蒙藥額爾敦-烏日勒對大鼠的急性毒性初探*

王青亮，高 娃，宋福順，包錫林其其格，包斯琴，都格爾，烏漢其木格，△

（1. 內蒙古醫科大學，內蒙古呼和浩特 010010； 2. 內蒙古自治區中蒙醫藥研究院，內蒙古呼和浩特010017； 3. 內蒙古自治區國際蒙醫醫院，內蒙古呼和浩特 010065）

蒙藥額爾敦-烏日勒收載于《中華人民共和國衛生部藥品標準·蒙藥分冊》，又稱珍寶丸或如意珍寶丸［1］，有清陳熱、安神、舒筋活絡及除“協日烏素”（炎癥）功效［2］，可用于治療血管系統疾病、神經系統疾病、高血壓等［3-5］。對缺血性腦卒中恢復期、腦梗死、腦出血療效較好［6-8］，能改善血液微循環及流變學指標，降低血液黏稠度，增加腦供血，解除血管痙攣，提高日常生活活動能力［9-11］，并有抗氧化、調血脂、保護血管內皮細胞、促進血管擴張等作用，可預防血栓和動脈粥樣硬化的形成。其結合蒙醫拔罐放血療法、針灸治療法治療慢性頸椎病、糖尿病末梢神經炎、糖尿病性周圍神經病變、糖尿病性心腦血管病變等也有一定療效［10-15］，能較好改善帕金森病、甲狀腺多發性結節瘤、銀屑病、精神分裂癥等的癥狀［16-20］，對膝關節骨質增生［21］、踝關節骨性關節炎療效顯著［22］，還可減輕紫杉醇、長春新堿所致神經毒性［23-24］。但尚缺乏該藥毒性的實驗研究，不僅影響其使用，其安全性判定也缺乏依據。鑒于此，本研究中采用固定劑量法進行了額爾敦-烏日勒對大鼠的急性毒性試驗，為其毒性和安全性評價提供科學依據。現報道如下。

1 材料與方法

1.1 儀器、試藥與動物

儀器：Y - TVSS 型生物顯微鏡（日本Nikon 公司）；BK - 200 型生化分析儀（山東博科生物科技有限公司）；SC-3614型低速離心機（安徽中科中佳科學儀器有限公司）；TP1020型脫水儀、EG1150H+C 型石蠟組織包埋機、RM2245型切片機（德國Leica公司）；ECLIPSE Ci型正置顯微鏡（日本Nikon 公司）；902GP - ULTS 型-80 ℃冰箱（美國Thermo Fisher Scientific 公司）。

試藥：額爾敦- 烏日勒藥材（內蒙古國際蒙醫醫院，批號為20190828），蘇木素-伊紅（HE）染料、4%多聚甲醛、中性樹脂（批號分別為G1121，P1110，G8590）；水為超純水。尿素（UREA，批號為10819024H），肌酐（CREA，批號為10728027W），白蛋白（Alb，批號為10729013H），葡萄糖（Glu，批號為10723029H），總膽紅素（TBiL，批號為10708014H），堿性磷酸酶（ALP，批號為10629008H），天門冬氨酸氨基轉移酶（AST，批號為10809010H），丙氨酸氨基轉移酶（ALT，批號為10719011H），均購自山東博科生物科技有限公司。

動物：SPF 級SD 大鼠32 只（雌雄各半，7～8 周齡，體質量180～220 g），均由斯貝福（北京）生物技術有限公司提供，實驗動物生產許可證號SCXK ＜京＞2019-0010。實驗方案經內蒙古國際蒙醫醫院機構動物護理與使用委員會（IACUC）批準（批件號：倫理第2021-10號）。適應性飼養（溫度25 ℃，相對濕度60%，光/ 暗循環12 h）7 d。

