3 個(gè)長(zhǎng)根菇新品種的選育報(bào)告*

姚春馨，王小艷，王小蓉，田果廷**

（1.云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)與種質(zhì)資源研究所，云南 昆明 650205；2.陸良爨鄉(xiāng)綠圓菇業(yè)有限公司，云南 曲靖 655600）

甘藍(lán)色膜褶菌[Hymenopellis raphanipes （Berk.）R.H.Petersen]，隸屬于擔(dān)子菌門（Basidiomycota） 傘菌綱（Agaricomycetes） 傘菌目（Agaricales） 膨瑚菌科（Physalacriaceae） 膜褶菌屬（Hymenopellis）[1]，同物異名為卵孢小奧德蘑（Oudemansiella raphanipes），又名長(zhǎng)根菇，別名有露水雞址樅、黑皮雞址樅、紅土雞址樅等[2]。甘藍(lán)色膜褶菌富含蛋白質(zhì)、脂肪、糖類、維生素、微量元素以及真菌多糖、三萜類、樸菇素、生物堿、牛磺酸、葉酸等[3-5]，其活性成分具有降血壓、促進(jìn)人體細(xì)胞生長(zhǎng)等功效[6-7]。其形態(tài)、口感、品質(zhì)及食用方法與蟻巢傘屬雞址樅菌（Termitomyces albuminosus） 相似，是一類具較高營(yíng)養(yǎng)、藥用及經(jīng)濟(jì)價(jià)值的特色珍稀食用菌，野生子實(shí)體價(jià)格較高。

長(zhǎng)根菇作為我國(guó)近年來市場(chǎng)熱銷的種類，是商業(yè)化栽培的熱點(diǎn)特色菌類，發(fā)展前景好，生產(chǎn)規(guī)模和產(chǎn)量上升較快。但目前適宜各地栽培生產(chǎn)的優(yōu)良品種極少，國(guó)內(nèi)中文檢索結(jié)果僅有 “露水雞址樅”（川審菌2003009） 1 種[8]。而市場(chǎng)流通的其他栽培菌株良莠不齊，多數(shù)菌株栽培周期長(zhǎng)、抗性差，導(dǎo)致生產(chǎn)不穩(wěn)定，品質(zhì)及經(jīng)濟(jì)效益不佳[9]，嚴(yán)重制約了長(zhǎng)根菇的產(chǎn)業(yè)化發(fā)展。針對(duì)新品種匱乏、優(yōu)良菌種繁育和規(guī)模化栽培技術(shù)不規(guī)范等行業(yè)痛點(diǎn)問題，研究發(fā)掘并系統(tǒng)選育了系列特色新品種。

1 材料與試劑

1.1 供試菌株

供試菌株信息見表1。

表1 供試菌株信息Tab.1 Information of test strains

由表1 所示，項(xiàng)目組依托云南豐富的野生食用菌資源，于2009 年開始進(jìn)行長(zhǎng)根菇野生菌株的收集與評(píng)價(jià)[10-11]，按照《食用菌品種選育技術(shù)規(guī)范》（GB/T 21125-2007）[12]進(jìn)行選育，2011 年至2016 年進(jìn)行菌株分離和鑒定，以露水雞址樅為對(duì)照，2017 年至2020年開展出菇試驗(yàn)、品比試驗(yàn)，期間進(jìn)行分子鑒定、抗性鑒定和品質(zhì)分析。

1.2 培養(yǎng)基配方

YPD 固體培養(yǎng)基配方：酵母膏10 g·L-1，蛋白胨20 g·L-1，葡萄糖20 g·L-1，瓊脂粉20 g·L-1，pH 自然，進(jìn)行菌絲培養(yǎng)時(shí)采用25 ℃，暗培養(yǎng)。

菌種栽培培養(yǎng)基配方：闊葉樹雜木屑52%、玉米芯35%、麩皮10%、豆粕2%、石膏粉1%，含水量60%～65%；可按當(dāng)?shù)剞r(nóng)林廢料適當(dāng)調(diào)整培養(yǎng)料配方，但需確保含有50%以上富含木質(zhì)素的雜木屑。

