尖銳濕疣患者皮損組織中Toll 樣受體4、核因子κB p65 蛋白表達及臨床意義

朱 周 顧麗群 任 祺 花 卉 谷 麗

江蘇省南通市第三人民醫院皮膚科，江蘇南通 226006

尖銳濕疣（condyloma acuminatum，CA）是由人乳 頭瘤病毒（human papillomavirus，HPV）感染所導致的皮膚黏膜良性贅生物病變，是一種常見的性傳播疾病，該病的發病率逐年增加，部分患者治療困難、不易根治[1-2]。HPV 感染引起的CA 易復發、進展速度快、傳播能力強，嚴重影響患者的身心健康[3]。有研究報道，細胞增殖和凋亡在CA 的發生發展過程中起著重要的作用[4]。Toll 樣受體4（Toll-like receptor，TLR4）作為Toll 樣受體的一員，可以促進炎癥因子的生成，與機體的免疫反應和炎癥反應關系密切[5-6]。核因子κB p65（nuclear factor-κB p65，NF-κB p65）是一種核轉錄因子，可以與各類細胞因子、生長因子和凋亡因子等相互作用，參與機體的氧化應激、凋亡、炎癥等過程[7-10]。關于TLR4 和NF-κB p65 在CA 中的表達水平及其與病程發展關系的研究較少，本研究探討CA 患者皮損組織中TLR4 和NF-κB p65 蛋白表達及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2020 年1 月至2022 年8 月在江蘇省南通市第三人民醫院（以下簡稱“我院”）治療的尖銳濕疣患者92 例作為觀察組，納入標準：①診斷符合《尖銳濕疣診療指南》[11]中的標準；②初治。排除標準：①合并有惡性腫瘤、自身免疫系統疾病、肝腎功能障礙、血液系統疾病等其他嚴重疾病；②合并有人類免疫缺陷病毒、肝炎病毒感染及結核病；③入組前3 個月內有糖皮質激素、免疫制劑服用史；④妊娠期或哺乳期婦女。另選取同期于我院行包皮環切術的成年男性55 例及外陰整形術的成年女性37 例作為對照組，兩組一般資料比較，差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。見表1。本研究獲得我院醫學倫理委員會批準（20220401）。

表1 兩組一般資料比較

1.2 研究方法

采用免疫組織化學染色檢測觀察組皮損組織和對照組皮膚組織的TLR4 和NF-κB p65 蛋白表達水平，首先進行常規染色，之后按照試劑盒說明書（北京中杉金橋生物技術公司，512821CB）進行操作，抗體的稀釋比例為1∶100，以已知陽性片作陽性對照，以PBS 代替一抗作陰性對照。

1.3 判斷標準

TLR4 主要表達于表皮全層的胞膜和胞質，呈現黃色至棕褐色顆粒。NF-κB p65 蛋白主要表達于細胞核和胞漿，呈腺黃色至棕褐色顆粒。每張切片隨機選取5 個不同區域，在高倍視野下（400×）觀察，對陽性細胞比例和染色強度進行評分，陽性細胞比例：＜10%為0 分，10%～＜25%為1 分，25%～＜50%為2 分，50%～＜75%為3 分，≥75%為4 分；染色強度：無著色為0 分，淺黃色為1 分，黃色為2 分，棕褐色為3 分。陽性細胞比例和染色強度得分之和≥4 分為陽性表達，＜4 分為陰性表達[12]。

1.4 統計學方法

采用SPSS 22.0 統計學軟件進行數據分析。計量資料采用均數±標準差（）表示，比較采用t 檢驗；計數資料采用例數和百分率表示，比較采用χ2檢驗。以P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組TLR4、NF-κB p65 蛋白表達比較

觀察組TLR4、NF-κB p65 蛋白表達陽性率高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見圖1、表2。

圖1 觀察組皮損組織TLR4、NF-κB p65 蛋白表達 （免疫組織化學染色，400×）

表2 兩組TLR4、NF-κB p65 蛋白表達比較[例（%）]

