奶牛細管凍精人工授精技術要點

文│劉芬（西藏自治區拉薩市畜牧獸醫總站）

歐珠措姆（西藏自治區墨竹工卡縣扎雪鄉人民政府）

人工授精在奶牛配種中被廣泛應用，更多的是用于加速新品種擴繁，一般采用直腸把握輸精法。

一、奶牛發情鑒定

人工授精過程中最基本的是要判斷母牛是否發情和發情后母牛的最佳授精時間。有的母牛在發情后表現明顯，有的母牛發情后表現不明顯，甚至不會表現出發情癥狀，實際生產中常用無生育能力的公牛進行試情。

1.奶牛的發情特征。發情是母牛性活動的表現，大致分為3個時期：發情初期、發情盛期和發情末期，準確掌握發情規律是提高人工授精受胎率的關鍵。

（1）發情初期。母牛表現出興奮不安、喜叫、反應敏感，喜歡爬跨其他牛，但不愿意讓其他牛爬跨；陰門開始腫脹，流出雞蛋清樣、透明的黏液，黏性差；陰道壁充血而潮紅。

（2）發情盛期。母牛接受爬跨，被爬跨時主動舉尾拱背，四肢站立不動，排尿頻繁；陰門腫大飽滿，柔軟而松弛，陰唇黏膜充血、潮紅、有光澤，從陰道排出的黏液增多，像玻璃棒狀，具有很強的牽縷性，俗稱“吊線”，易黏著于尾根、臀端或后肢飛關節處的被毛上；子宮頸紅潤，頸口開張，約能容納一個手指。

（3）發情末期。母牛性欲逐漸消失，轉入平靜期，不再接受爬跨，子宮頸口慢慢閉合；陰道黏膜充血、潮紅現象逐漸消退，從陰道流出的黏液逐漸變白且濃厚黏稠，量減少，牽縷性差。

2.奶牛發情鑒定。確定母牛發情的方法稱為發情鑒定，母牛發情鑒定的主要方法有外部觀察法、直腸檢查法和陰道檢查法3種。

（1）外部觀察法。發情早期，母牛陰門開始腫脹，陰門濕潤，流出黏液量逐漸增多，呈絲縷狀掛在陰門下方。發情末期，外陰部腫脹稍微減退，流出較黏的乳白色渾濁狀黏液，此時是人工授精的最佳時期；再往后黏液量少并黏稠，逐漸從乳白色變為淺黃紅色。如果觀察到母牛排出較多的血液（俗稱“排紅”），通常在發情后的2～3天。

（2）直腸檢查法。檢查者穿好工作服，衣袖挽起，戴長臂手套，將五指并攏成錐形伸進母牛的直腸內，隔著直腸壁觸摸檢查卵泡的發育情況，以便確定配種時期。

（3）陰道檢查法。用開腔器打開母牛陰道，借助一定光源觀察陰道黏膜的色澤、黏液性狀及子宮頸口開張情況，判斷母牛發情程度。發情母牛陰道黏膜充血潮紅，表面光滑濕潤；子宮頸外口充血、松弛、柔軟開張，排出大量透明、具有牽縷性的黏液，不易掛斷。

二、細管凍精的解凍

凍精的解凍操作關系到配種后的受胎率。在掌握標準解凍操作的同時也應學會凍精活力的檢測。如果因為凍精活力不達標，而我們又沒有及時檢測，也會對受胎率造成非常大的影響。

1.解凍前的準備工作。物品的準備：存放好凍精的液氮罐、長鑷子、凍精剪刀、解凍杯、兩只不同廠家的溫度計、衛生紙、計時器、輸精槍、輸精槍外套等。

2.凍精的保存。凍精必須存放在充滿液氮的生物容器（液氮罐）內。

3.凍精的解凍。

（1）在干凈的解凍杯中加入適量的熱水和涼水，插入兩只不同廠家的溫度計，攪拌均勻，將水溫調至37～40℃。

（2）用長鑷子從液氮罐內提取精液時，提桶的頂端提取高度要低于罐口8厘米，或者控制在霜白線以下。

（3）盡量在5秒鐘內取出凍精細管，未能取出再放入液氮中至少10秒后重試；向另一液氮罐轉移凍精時，提筒離開液氮面的時間不能超過5秒。

（4）水浴解凍的容器最好能將細管凍精橫置，如果需將細管垂直放入，應將棉塞端朝下；取出凍精細管后輕甩尾部，或者在空氣中停留2～3秒，然后放入解凍杯中解凍15～45秒。

（5）拿干凈的紙巾或毛巾擦拭輸精槍頂端，將輸精槍溫度預熱到與體溫接近，并貼身保存。

（6）將解凍好的細管凍精用紙巾（毛巾）包裹吸干水分，核對種公牛信息，將細管綿塞端插入預熱好的輸精槍內。

（7）用凍精剪刀將裝好的細管凍精封口端水平剪開，注意不要剪錯方向。

（8）將輸精槍外套套在裝好凍精的輸精槍上，下拉使細管卡在槍套頂部，推動槍芯，使精液到達輸精槍套頂端。

（9）將裝好凍精的輸精槍貼身存放，3～5分鐘之內完成輸精操作。

（10）注意事項：全程避光操作，防止紫外線殺死精子。

4.凍精的活力檢測。凍精活力檢測前期凍精解凍操作與授精解凍操作一致，區別在于檢測凍精活力需要準備好顯微鏡、剪刀、載玻片、蓋玻片等物品。在解凍前把顯微鏡的電源連接上，使恒溫板預熱到38℃左右，同時將載玻片和蓋玻片也放在恒溫板上預熱。此時方可進行標準的解凍操作。

