中藥白及與其偽品“水白及”的電化學指紋圖譜研究

劉想晴 單圣男 程旺興 駱莉莉

1.安徽中醫藥高等專科學校藥學系，安徽 蕪湖 241000；2.安徽中醫藥大學藥學院，安徽 合肥 230012

中藥白及源于蘭科植物白及Bletillastriata(Thunb.)Reichb.f.的干燥塊莖。具有收斂止血、消腫生肌之效，常用于咯血、吐血、外傷出血、瘡瘍腫毒、皮膚皸裂[1]。白及作為傳統的常見中藥，具有悠久的藥用歷史，其起到主要藥效的化成分包含白及多糖、白及膠等[2]。白及一直廣泛用于醫藥、美容、保健等領域，價格一度居高不下，用量較大，導致資源緊缺，市場出現大量混偽品，目前市場上白及的混偽品統稱為“水白及”，多見于蘭科杜鵑蘭屬(Cremastra)、舌唇蘭屬(Platanthera)、筒瓣蘭屬(Anthogonium)、獨蒜蘭屬(Pleione)、美冠蘭屬(Eulophia)等多種植[3-4]。“水白及”多來源于蘭科近屬植物，其性狀與白及十分相似，易造成混淆。當前，對于白及與其混偽品的鑒別主要有性狀鑒別、顯微鑒別、理化鑒別、近紅外光譜等[5-8]，但不管任何鑒別方法都會存在缺陷和不足。由于白及化學成分復雜，通過活性成分分離后進行儀器分析鑒定的方法，其前處理往往較為復雜。

1 儀器與試劑

1.1 儀器 LK2005A型電化學工作站(天津市蘭力科)；217型甘汞參比電極、213型金鉑電極(武漢高仕睿)、50 mL玻璃反應器；85-2A型恒溫磁力攪拌器(江蘇金城國勝)；SC-15型恒溫槽(寧波新藝)。

1.2 試劑 硫酸(南京凱燕環保科技有限公司)；硫酸鈰銨、丙二酸購于國藥集團化學試劑有限公司；溴酸鈉(天津市光復精細化工研究所)。試劑均為分析純，水為超純水。

1.3 藥材 白及來源于安徽、云南、貴州，水白及來源于四川、云南、貴州，多采購于藥材市場，由安徽中醫藥高等專科學校劉想晴鑒定。詳細信息見表1。根據2020版《中國藥典》采收要求，進行處理，曬干，粉碎，過80目篩，置于4℃冰箱中保存備用。

表1 樣品信息表

2 方法與結果

2.1 實驗方法 將恒溫水浴鍋溫度調節至310 K，維持恒溫。在恒溫玻璃反應器中加入經過干燥恒重的白及粉末(過80目篩)0.1000 g，硫酸溶液12.0 mL(3.0 moL/L)，丙二酸溶液6.0 mL(0.4 moL/mL)和硫酸鈰銨溶液3.0 mL(0.005 moL/mL)，蓋好反應器蓋(帶有電極和注射器孔)。開啟磁力攪拌器(轉速固定為500 r/min)及電腦相連的數據采集器，恒溫恒速攪拌2～3 min后，通過注射器迅速將準備好的溴酸鈉溶液3.0 mL(0.2 moL/mL)注入反應器中，使用電化學工作站軟件立刻采集數據并記錄E-t曲線，直到電位振蕩消失停止數據采集，得白及電化學指紋圖譜。如圖1所示。

圖1 白及的電化學指紋圖譜

2.2 白及電化學指紋圖譜的重現性 精密稱取過80目篩的同一白及粉末5份，每份0.1000 g，根據“2.1”中的方法，平行測定5次，得到白及電化學指紋圖譜特征參數如表1所示。在實驗條件相同的情況下，同一來源的白及因其化學成分及含量相同，測得指紋圖譜的各項指標較為相近，RSD均小于2.3%，重新性良好。指紋圖譜結果數據見表2。

