腫瘤相關(guān)成纖維細胞在乳腺浸潤性導(dǎo)管癌中的臨床意義

朱永祺 朱燕 劉宏斌 張曉娟

[摘 ? 要] ? 目的：探討乳腺浸潤性導(dǎo)管癌中腫瘤相關(guān)成纖維細胞（cancer-associated fibroblasts，CAFs）的臨床意義。方法：選取乳腺癌改良根治手術(shù)標(biāo)本102例，采用免疫組織化學(xué)方法檢測浸潤性導(dǎo)管癌組織及癌旁組織中α-平滑肌肌動蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）表達，分析與臨床病理參數(shù)的相關(guān)性及預(yù)后意義。結(jié)果：在乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織中α-SMA陽性細胞率47.06%，而癌旁正常乳腺組織中無陽性細胞，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.000）。癌組織中α-SMA表達與腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期顯著相關(guān)（P＜0.01）。單因素Log-Rank檢驗顯示組織學(xué)分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、ER表達與預(yù)后相關(guān)（P＜0.01）。多因素Cox回歸分析顯示組織學(xué)分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期均具有獨立預(yù)后意義（P＜0.05）。結(jié)論：浸潤性導(dǎo)管癌組織中CAFs增多促進腫瘤的發(fā)生發(fā)展及侵襲轉(zhuǎn)移，有望成為乳腺癌免疫治療的新靶點。

[關(guān)鍵詞] ? 腫瘤相關(guān)成纖維細胞；α-平滑肌肌動蛋白；乳腺浸潤性導(dǎo)管癌；免疫組織化學(xué)染色

[中圖分類號] ? R737.9 [文獻標(biāo)志碼] ? A [DOI] ? 10.19767/j.cnki.32-1412.2023.03.005

Clinical significance of cancer-associated fibroblasts

in invasive ductal carcinoma of the breast

ZHU Yongqi1， ZHU Yan2， LIU Hongbin2， ZHANG Xiaojuan2

（1Medical College of Nantong University， Jiangsu 226001;

2Department of Pathology， Second Affiliated Hospital of Nantong University / the First Hospital of Nantong）

[Abstract] ? Objective： To investigate the clinical significance of cancer-associated fibroblasts （CAFs） in invasive ductal carcinoma of the breast. Methods： 102 cases of breast cancer after modified radical mastectomy were selected， and immunohistochemical methods were used to detect the expression of α- Smooth muscle actin （α- SMA） in invasive ductal carcinoma tissues and adjacent tissues， and its correlation with clinical pathological parameters and prognostic significance were analyzed. Results： In invasive ductal carcinoma of the breast， the positive cell rate of α-SMA was 47.06%， while there were no positive cells in normal breast tissue adjacent to cancer， with a statistically significant difference （P=0.000）. In cancer tissue， the expression of α-SMA was significantly correlated with tumor diameter， lymph node metastasis， and TNM staging （P<0.01）. Single factor Log Rank test showed that histological grading， lymph node metastasis， TNM staging and ER expression were correlated with prognosis （P<0.01）. Multivariate Cox regression analysis showed that histological grading， lymph node metastasis， and TNM staging had independent prognostic significance （P<0.05）. Conclusion： The increase of CAFs in invasive ductal carcinoma can promote the occurrence， development， invasion and metastasis of the tumor， which is expected to become a new target of immunotherapy for breast cancer.