1.3 試驗(yàn)試劑與儀器

試驗(yàn)所用擎科金牌Mix （green） PCR 試劑，南京諾唯贊生物科技有限公司；Fungal gDNA Isolation Kit DNA 提取試劑盒，拜爾迪生物技術(shù)有限公司（Biomiga）；Gel Extraction Kit/D2500-02 膠回收試劑盒，美國(guó)Omega Bio-Tek 公司；其他化學(xué)試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。PCR 引物合成和擴(kuò)增產(chǎn)物測(cè)序由擎科生物（昆明） 完成。

MLS-2420 高壓蒸汽滅菌鍋，日本三洋（Sanyo）公司；DHP-600BS 培養(yǎng)箱，北京永光明醫(yī)療儀器有限公司；SW-CJ-IF 超凈工作臺(tái)，蘇州凈化設(shè)備有限公司；SZX16 顯微鏡，日本奧林巴斯（Olympus） 公司；80i 顯微鏡，日本尼康（Nikon） 公司；各規(guī)格移液槍，艾本德（eppendorf） 公司。

2 試驗(yàn)方法

2.1 分子生物學(xué)鑒定

將6 個(gè)供試菌株轉(zhuǎn)接入YPD 培養(yǎng)皿中，25 ℃暗培養(yǎng)6～8 d，直至菌絲長(zhǎng)滿。刮取菌絲，液氮研磨，用DNA 提取試劑盒提取基因組DNA。經(jīng)電泳檢測(cè)合格后，采用真菌ITS 通用引物（ITS1/5′-TCCGTAGGTG AACCTGCGG-3′，ITS4/5′-TCCTCCGCTTATTGATAT GC-3′） 對(duì)供試菌株進(jìn)行擴(kuò)增。

擴(kuò)增產(chǎn)物，雙向測(cè)序并進(jìn)行拼接處理，在Gen－Bank 上進(jìn)行BLAST 比對(duì)。用MEGA 6.0 軟件進(jìn)行ITS 序列最大相似法分析，構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。

2.2 栽培試驗(yàn)

栽培方式：采用項(xiàng)目組前期研究總結(jié)的栽培技術(shù)[10]，即熟料袋栽覆土出菇模式，使用通用聚乙烯塑料袋（16 cm×35 cm×0.05 mm），每袋裝干料550 g，每袋濕料質(zhì)量為1 200 g。

2.2.1 品比試驗(yàn)

2018 年在石林縣板橋食用菌試驗(yàn)基地進(jìn)行品種比較試驗(yàn)，11 月至翌年2 月接種發(fā)菌管理，2 月開始進(jìn)行出菇管理，6 月開始采收。設(shè)置5 個(gè)供試菌株組與1 個(gè)對(duì)照組，每組200 個(gè)菌棒，設(shè)3 次重復(fù)。

2.2.2 區(qū)域試驗(yàn)

2019 年至2020 年，對(duì)品比試驗(yàn)篩選獲得的優(yōu)良菌株進(jìn)行區(qū)域栽培試驗(yàn)，在昆明市盤龍區(qū)、官渡區(qū)、石林縣和東川區(qū)，德宏州芒市、隆陽(yáng)食（藥）用菌產(chǎn)區(qū)6 個(gè)試驗(yàn)點(diǎn)進(jìn)行。每個(gè)菌種1 000 個(gè)菌棒，累計(jì)栽培規(guī)模超過4.4 萬個(gè)菌棒。同時(shí)，按照《農(nóng)作物品種審定規(guī)范食用菌》 （NY/T 1844-2010）[13]的方法開展2 年的抗性鑒定。

2.2.3 生產(chǎn)試驗(yàn)

2021 年至2022 年，在德宏州芒市、昆明市石林縣進(jìn)行優(yōu)良菌株的生產(chǎn)試驗(yàn)。每個(gè)試驗(yàn)點(diǎn)各供試菌種栽培5 000 個(gè)菌棒，2 個(gè)試驗(yàn)點(diǎn)共計(jì)栽培規(guī)模超過8 萬菌棒。