表2 白及電化學指紋圖譜重復性結果表

2.3 轉速對振蕩體系的影響 攪拌速度改變會對有效成分參與振蕩反應的進程產生影響，在200 r/min、400 r/min、600 r/min、800 r/min、1000 r/min不同攪拌速度下，測定白及粉末的電化學指紋圖譜如圖2所示，圖譜的特征參數見表3。由圖2和表3可知，攪拌對振蕩體系能產生促進作用，對電化學指紋圖譜的誘導時間、振蕩周期、振幅等參數產生影響。當體系轉速為200 r/min時，振蕩周期較長，振幅較大；當體系轉速為400 r/min和800 r/min時，體系振蕩周期較短，振幅較大；當系統轉速為1000 r/min時，反應體系不穩定，導致指紋圖譜特征參數異常。綜合數據，確定最佳轉速為600 r/min。

a-200 r/min；b-400 r/min；c-600 r/min；d-800 r/min；e-1000 r/min

表3 轉速影響白及電化學指紋圖譜的參數信息表

2.4 溫度對振蕩體系的影響 分別精密加入0.1000 g過80目篩的白及粉末，考察實驗溫度分別為300 K、305 K、310 K、315 K、320 K時的白及電化學指紋圖譜，如圖3所示，圖譜的特征參數見表4。隨著溫度升高，振蕩體系反應速度增加，指紋圖譜的特征參數發生一定變化，誘導時間、振蕩壽命、振蕩周期都明顯變小。在315 K和320 K時，振蕩壽命、振蕩周期均比310 K小，不利于白及指紋圖譜的分析研究。而在300 K和305 K時，誘導時間較長，與溫度為310 K相比，指紋圖譜的振蕩周期、振蕩壽命都較大，且誘導時間較長。白及電話指紋圖譜為310 K時接近于人體的體溫，且該溫度下圖譜的重復性和穩定性良好，本實驗最佳溫度選擇為310 K。

a-300 K；b-305 K；c-310 K；d-315 K；e-320 K圖3 溫度對白及電化學指紋圖譜的影響圖

表4 白及電化學指紋圖譜在不同溫度下的參數信息表

2.5 白及加入量對振蕩體系的影響 分別精密加入過80目篩的恒重白及粉末0.0500 g、0.1000 g、0.1500 g、0.2000 g和0.2500 g，按照項目“2.1”的方法考察電化學指紋圖譜，如圖4所示，圖譜的特征參數見表5。由圖4和表5可知，震蕩體系中隨著白及粉末加入量的增加，電化學指紋圖譜的形狀及各種特征參數均發生改變，白及的化學成分對震蕩體系的抑制作用情況增強，體系震蕩周期及震蕩壽命逐漸減小，誘導時間逐漸增大。當粉末加入量為0.1500 g、0.2000 g和0.2500 g時，白及指紋圖譜的振幅和周期較小，反應體系不穩定，不利于白及圖譜的分析。當粉末加入量為0.0500 g時，圖譜振蕩幅度較大，振蕩壽命過長，反應所消耗的時間較長，同樣不利于白及指紋圖譜的分析研究。綜合考慮，需要保證產生完整且有規律的圖譜，因此選擇最佳加入量為0.1000 g。

a-0.0500g；b-0.1000g；c-0.1500g；d-0.2000g；e-0.2500g圖4 不同加入量對白及電化學指紋圖譜影響圖

表5 不同加入量的白及電化學指紋圖譜參數信息表

2.6 白及和“水白及”的電化學指紋圖譜 在以上最佳條件下，按照項目“2.1”的方法，對不同產地白及及“水白及”的電化學指紋圖譜進行測定和分析。結果如圖5所示，獲取各自圖譜的特征參數見表6。不同產地的白及化學成分和含量不完全一樣，所以不同產地白及指紋圖譜的形狀和信息參數有所差別，但差別有限。白及和其偽品“水白及”之間的差距更大，所以“水白及”表現在誘導時間、振蕩壽命、振蕩周期及振蕩幅度等方面存在較大差距；從圖5和表6中可知，“水白及”的振蕩壽命和振蕩周期明顯比白及小。這些特征參數均有利用指紋圖譜的研究，并且可以對白及和其偽品“水白及”區別和鑒定提供依據。

a.白及BJ1；b.白及BJ2；c.白及BJ3；d.水白及SBJ1；e.水白及SBJ2；g.水白及SBJ3；

表6 白及及其偽品電化學指紋圖譜參數信息表

3 結論