[Key words] ? cancer-associated fibroblasts; α-Smooth muscle actin; invasive ductal carcinoma of the breast; immunohistochemical staining

近年來我國乳腺癌發(fā)病率呈年輕化及逐年上升趨勢[1]。越來越多研究表明，調(diào)控腫瘤微環(huán)境是控制腫瘤進展、提高腫瘤療效的有效方法[2]。腫瘤相關(guān)成纖維細胞（cancer-associated fibroblasts，CAFs）是腫瘤微環(huán)境中最重要的異質(zhì)細胞群，能產(chǎn)生和分泌多種活性因子參與腫瘤微環(huán)境的調(diào)控，在腫瘤增殖、侵襲轉(zhuǎn)移、微血管生成等方面發(fā)揮作用[3-5]。α-平滑肌肌動蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）作為CAFs的特異性蛋白，在正常乳腺間質(zhì)成纖維細胞中不表達，可反映乳腺癌間質(zhì)CAFs的增殖活性。本文收集我院病理科2012—2016年乳腺浸潤性導(dǎo)管癌改良根治手術(shù)標(biāo)本102例，采用免疫組化方法檢測癌組織中CAFs，探討其與臨床病理參數(shù)的相關(guān)性，分析影響乳腺癌預(yù)后因素。

1 ? 資料與方法

1.1 ? 一般資料 ? 乳腺浸潤性導(dǎo)管癌改良根治手術(shù)標(biāo)本102例，患者術(shù)前均未經(jīng)過內(nèi)分泌治療、放療及化療。患者均為女性，年齡32～78歲，平均51歲。腫瘤直徑＞2 cm 41例，≤2 cm 61例；WHO組織學(xué)分類：Ⅰ級28例，Ⅱ級42例，Ⅲ級32例；腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移40例，其中11例為微轉(zhuǎn)移（淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶最大徑≤2 mm），29例為宏轉(zhuǎn)移（淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶最大徑＞2 mm）；TNM臨床分期：Ⅰ+Ⅱ期87例，Ⅲ+Ⅳ期15例。本研究經(jīng)南通大學(xué)第二附屬醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 ? 免疫組化檢測 ? 手術(shù)標(biāo)本經(jīng)10%中性福爾馬林固定，石蠟包埋及4 μm連續(xù)切片，選取癌組織及癌旁3 cm以外的正常乳腺組織蠟塊。采用鼠抗人α-SMA抗體（UMAB237，北京中杉）。以已知的陽性切片作為陽性對照，陰性對照以PBS液代替一抗。α-SMA陽性定位于腫瘤間質(zhì)成纖維細胞，胞漿呈棕褐色或棕黃色，計算 α-SMA蛋白陽性細胞，而α-SMA陽性的乳腺導(dǎo)管、周圍肌上皮細胞及間質(zhì)小血管不計為陽性細胞。隨機選取10個高倍視野計數(shù)約200個細胞，按陽性細胞百分比計分：0～10%計1分，11%～50%計2分，51%～75%計3分，76%～100%計4分；按染色強度計分：無著色計0分，淡黃色計1分，棕黃色計2分，棕褐色計3分。將兩者計分相乘為最終得分，＞3分為陽性表達[6]。

1.3 ? 統(tǒng)計學(xué)處理 ? 應(yīng)用SPSS 26.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)分析。計數(shù)資料以頻數(shù)或率表示，組間比較采用χ2檢驗。繪制Kaplan-Meier生存曲線，采用單因素Log-Rank檢驗和多因素Cox回歸分析可能影響預(yù)后的因素。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 ? 結(jié) ? ? ?果

2.1 ? 乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織及癌旁組織中α-SMA陽性細胞 ? 乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織中48例（47.06%）存在α-SMA陽性細胞，而癌旁正常乳腺組織中無α-SMA陽性細胞，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=62.769，P=0.000）。（圖1）。

2.2 ? α-SMA表達與臨床病理參數(shù)相關(guān)性 ? 乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織中α-SMA的表達與患者年齡、組織學(xué)分級、ER表達及HER2表達無關(guān)（P＞0.05），而與腫瘤直徑、腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期顯著相關(guān)（P＜0.01），即腫瘤直徑越大、有腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期高的乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織中α-SMA 陽性表達率越高。腋窩淋巴結(jié)宏轉(zhuǎn)移的所有標(biāo)本均可見α-SMA陽性表達。見表1。