2.3 品質(zhì)分析

將生產(chǎn)試驗(yàn)采收后的新鮮子實(shí)體樣品送中華全國(guó)供銷合作總社昆明食用菌質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心進(jìn)行主要成分檢測(cè)。

3 選育結(jié)果

3.1 分子生物學(xué)鑒定結(jié)果

通過rDNA-ITS 序列比對(duì)法和ITS 序列最大相似法分析，以香菇（Lentinula edodas） 為外類群，各供試菌株和對(duì)照菌珠的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系見圖1。

圖1 6 個(gè)長(zhǎng)根菇菌株及近似種的ITS 序列系統(tǒng)發(fā)育樹Fig.1 Phylogenetic tree of six Hymenopellis raphanipes and related species based on ITS sequences

如圖1 所示，長(zhǎng)根菇供試菌株與Hymeno pellis raphanipes （KX688240.1） ITS 序列同源性極高，相似度為99%以上，且與對(duì)照CK 及外緣物種均有一定的遺傳距離，因此，將新品種YJZ01、YJZ04 和YJZ05 均鑒定為膜褶菌屬甘藍(lán)色膜褶菌（H.raphanipes）。

3.2 栽培試驗(yàn)結(jié)果

3.2.1 品比試驗(yàn)結(jié)果

5 個(gè)供試菌株的品比試驗(yàn)結(jié)果見表2。

表2 5 個(gè)供試菌株品比試驗(yàn)結(jié)果Tab.2 Comparison experiment results of five test strains

由表2 結(jié)果顯示，5 個(gè)新菌株出菇期均短于對(duì)照，特別是YJZ05 菌株出菇期比CK 縮短24 d；5 個(gè)新菌株鮮菇產(chǎn)量均比對(duì)照增加。篩選得到3 個(gè)優(yōu)良菌株綜合產(chǎn)量等因素，菌株YJZ01 比CK 增產(chǎn)28.57%，YJZ04 菌株增產(chǎn)32.40%，YJZ05 菌株增產(chǎn)35.53%；生物學(xué)效率相比對(duì)照也有大幅提高。

3.2.2 區(qū)域試驗(yàn)

經(jīng)品比試驗(yàn)篩選得到3 個(gè)長(zhǎng)根菇優(yōu)良菌株的區(qū)域試驗(yàn)產(chǎn)量比較見表3。

表3 3 個(gè)供試菌株區(qū)域試驗(yàn)產(chǎn)量比較Tab.3 Yield companison of three test strains in regional experiment

由表3 結(jié)果表明，在高海拔地區(qū)盤龍區(qū)阿子營(yíng)（海拔2 300 m），4 個(gè)供試菌株鮮菇產(chǎn)量?jī)H達(dá)140～160 g/袋，產(chǎn)量較低，均不適宜在高海拔地區(qū)栽培生產(chǎn)。在海拔1 000 ～2 000 m 地區(qū)，菌株YJZ01、YJZ05 產(chǎn)量高于360 g/袋，特別是YJZ05 菌株，與其他菌株相比，在中高海拔地區(qū)的官渡區(qū)、石林縣和東川區(qū)產(chǎn)量均最高，分別比對(duì)照增產(chǎn)44.12%、32.99%、33.11%；在海拔1 700 m 以下地區(qū)，YJZ04菌株的產(chǎn)量表現(xiàn)更好，比對(duì)照增產(chǎn)24.00%～40.57%。

3.2.3 生產(chǎn)試驗(yàn)結(jié)果

3 個(gè)優(yōu)良長(zhǎng)根菇菌株的生產(chǎn)試驗(yàn)結(jié)果見表4。

表4 3 個(gè)供試菌珠生產(chǎn)試驗(yàn)產(chǎn)量比較Tab.4 Yield comparison of three test strains in production experiment

由表4 可知，生產(chǎn)試驗(yàn)中新選育菌株YJZ01、YJZ04 和YJZ05 平均鮮菇產(chǎn)量分別為372 g/袋、386 g/袋與395 g/袋，比對(duì)照相比平均增產(chǎn)28.28%、33.10%與36.21%，產(chǎn)量表現(xiàn)最優(yōu)的是在芒市生產(chǎn)試驗(yàn)的YJZ04 菌株及石林試驗(yàn)生產(chǎn)的YJZ05 菌株。