1.2 分組及給藥

將32只大鼠隨機分為對照組（等體積純凈水）及額爾敦-烏日勒低、中、高劑量組（0.54，2.16，5.40 g/kg，簡稱低、中、高劑量組），各8 只，首次給藥前禁食12 h，不禁飲，按每100 g 體質量給藥1 mL，分別灌胃相應藥物［取藥材適量，研磨成超細粉，用水配成質量濃度為0.54 g/mL的藥液（現配現用）］或水。

1.3 觀察指標

一般情況、行為與體質量：觀察大鼠皮膚、皮毛、眼睛、黏膜和行為方式的變化。并于給藥前及給藥第0，1，4，7，11，14天測定并記錄大鼠體質量，計算給藥第7，14天與給藥前的體質量變化率；監測并記錄大鼠每天的食物和水攝入量。

血液學及血生化指標：末次給藥后，采集各組雄性大鼠腹主動脈血（5 mL），置采血管中，室溫放置60 min，4 ℃下3 500 r/min離心30 min，分離，得血清。檢測白細胞計數（WBC）、淋巴細胞計數（LYM）、單核細胞計數（MON）、粒細胞計數（GRA）、血紅蛋白（Hb）、UREA、CREA、Alb、TBiL、ALP、ALT、AST水平。

主要器官：大鼠采血后，處死，分離主要器官心、肝、脾、肺、腎，觀察顏色、形態，然后清除脂肪，紙巾擦拭后稱定質量，計算各器官的相對質量（相對于體質量）。將各器官組織用4%多聚甲醛溶液固定，常規梯度脫水，56 ℃下石蠟包埋，切片（5 μm）。用中性膠封閉切片行HE染色，顯微鏡下觀察組織形態變化情況。

1.4 統計學處理

采用SPSS 22.0 統計學軟件分析。計量資料以±s表示，行t檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 一般情況與行為

給藥后，部分大鼠有行動遲緩、毛發豎立等表現，但可自行恢復，且此后均未見不良反應；皮膚、皮毛、眼、鼻及行為方式無異常；未見顫抖、流涎、腹瀉和昏迷。

給藥第7天，與對照組比較，低、中劑量組大鼠飲水量明顯增加（P＜0.05）。給藥第14 天，低、中、高劑量組大鼠的飲水量分別為（72.20±9.90）g、（79.40±8.60）g、（62.30±4.50）g，均明顯高于對照組的（56.30±2.50）g（P＜0.05）；且中劑量組大鼠第2 周進食量為（32.80 ±1.80）g，明顯高于對照組的（30.90±0.80）g（P＜0.05）。

2.2 體質量

給藥前后，不同劑量組雄性與雌性大鼠體質量均保持自然增長，與對照組大鼠無顯著差異（P＞0.05）。詳見圖1。用藥第7，14 天，低劑量組雄性大鼠體質量變化率明顯低于對照組雄性大鼠（P＜0.05），中劑量組雌性大鼠體質量變化率明顯高于對照組雌性大鼠（P＜0.01），詳見表1。

表1 各組大鼠給藥第7，14天體質量變化率比較（±s，n=4）Tab.1 Comparison of body mass change rate on the 7th and 14th days after administration in each group（±s，n=4）

表1 各組大鼠給藥第7，14天體質量變化率比較（±s，n=4）Tab.1 Comparison of body mass change rate on the 7th and 14th days after administration in each group（±s，n=4）

注：與對照組比較，*P ＜0.05，**P ＜0.01。表2至表4同。Note：Compared with those in the control group，*P ＜0.05，**P ＜0.01（for Tab.1 - 4）.

