+si-Miat+miR-182 inhibitor組凋亡率升高(P<0.05,圖15)。

圖15 Hoechst染色檢測對照、H2O2處理、H2O2處理+NC、H2O2處理+si-Miat、H2O2處理+si-Miat+inhibitor NC、H2O2處理+si-Miat+miR-182 inhibitor六組細胞凋亡情況:*P<0.05,****P<0.000 1

3 討論

隨著社會的不斷進步,我國居民生活水平逐步提高,從而衍生出一系列健康問題,其中CVD嚴重影響著人們的身體健康,近年來CVD的發病率和病死率呈逐漸上升態勢。因此,CVD的相關研究成為醫學研究的重點和熱點,同時因CVD導致的損傷和死亡的相關鑒定也是法醫學研究的重點內容。CVD中病死率較高、發生較為迅速的是心肌梗死。心肌梗死即動脈粥樣硬化或血栓形成堵塞冠狀動脈導致心肌發生壞死的病理變化,氧化應激在心肌梗死過程中占據著重要地位。

LncRNA是長度超過200 nt的RNA分子,分布廣泛,在轉錄、轉錄后和翻譯的水平發揮重要的調控功能[13]。LncRNA雖然不具有編碼蛋白的功能,但是其可以在轉錄、轉錄后和翻譯等多水平調控生物活動進程。LncRNA與CVD、癌癥、神經系統疾病等多種疾病或損傷的發生進展有著密切聯系[14-16]。研究表明,lncRNA可以通過靶向miRNA來調節心肌梗死的進展,lncRNA APF通過直接結合miR-188-3p來調節心肌梗死中心肌細胞的自噬過程,從而調控心肌梗死進程的發展[17]。本實驗通過運用H2O2處理模擬心肌細胞氧化應激損傷,qRT-PCR檢測表明H2O2處理后H9c2細胞中Miat表達升高;Western blot檢測促凋亡蛋白Bax、Caspase-3表達升高,抑凋亡蛋白BCL-2表達降低,且Hoechst凋亡染色發現凋亡率上升,這些結果表明存在細胞凋亡。與H2O2+NC組相比,下調Miat后促凋亡蛋白Bax、Caspase-3表達降低,抑凋亡蛋白BCL-2表達升高,凋亡染色顯示凋亡率降低,表明下調Miat可抑制H2O2處理心肌細胞的凋亡。檢測Miat與Nogo-A的關系發現,與H2O2處理+NC組相比,下調Miat后Nogo-A mRNA和蛋白表達量均降低,說明Miat可能對Nogo-A具有正向調控作用。

miRNAs是一類由內源基因編碼、長度約22 nt的單鏈非編碼RNA分子,miRNAs可通過與下游的mRNA 3′-UTR區域結合,從而誘導mRNA降解或通過抑制翻譯的方式發揮作用。本實驗結果顯示,H2O2處理后心肌細胞miR-182表達量降低;上調miR-182后促凋亡蛋白Bax、Caspase-3表達降低,抑凋亡蛋白BCL-2升高,且凋亡染色發現凋亡率降低,說明下調miR-182可減輕細胞凋亡。文獻報道lncRNA可作為miRNAs的海綿,競爭性結合miRNA,從而對下游的靶基因發揮調控作用[18]。故推測Miat可能通過作為miR-182海綿吸附miR-182發揮作用,因此運用生物預測軟件RNAhybrid預測Miat與miR-182可能存在靶向結合關系。通過si-Miat與miR-182 inhibitior共轉染后發現,與si-Miat+inhibitior NC組相比,si-Miat+miR-182 inhibitior組促凋亡蛋白Bax、Caspase-3表達升高,抑凋亡蛋白BCL-2表達降低,凋亡染色顯示凋亡率升高,表明si-Miat與miR-182 inhibitior共轉染組凋亡情況高于si-Miat+inhibitior NC組,即下調miR-182后抵消了部分下調Miat對細胞凋亡的抑制作用。說明Miat可能通過miR-182調控H2O2處理所致心肌細胞凋亡。

Nogo-A是位于真核細胞內質網的跨膜蛋白,屬于網狀蛋白家族成員,由Rtn4基因編碼。網狀蛋白分為Nogo-A、Nogo-B、Nogo-C三種亞型,其中Nogo-A是網狀蛋白質家族成員中最大的蛋白[19]。本實驗探究Nogo-A與氧化應激所致心肌細胞凋亡的關系,結果發現H2O2處理后Nogo-A表達升高,與促凋亡相關指標變化趨勢一致,提示Nogo-A高表達與凋亡可能具有聯系。運用生物預測網站TargetScan預測miR-182與Nogo-A可能存在靶向結合關系;探究miR-182與Nogo-A的關系發現,miR-182 mimics與上調Nogo-A共轉染后,與miR-182 mimics+Nogo-A NC組相比,miR-182 mimics+Nogo-A組促凋亡蛋白Bax、Caspase-3表達升高,抑凋亡蛋白BCL-2表達降低,凋亡染色顯示凋亡率升高,表明miR-182 mimics+Nogo-A組凋亡情況高于miR-182 mimics+Nogo-A NC組,即上調Nogo-A后解除了部分miR-182 mimics對心肌細胞凋亡的抑制作用。說明miR-182可能通過Nogo-A調控H2O2處理后心肌細胞凋亡。關于Miat、miR-182與Nogo-A之間的關系,si-Miat與miR-182 inhibitior共轉染后發現,與si-Miat+inhibitior NC組相比,si-Miat+miR-182 inhibitior組Nogo-A蛋白表達升高,與凋亡情況變化趨勢表現一致,表明si-Miat+miR-182 inhibitior組凋亡情況高于si-Miat+inhibitior NC組,即下調miR-182后解除了部分下調Miat對Nogo-A表達的抑制作用,表明Miat可能通過miR-182/Nogo-A軸調控H2O2處理所致的心肌細胞凋亡。

綜上,lncRNA Miat可以通過miR-182/Nogo-A調控H2O2處理后的心肌細胞凋亡,表明Miat在心肌細胞氧化應激過程中具有重要的調控作用。