3.3 新品種特性分析結(jié)果

以露水雞址樅為對(duì)照，在海拔700～2 300 m 的6個(gè)試驗(yàn)示范基地進(jìn)行多年示范栽培，選育了出菇整齊、性狀穩(wěn)定、產(chǎn)量高、商品性好的3 個(gè)菌株，屬中高溫型長(zhǎng)根菇品種，其子實(shí)體形態(tài)見圖2。

圖2 3 個(gè)長(zhǎng)根菇新品種子實(shí)體Fig.2 Fruit bodies of three new cultivars of Hymenopellis raphanipes

3 個(gè)新品種于2022 年獲得云南省非主要農(nóng)作物品種鑒定證書，分別定名為 “云雞址樅1 號(hào)”（YJZ01）[滇鑒(食用菌) 2022131 號(hào)]、“云雞址樅4 號(hào)”（YJZ04）[滇鑒(食用菌) 2022133 號(hào)] 和“云雞址樅5 號(hào)”（YJZ05）[滇鑒(食用菌) 2022134 號(hào)]。

3.3.1 形態(tài)特征

3 個(gè)長(zhǎng)根菇新品種菌絲均呈白色絨毛狀，具鎖狀聯(lián)合和分枝分隔，菌落苔面整齊，氣生菌絲發(fā)達(dá)。僅YJZ04 菌株在菌絲老熟后分泌色素，產(chǎn)生暗褐色菌皮。3 個(gè)新品種的子實(shí)體形態(tài)特征描述見表5。

表5 長(zhǎng)根菇新品種形態(tài)特征比較Tab.5 Morphology comparison of the new cultivars of Hymenopleeis raphanipes

如表5 所示，3 個(gè)新品種的子實(shí)體特征差異顯著。

3.3.2 抗性比較

3 個(gè)長(zhǎng)根菇菌株的抗性鑒定比較見表6。

表6 新品種抗性鑒定Tab.6 Resistance identification of new cultivars

如表6 所示，新品種在整個(gè)栽培生產(chǎn)期內(nèi)（包括菌絲培育、菌棒發(fā)菌、開袋、覆土出菇等時(shí)期），雜菌污染率低，與對(duì)照相比具有更強(qiáng)的抗雜性；在出菇管理期間，發(fā)病率均較低，具有較好的抗病性。

3.3.3 品質(zhì)比較

新品種品質(zhì)優(yōu)，具有良好的食用口感和較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。與對(duì)照相比，YJZ01 菌株蛋白質(zhì)增加14.04%，脂肪降低66.67%，鋅增加12.63%，天然磷增加28.93%。YJZ04 菌株蛋白質(zhì)增加15.79%，鐵增加27.24%，鋅增加37.89%，纖維素增加42.31%，天然磷增加27.12%。YJZ05 菌株灰分比對(duì)照減少22.22%，脂肪降低5 倍，鐵增加20.23%，鋅增加30.53%，多糖增加11.11%，天然磷增加26.95%。新品種YJZ05 菌株在常規(guī)栽培條件下，其子實(shí)體干物質(zhì)有機(jī)硒含量達(dá)0.78 mg·kg-1，比對(duì)照增加83.10%，填補(bǔ)了國(guó)內(nèi)富硒長(zhǎng)根菇品種的空白。

4 栽培技術(shù)要點(diǎn)總結(jié)

4.1 發(fā)菌管理

3 個(gè)品種菌絲適宜中性偏酸環(huán)境生長(zhǎng)，最適pH 5.5～6.5。菌株YJZ01 和YJZ05 菌絲生長(zhǎng)溫度10～35 ℃，而菌株YJZ04 可以適應(yīng)高溫15～37 ℃，最適溫度均為20～25 ℃。控制發(fā)菌室溫度為15～25 ℃，空氣相對(duì)濕度為40%～60%，通風(fēng)條件下暗培養(yǎng)，成熟后開袋覆土（壤土或者沙壤土，厚度3～5 cm），形成褐色斑駁菌皮或菌絲密集成束狀時(shí)出菇管理。

