甲狀腺乳頭狀癌患者PD-1/PD-L1表達(dá)與臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系

楊 勇,陳 慧,曹金雷,唐詠梅

(義烏市中心醫(yī)院 病理科,浙江 金華 322000)

甲狀腺乳頭狀癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)是甲狀腺癌最常見的亞型,其發(fā)病率不斷升高且趨于年輕化[1]。臨床主要采用放射性碘治療、手術(shù)治療、促甲狀腺激素抑制治療等手段治療PTC,但部分患者腫瘤惡性程度高,治療后易轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā),降低生存率[2]。因此,早發(fā)現(xiàn)、早診斷并分析影響預(yù)后的危險(xiǎn)因素是延長PTC患者生存期的重要策略。檢測生物學(xué)標(biāo)志物在癌組織中的表達(dá)情況可輔助診斷惡性腫瘤、靶向治療的可能性,或預(yù)測預(yù)后。程序性細(xì)胞死亡受體-1(PD-1)/程序性細(xì)胞死亡配體-1(PD-L1)是調(diào)控T細(xì)胞活化的負(fù)性共刺激分子,兩者結(jié)合能影響效應(yīng)T細(xì)胞的活性,抑制T細(xì)胞增殖,促進(jìn)腫瘤發(fā)生免疫逃逸[3]。既往研究顯示,PD-1、PD-L1廣泛表達(dá)于不同惡性腫瘤細(xì)胞,與惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān)[4]。目前臨床關(guān)于PD-1、PD-L1在胃癌組織及食管癌組織中表達(dá)的研究較多[5-6],但兩者在PTC的表達(dá)情況尚不明確。基于此,本研究探討PD-1/PD-L1表達(dá)與PTC患者臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系,現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集我院2019年1月—12月接受手術(shù)切除治療的PTC患者191例。納入標(biāo)準(zhǔn):①符合《甲狀腺癌診療規(guī)范(2018年版)》[7]中PTC診斷標(biāo)準(zhǔn),經(jīng)病理學(xué)檢查確診;②首次確診;③符合切除術(shù)手術(shù)指征;④術(shù)前未接受放化療;⑤無其他惡性腫瘤。排除標(biāo)準(zhǔn):①良性甲狀腺腫瘤者;②PTC復(fù)發(fā)者;③合并免疫系統(tǒng)疾病、感染性疾病者;④合并髓樣癌、未分化性甲狀腺癌等其他組織學(xué)類型;⑤臨床資料、病理資料及隨訪資料不全者;⑥其他重要臟器嚴(yán)重?fù)p傷者。191例PTC患者中男性76例,女性115例;年齡23～80歲,平均(49.03±13.36)歲;TNM分期:Ⅰ期67例,Ⅱ期89例,Ⅲ期29例,Ⅳ期6例;腫瘤最大徑:≥1 cm 89例,<1 cm 102例;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移58例。TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移判定參考美國癌癥聯(lián)合委員會癌癥分期手冊[8]判定。

1.2 PD-1、PD-L1檢測

1.2.1 檢測方法 術(shù)中取癌組織及癌旁組織,經(jīng)4%中性甲醇溶液固定、脫水、石蠟包埋后切片,采用免疫組化法檢測PD-1、PD-L1表達(dá)情況。陰性對照選擇PBS,陽性對照選擇已知陽性切片。兔抗人PD-1、PD-L1均購自于GenomeMe公司,嚴(yán)格按照說明書操作。

1.2.2 結(jié)果判斷 PD-1定位于細(xì)胞質(zhì),PD-L1定位于細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì),顯微鏡下觀察染色情況。400倍光學(xué)顯微鏡下切片隨機(jī)選擇5個(gè)視野,滿足細(xì)胞定位明確、間質(zhì)清晰、無背景著色,每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)腫瘤細(xì)胞,結(jié)合陽性細(xì)胞數(shù)目所占比例及細(xì)胞染色強(qiáng)度進(jìn)行評分。陽性細(xì)胞百分比=陽性細(xì)胞數(shù)目/視野總細(xì)胞數(shù)目×100%;陽性細(xì)胞百分比≤5%為0分,>5%～25%為1分,>25%～50%為2分,>50%～75%為3分,>75%為4分。將染色強(qiáng)度分為無著色、淡黃色、棕黃色、棕褐色4個(gè)等級,分別計(jì)0、1、2、3分。總?cè)旧u分為染色強(qiáng)度評分與陽性細(xì)胞百分比評分之積,總?cè)旧u分<3分視為陰性,總?cè)旧u分≥3分視為陽性。

1.3 隨訪 所有PTC患者術(shù)后均接受2年隨訪,記錄患者復(fù)發(fā)情況及生存情況;術(shù)后1年內(nèi),1次/月;術(shù)后第2年,1次/季;隨訪方式包括微信、電話、定期門診復(fù)查,隨訪期間患者死亡即終止。

1.4 觀察指標(biāo) ①記錄PTC患者癌組織及癌旁組織中PD-1、PD-L1的表達(dá)情況;②比較不同臨床病理特征PTC患者的PD-1、PD-L1水平;③分析PD-1、PD-L1表達(dá)與PTC患者預(yù)后的關(guān)系,以及影響PTC患者預(yù)后的危險(xiǎn)因素。

2 結(jié)果

2.1 癌組織及癌旁組織中PD-1、PD-L1表達(dá)情況 免疫組化結(jié)果顯示,癌組織中PD-1、PD-L1陽性表達(dá)率分別為39.27%(75/191)、53.40%(102/191),高于癌旁組織的15.18%、22.51%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=27.958、38.695,均P<0.001)。