組別對照組用藥第14天38.60±4.60 13.10±1.30 13.20±6.50*15.00±3.60 26.70±8.60 31.60±12.60**33.30±9.80 13.50±2.60低劑量組中劑量組高劑量組性別雄性雌性雄性雌性雄性雌性雄性雌性禁食前體質量（g）272.50±22.10 240.30±2.10 240.90±17.10 240.10±7.00 257.00±15.70 247.70±20.50 277.50±12.50 234.70±7.60體質量變化率（%）用藥第7天26.60±3.90 9.40±0.30 8.10±4.40*9.20±1.90 20.80±3.50 19.80±6.30**21.00±4.20 8.50±2.50

A. 雄性 B. 雌性圖1 各組大鼠體質量變化A.Male rats B.Female ratsFig.1 Changes of body mass in each group

可見，額爾敦- 烏日勒可減緩雄性大鼠及加快雌性大鼠體質量增加速度。各組雌雄大鼠體質量增長速度有一定差異，考慮與大鼠數量較少及其個體之間的自然差異有關。但整體趨勢為各組大鼠體質量均保持自然增長，且雌雄大鼠體質量合并分析時無明顯差異。

2.3 主要器官

各組大鼠心、肺、肝、脾、腎等主要臟器的顏色和形態均無明顯差異。與對照組比較，中、高劑量組雄性大鼠腎臟相對質量及高劑量組雌性大鼠脾臟相對質量明顯降低（P＜0.05），詳見表2。中、高劑量組大鼠脾臟、腎臟相對質量降低，可能與體質量增長差異有關，具體原因有待進一步研究，且額爾敦-烏日勒用藥量≥2.16 g/kg時對脾臟、腎臟等器官的副作用也不能排除。

表2 各組大鼠器官相對質量比較（±s）Tab.2 Comparison of relative mass of organs in each group（±s）

表2 各組大鼠器官相對質量比較（±s）Tab.2 Comparison of relative mass of organs in each group（±s）

臟器相對質量組別性別對照組低劑量組中劑量組高劑量組雄性雌性雄性雌性雄性雌性雄性雌性第14天體質量（g）377.10±23.80 271.90±5.50 273.60±36.0 276.40±14.50 326.50±43.00 327.20±52.00 369.90±29.90 266.40±14.10心臟0.39±0.05 0.40±0.07 0.43±0.07 0.40±0.08 0.40±0.07 0.40±0.07 0.40±0.07 0.50±0.07肝臟3.00±0.40 3.30±0.20 3.50±0.30 3.40±0.30 2.90±0.30 3.30±0.30 3.00±0.09 3.10±0.20脾臟0.26±0.04 0.30±0.04 0.30±0.02 0.25±0.01 0.30±0.01 0.30±0.06 0.30±0.04 0.20±0.01*肺臟0.53±0.05 0.57±0.06 0.60±0.07 0.60±0.01 0.60±0.06 0.50±0.07 0.50±0.04 0.60±0.06腎臟0.89±0.08 0.76±0.05 0.76±0.10 0.70±0.07 0.70±0.10*0.70±0.10 0.70±0.01*0.70±0.07

各組大鼠心臟心肌纖維正常；肝臟細胞結構和雙核正常，肝小葉結構完整，肝帶結構清晰，細胞排列緊密，邊界清晰，胞漿豐富，無明顯損傷、充血、脂肪酸積累和炎性反應；肺支氣管上皮細胞正常，脾臟結構正常；腎組織均未見形態學改變，組間腎小球外觀相似，腎小球及遠端、近端腎小管正常，無間質充血、腎小管萎縮，核仁清晰可見，無變性、出血、壞死。可見，額爾敦-烏日勒對各主要器官組織形態學無明顯影響。病理學顯微圖見圖2。

圖2 大鼠主要器官組織病理形態（HE，×100）Fig.2 Histopathological morphology of major organs in rats（HE，×100）

2.4 血常規指標

結果見表3。與對照組雄性大鼠比較，中、高劑量組雄性大鼠的GRA明顯增多（P＜0.05）。但參考文獻報道的正常范圍［24］，本實驗中大鼠WBC，MON，GRA 均偏低。因此，GRA水平組間差異無生物學意義。

表3 各組雄性大鼠血常規指標比較（±s，n=4）Tab.3 Comparison of blood routine indicators of male rats in each group（±s，n=4）

表3 各組雄性大鼠血常規指標比較（±s，n=4）Tab.3 Comparison of blood routine indicators of male rats in each group（±s，n=4）