2.3 ? 影響乳腺癌預(yù)后因素分析 ? 102例乳腺浸潤性導(dǎo)管癌患者中85例獲得隨訪，隨訪率83.33%，隨訪時間66～115個月，平均84個月，其中67例存活，18例死亡。單因素Log-Rank檢驗顯示，乳腺癌組織學(xué)分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、ER表達與患者預(yù)后密切相關(guān)（P＜0.01），而患者年齡、腫瘤直徑、HER2表達、α-SMA表達與預(yù)后無關(guān)（P＞0.05）。多因素Cox回歸分析顯示，乳腺癌組織學(xué)分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期具有獨立預(yù)后意義（P均＜0.05）。見表2。α-SMA陽性組與陰性組生存率的差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見圖2。

3 ? 討 ? ? ?論

乳腺癌是影響女性生命健康最常見惡性腫瘤，腫瘤局部浸潤和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是臨床療效差的主要原因。越來越多的研究表明，乳腺癌形成是多基因介入、多步進展并受腫瘤微環(huán)境控制的復(fù)雜過程。探究乳腺癌浸潤和轉(zhuǎn)移的機制對指導(dǎo)治療、改善患者預(yù)后具有非常重要的意義。

腫瘤相關(guān)成纖維細胞分泌多種活性蛋白因子來促進癌細胞活化、增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移，促進血管生成及腫瘤基質(zhì)的再塑[7-8]。同時，CAFs還抑制機體免疫系統(tǒng)，其機制主要是通過分泌多種細胞因子激活免疫抑制性細胞，繼而下調(diào)免疫殺傷性細胞的功能。（1）轉(zhuǎn)化生長因子β（TGF-β）：CAFs通過分泌TGF-β引起白介素6（IL-6）和白介素10（IL-10）等下游因子的表達，促進腫瘤相關(guān)巨噬細胞（tumor associated macrophages，TAMs）、髓源性抑制細胞（myeloid derived suppressor cells，MDSCs）以及調(diào)節(jié)性T細胞（Treg）的增加，從而抑制具有抗腫瘤作用的細胞毒T淋巴細胞（cytotoxic T lymphocytes，CTLs）的反應(yīng)和NK細胞活性。TGF-β還可抑制NK細胞合成γ-干擾素（IFN-γ），并阻礙CD4+Th細胞向具有抗腫瘤活性的方向分化。（2）IL-6和IL-10：是重要的免疫負性調(diào)控因子，它們和單核細胞趨化蛋白1（MCP-1）一起吸引巨噬細胞到腫瘤微環(huán)境中并誘導(dǎo)其分化成抑制性M2型巨噬細胞，導(dǎo)致機體免疫功能受抑，促進癌細胞存活。（3）環(huán)氧化酶-2及其產(chǎn)物前列腺素E2（PGE2）：PGE2誘導(dǎo)Treg細胞FOXP3蛋白表達，并抑制T細胞活化。說明CAFs具有多種促癌機制，靶向CAFs可能是潛在的治療乳腺癌的有效方法。

本組研究結(jié)果顯示，在乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織中α-SMA陽性細胞率顯著高于癌旁正常乳腺，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.000），與張哲珺等[9]研究一致。α-SMA表達與腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期顯著相關(guān)（P＜0.01），與文獻報道一致[10-11]。單因素Log-Rank檢驗顯示，乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織學(xué)分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、ER表達與預(yù)后顯著相關(guān)（P＜0.01），而患者年齡、腫瘤直徑、HER2表達、α-SMA表達與預(yù)后無關(guān)（P＞0.05）。多因素Cox回歸分析顯示，乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織學(xué)分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期具有獨立的預(yù)后意義（P均＜0.05）。

CAFs表達升高促進腫瘤的發(fā)生發(fā)展及侵襲轉(zhuǎn)移，有望成為乳腺癌免疫治療的新靶點。

[參考文獻]

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[收稿日期] 2022-10-06

（本文編輯 ? 王曉蘊）