2.2 PD-1、PD-L1表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系 比較不同臨床病理特征PTC患者癌組織中的PD-1、PD-L1水平,結(jié)果顯示:PD-1、PD-L1表達(dá)與TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05),與性別、年齡、腫瘤大小無關(guān)(P>0.05)。見表1。

表1 不同臨床病理特征PTC患者癌組織中的PD-1、PD-L1表達(dá)情況[n(%)]

2.3 隨訪結(jié)局 所有患者均隨訪2年,隨訪期間無死亡,31例患者復(fù)發(fā)。PD-1、PD-L1陽性表達(dá)組的復(fù)發(fā)率分別為26.67%(20/75)、23.53%(24/102),高于陰性表達(dá)組(9.48%、7.87%),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=9.893、21.107,均P<0.05)。

2.4 影響PTC患者預(yù)后的因素分析 單因素分析顯示,TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、PD-1及PD-L1與PTC患者復(fù)發(fā)有關(guān)(P<0.05);以是否復(fù)發(fā)為因變量(未復(fù)發(fā)組=0,復(fù)發(fā)組=1),以單因素分析中有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的因素為自變量(TNM分期為Ⅰ/Ⅱ期=0,TNM分期為Ⅲ/Ⅳ期=1;無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移=0,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移=1;PD-1陰性表達(dá)=0,PD-1陽性表達(dá)=1;PD-L1陰性表達(dá)=0,PD-L1陽性表達(dá)=1),進(jìn)行Logistic回歸分析。結(jié)果顯示,TNM分期高、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、PD-1及PD-L1陽性表達(dá)均為影響PTC患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)。見表2。

表2 影響PTC患者預(yù)后的多因素分析

3 討論

甲狀腺癌是代謝內(nèi)分泌科最常見的惡性腫瘤,病理類型包括濾泡狀癌、髓樣癌、未分化癌及PTC,其中90%為PTC[9-10]。PTC惰性生長,多數(shù)患者預(yù)后較好,但仍有少數(shù)患者對手術(shù)、促甲狀腺激素抑制治療等傳統(tǒng)手段不敏感,治療后發(fā)生轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā),嚴(yán)重者還會發(fā)展為未分化型甲狀腺癌,危及生命健康[11]。近年來隨著免疫組化技術(shù)和分子生物學(xué)的發(fā)展,高特異性及靈敏度的分子標(biāo)志物輔助診斷惡性腫瘤逐漸應(yīng)用于臨床,對臨床診斷、治療敏感性及預(yù)后判斷具有重要價(jià)值。

PD-1是由多個(gè)氨基酸組成的Ⅰ型跨膜蛋白,具有抑制機(jī)體免疫功能,在惡性腫瘤的發(fā)生及發(fā)展中起著重要作用[12]。有報(bào)道顯示,非小細(xì)胞肺癌患者癌組織中PD-1呈高表達(dá),且能通過免疫抑制作用促進(jìn)腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,引起不良預(yù)后[13];PD-L1在不同TNM分期及不同淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌中的表達(dá)存在顯著差異[14]。PD-L1主要由響應(yīng)免疫介導(dǎo)的γ干擾素等信號驅(qū)動(dòng),表達(dá)于腫瘤活躍T細(xì)胞炎癥區(qū)域,既往研究顯示其與多種惡性腫瘤的發(fā)生有關(guān),且表達(dá)水平與腫瘤惡性程度密切相關(guān)[15-16]。有研究[17]顯示,胃癌患者PD-L1表達(dá)異常,且表達(dá)情況與TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。本研究結(jié)果顯示,PTC患者癌組織中PD-1、PD-L1陽性表達(dá)率高于癌旁組織,這可能是因?yàn)?PD-1/PD-L1通路能調(diào)節(jié)機(jī)體免疫機(jī)制,PD-1可以結(jié)合其配體PD-L1,導(dǎo)致PD-1胞質(zhì)區(qū)酪氨酸轉(zhuǎn)化基序發(fā)生磷酸化,從而產(chǎn)生抑制信號,減弱TCR/CD28信號對免疫細(xì)胞的活化作用,促進(jìn)活化T細(xì)胞凋亡,引起腫瘤免疫逃逸。

本研究進(jìn)一步分析PD-1、PD-L1與PTC患者臨床病理特征的關(guān)系,發(fā)現(xiàn)PD-1、PD-L1表達(dá)與TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān),說明PD-1、PD-L1在PTC的發(fā)生發(fā)展過程中起著促進(jìn)作用,也提示臨床可將PD-1、PD-L1作為評估PTC發(fā)生侵襲性生物學(xué)行為的標(biāo)志物。另外,隨訪結(jié)果顯示,PD-1、PD-L1陽性表達(dá)組患者2年復(fù)發(fā)率均高于陰性表達(dá)組,證明了PD-1、PD-L1表達(dá)對PTC患者預(yù)后的影響。Logistic回歸分析結(jié)果顯示,TNM分期高、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、PD-1及PD-L1陽性表達(dá)均為影響PTC患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,進(jìn)一步證實(shí)PD-1、PD-L1能夠作為評估PTC患者預(yù)后的參考指標(biāo)。

綜上所述,PTC患者癌組織中PD-1、PD-L1呈高表達(dá),不同臨床病理特征患者的PD-1、PD-L1表達(dá)存在差異,兩者有望成為PTC預(yù)后的評估指標(biāo)。