4.2 出菇管理

菌株YJZ01 子實(shí)體生長(zhǎng)適宜溫度為20～30 ℃，菌株YJZ05 為18～28 ℃，具高溫耐性的菌株YJZ04則為20～35 ℃。出菇期間管理應(yīng)模擬其生境小環(huán)境，關(guān)鍵在于控制溫度、濕度和通風(fēng)。需特別注意菌株YJZ04 在菌絲生長(zhǎng)旺盛期，菌包極易升溫，應(yīng)確保棚溫＜28 ℃。子實(shí)體發(fā)生后，空氣相對(duì)濕度控制在75%～90%，溫度控制在20～30 ℃，CO2濃度控制在0.3%。新品種屬變溫結(jié)實(shí)型菌類，早晚應(yīng)采用通風(fēng)、噴水等降溫措施，以8 ℃左右的溫差刺激催菌。

4.3 采收

按市場(chǎng)的需求，選擇開傘程度小和開傘程度中等的菇，小菇耐儲(chǔ)運(yùn)，貨架期長(zhǎng)，較適于鮮銷；大菇則適宜進(jìn)行加工。按品種特點(diǎn)采收：菌株YJZ01小菇形態(tài)圓整、質(zhì)地脆硬，耐儲(chǔ)運(yùn)，貨架期長(zhǎng)，適宜鮮銷，成熟后開傘大而肉厚，產(chǎn)量可觀，加工最佳；菌株YJZ04 菇形整齊，開傘慢，顏色深，口感脆嫩，耐包裝，貨架期長(zhǎng)，宜冷鏈鮮銷；菌株YJZ05 菌柄色白、修長(zhǎng)，菌蓋光滑、圓整，菌肉潔白細(xì)嫩，菇型挺拔，則更適宜整菇加工。

4.4 轉(zhuǎn)潮管理

采收后，應(yīng)及時(shí)清理表面覆土及殘留菇體，停水、保溫養(yǎng)菌5～10 d 后噴水，通過增濕、降溫、增光、促蕾，轉(zhuǎn)潮管理得當(dāng)可再采收5～7 潮。

4.5 病蟲害防治

病蟲害防治遵循預(yù)防為主，藥劑防治為輔的原則。長(zhǎng)根菇病害較少，主要有霉菌、細(xì)菌和粘菌，注意無菌操作環(huán)節(jié)，防止栽培袋破損，提前做好土壤消毒并定期通風(fēng)換氣。蟲害主要發(fā)生在發(fā)菌期，做好覆土材料殺蟲預(yù)處理，宜選擇高效、低毒、低殘留的農(nóng)藥。

5 結(jié)論與展望

針對(duì)長(zhǎng)根菇品種缺乏、優(yōu)良菌種及配套栽培技術(shù)不足等行業(yè)瓶頸，項(xiàng)目組發(fā)掘云南野生食用菌資源，分別自大理州雞足山、普洱市錦屏鎮(zhèn)和保山市潞江壩采集野生長(zhǎng)根菇菌株，經(jīng)組織分離、初篩、復(fù)篩，系統(tǒng)選育獲得的3 個(gè)特色新品種：云雞址樅1 號(hào)（YJZ01）、云雞址樅4 號(hào)（YJZ04） 和云雞址樅5 號(hào)（YJZ05），三者均為甘藍(lán)色膜褶菌（Hymenopellis raphanipes）。新品種具有特異性、一致性和穩(wěn)定性，與對(duì)照露水雞址樅相比，出菇期短、產(chǎn)量高、品質(zhì)優(yōu)，屬中高溫型抗性品種。YJZ01、YJZ05 在海拔2 000 m以下地區(qū)栽培表現(xiàn)抗逆性和適應(yīng)性強(qiáng)，YJZ04 在海拔1 700 m 以下地區(qū)栽培耐熱性和抗性特征突出。新品種的選育極大的豐富了我國(guó)長(zhǎng)根菇的優(yōu)良品種，保護(hù)和利用了云南高原特色野生菌優(yōu)質(zhì)資源，促進(jìn)了高原特色菌產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。