血常規指標WBC（×109/L）MON（×109/L）GRA（×109/L）Hb（g/L）LYM（%）對照組0.86±0.20 0.07±0.03 0.20±0.06 152.10±1.19 67.20±2.15低劑量組1.26±0.68 0.10±0.08 0.34±0.15 149.40±16.60 62.27±5.05中劑量組5.70±6.80 0.58±0.75 0.82±0.59*159.10±8.90 70.07±8.91高劑量組0.83±0.12 0.06±0.015 0.32±0.03*155.50±3.40 52.83±3.140

2.5 血生化指標

與對照組雄性大鼠比較，中、高劑量組雄性大鼠Alb 水平明顯降低（P＜0.05），詳見表4。但仍在正常范圍［25］，故該差異無生物學意義。

表4 各組雄性大鼠血生化指標比較（±s，n=4）Tab.4 Comparison of blood biochemical indicators of male rats in each group（±s，n=4）

表4 各組雄性大鼠血生化指標比較（±s，n=4）Tab.4 Comparison of blood biochemical indicators of male rats in each group（±s，n=4）

血生化指標Alb（g/L）ALP（U/L）ALT（U/L）AST（U/L）TBiL（μmol/L）UREA（mmol/L）CREA（μmol/L）對照組39.20±2.70 281.60±67.20 52.70±24.90 303.60±225.00 3.60±0.74 10.30±2.80 30.50±10.30低劑量組36.80±4.10 238.60±79.30 57.30±8.40 499.80±121.70 4.20±0.96 11.79±1.40 25.00±3.03中劑量組32.20±2.70*233.70±20.20 29.60±3.80 159.90±27.20 3.10±1.30 10.20±0.47 25.70±7.10高劑量組32.90±0.90*234.30±28.50 40.60±15.70 320.90±252.20 3.50±2.70 10.10±0.84 26.40±1.78

3 討論

額爾敦-烏日勒是治療神經系統疾病的理想藥物，是蒙醫治療黑脈病（相當于西醫的心腦血管系統疾病）和白脈病（相當于西醫的神經系統疾病）的主要藥物。近年來的研究再次證明額爾敦-烏日勒對腦梗死的療效［26-27］。該藥作用機制之一是可通過介導小膠質細胞的基因表達，抑制大腦的炎癥，從而改善腦卒中的恢復質量［28-30］。但由于其所含多種的活性化合物可能同時作用于更多靶點，實際作用機制可能更復雜。由于各研究中額爾敦-烏日勒用藥劑量各不相同，為進一步分析其作用機制，首先需確定其安全劑量，故有必要研究該藥的毒性。

本研究中分3種劑量單次給藥，觀察對大鼠的急性毒性。發現大鼠對額爾敦-烏日勒一次性耐受量為5.40 g/kg。至于對更高劑量能否耐受，有待下一步研究。部分大鼠給藥后出現行動遲緩、毛發豎立等表現，但未死亡。組間部分大鼠進食量、飲水量、體質量增幅、GRA、WBC、脾腎相對質量有明顯差異（但相關數值仍在正常范圍內），可能存在一定的副作用。組織病理學分析顯示，額爾敦-烏日勒劑量≤5.40 g/kg時對主要器官無明顯毒性，也不會導致死亡，但其安全性和毒性有待進一步研究。

某種藥物用量達臨床常規用量100倍時如大鼠仍未死亡則視為該藥對人安全。本研究中，遵循《化學藥物急性毒性試驗技術指導原則》（給藥劑量可根據實際情況和文獻來定），并結合文獻［31-32］，采取了成人臨床常規劑量的1，4，10倍分別作為低、中、高劑量，結果3組大鼠均未死亡。嘗試更高劑量54 g/kg（即臨床用量的100倍）時，由于是單藥材粉碎混合制成的藥物，配藥時無法全部溶解，未進行后續操作。但本研究的數據仍可為進一步研究該藥的臨床用藥安全性提供參考。此外，為明確該藥的安全劑量，還需進一步進行亞急性毒性試驗。