2.2 CA 患者不同臨床病理特征與TLR4 蛋白表達的關系

病程≥3 個月、疣體數目≥10 個、疣體最大直徑≥10 mm 患者TLR4 蛋白陽性表達率高于病程＜3 個月、疣體數目＜10 個、疣體最大直徑＜10 mm 患者，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表3。

表3 CA 患者不同臨床病理特征與TLR4 蛋白表達的關系[例（%）]

2.3 CA 患者不同臨床病理特征與NF-κB p65 蛋白表達的關系

疣體數目≥10 個、疣體最大直徑≥10 mm 患者NFκB p65 蛋白表達陽性率明顯高于疣體數目＜10 個、疣體最大直徑＜10 mm 患者，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表4。

表4 CA 患者不同臨床病理特征與NF-κB p65 蛋白表達的關系[例（%）]

3 討論

CA 發病與HPV 感染有關，HPV 可以通過皮膚黏膜的微小破損入侵表皮細胞基底層，進而引起黏膜異常增殖，患者還可能出現免疫系統功能異常[13-14]。TLR與機體抵抗微生物入侵的免疫反應關系密切，研究發現TLR 參與腫瘤和自身免疫性疾病等的發生發展過程[15]。TLR4 作為TLR 中的一員，具有抑制病毒、炎癥反應和凋亡的作用[16]。NF-κB p65 可以作用于下游靶基因，調控炎癥因子、凋亡因子的表達[17]。因此，本研究采用免疫組織化學染色檢測CA 組織中TLR4 和NF-κB p65 的表達情況，進一步探討其臨床意義。

本研究結果顯示，觀察組皮損的TLR4、NF-κB p65 蛋白表達水平明顯升高。CA 是由HPV 引起的最常見的表皮感染，大多數HPV 感染可通過有效的免疫反應消除，未能根除HPV 會促進疣體的發展，這主要與HPV 能夠避開人體免疫防御系統有關[18]。這一過程涉及一系列炎癥反應，近年來的研究已證實促炎性細胞因子，包括白細胞介素和腫瘤壞死因子，是皮膚和黏膜炎癥發展的重要介質[19-20]。有研究表明，TLR4與機體天然免疫和獲得性免疫系統發揮作用有著密切的關系，正常組織中TLR4 的表達量極低，而HPV 感染組織其表達量明顯增加[21-22]。NF-κB p65被證實參與多種疾病的炎癥反應、細胞增殖及細胞凋亡過程，NF-κB p65 與多種HPV 感染疾病的進展及預后有關[23-24]。因此，CA 組織中TLR4、NF-κBp65 蛋白表達水平明顯升高。

CA 的疣體數目、疣體最大直徑及病程進展與HPV 感染分型有關，高危型HPV 感染或HPV 混合感染容易導致臨床上頑固型難治性CA，且此類HPV 感染的CA 病程進展較快，預后較差。文獻報道，高危型HPV 感染和HPV 混合感染組織中TLR4 蛋白、NF-κB p65 蛋白表達水平明顯高于低危型HPV 感染組織[25]。TLR4、NF-κB p65 蛋白表達水平與疣體數目、疣體最大直徑及病程有關。細胞在正常狀態下，NF-κB p65受機體正負反饋機制的調控處于未激活狀態，當細胞受氧化應激、炎癥因子、病原體感染等多種刺激時，NF-κB p65 作為TLR 通路的下游信號分子，被TLR4蛋白激活，進而調控一系列復雜的信號通路，促進促炎性細胞因子、趨化因子及多種調控因子的轉錄表達，促進細胞異常增殖和血管生成、抑制凋亡、免疫逃逸、侵襲和轉移，對機體造成影響[26]。

綜上所述，尖銳濕疣患者皮損組織中TLR4、NF-κB p65 蛋白呈高表達，與疣體數目、疣體最大直徑及病程有關，這一結果可能為臨床上治療和預防尖銳濕疣提供新的思路。但本研究未探討血清水平的TLR4、NF-κB p65 蛋白含量及對CA 的臨床意義，在以后的實驗將進一步的研究。