（1）將解凍好的細管凍精用紙巾（毛巾）吸干水分后平放，用凍精剪刀將細管前后三分之一處剪掉，留取細管中間三分之一段備用。

（2）將備用細管傾斜，一端精液流出，均勻地滴3滴在載玻片上，再將蓋玻片從一端輕輕地壓上去；將載玻片放在恒溫板上平衡30秒左右。

（3）平衡好以后調整目鏡，多尋找幾個活力視野點，找到最佳活力視野，將3片蓋玻片下方的活力都檢測一遍。

（4）如果顯微鏡沒有恒溫板需提前預熱，操作時間盡量在3分鐘之內完成。

（5）普通常規凍精國家標準：凍精活力點35，畸形率小于18%，有效精子數不低于800萬。達不到標準的為不合格產品。

（6）及時將檢測結果進行登記存檔。

作為學習資源的微課程，提升了資源的實用性.對學生而言，微課程可滿足學生對不同知識點的個性化學習、按需選擇學習，既可查缺補漏又能強化鞏固知識，是傳統課堂學習的一種重要補充和拓展資源.對教師而言，微課程既使得教師的備課、教學和反思方面的資源更具有針對性和實效性，又成為校本研修、區域網絡和教師專業發展的重要途徑.由于微課程具有靈活性，資源建成之后并非一成不變，而是呈現半開放的形態，在不斷使用中動態更新，適應新的環境需求.

三、適時輸精

（1）一般母牛發情的外部表現持續時間為18～24小時，排卵發生在發情結束后的6～12小時，精子在母牛生殖道的存活時間為12～20小時；卵子排出后能保證正常受精的時間為6～12小時。

（2）母牛適宜輸精時間為發情后9～24小時，也可以在6～27小時內配種。

（3）凌晨或上午發情的牛可在下午或傍晚配種，下午或傍晚發情的牛可在第2天上午配種。約12小時后再次檢查，必要時再次輸精，有些發情持續時間長、排卵延遲的牛需第3次輸精，以確保精卵能結合受精。

四、輸精操作

1.輸精操作原則。輸精前對母牛和凍精進行檢查鑒定，嚴格執行無菌操作規程，確定最佳輸精時間，正確的解凍處理技術，細致準確的輸精操作，做到“輕插、適深、慢推、緩出”，盡量縮短輸精時間。

2.輸精前的準備。

（1）物品的準備。存放好凍精的液氮罐、長鑷子、凍精剪刀、解凍杯、兩只不同廠家的溫度計、衛生紙、計時器、輸精槍、輸精槍外套等。

（2）配種牛的準備。青年牛：13.5月齡以上，身高130厘米以上，體重380千克以上的發情牛；泌乳牛：頭胎牛產后61天，經產牛產后51天以上的發情牛。

（1）先把母牛保定在配種架內，尾巴用細繩拴好拉向一側。

（2）左手套上輸精手套，涂上潤滑劑或少量水，輕柔觸摸肛門，使肛門肌肉松弛。

（3）并攏左手手指形成錐形插入母牛直腸，邊塞邊轉動，以使手背和肛門周圍充分潤滑，觸摸子宮、卵巢、子宮頸的位置。

（4）分次掏出糞便，清洗消毒母牛外陰。避免努責，避免與直腸蠕動相逆的方向移動，避免空氣進入直腸引起直腸膨脹。

（5）左手插入母牛直腸向盆腔底部前后、左右探索子宮頸，縱向握在手中，手心朝右柔和握住子宮頸（宮頸外口在手中）。

（6）用前臂下壓會陰，使陰門開張；也可先將陰唇掰開（或由助手協助），把輸精器插入陰道后再將左手伸入直腸，這樣輸精器頭部不會碰到陰唇外部，不易被污染。

（7）右手趁勢將輸精槍約向上40°角插入10～15厘米越過尿道口，再轉為平插。

（8）向左手心中探插（可將宮頸靠在骨盆邊，并輕輕擠壓宮頸周圍的陰道壁，使輸精器只能進入子宮頸口，不會誤入陰道穹窿），或將宮頸拉向陰道方，憑手指感覺將輸精器套入子宮頸。

（9）插入頸口前扯出輸精器薄膜防塵軟外套。

（10）輸精器進入子宮頸外口后，可用改變方向、回抽、擺動、滾動等方法向前探插。

（11）左手將子宮頸前端稍作抬高，并向輸精器上套。

（12）感到暢通無阻后可觸摸到輸精器前端。

（13）向后抽退一點，勿使子宮壁堵住輸精器尖端出口。

（14）緩慢地將精液注入子宮體與子宮角結合部。熟練者可注入排卵側子宮角大彎處。

（15）輕輕抽出輸精器，完成操作。

五、結語

綜上所述，在奶牛配種中人工授精技術應用非常廣泛，通常使用直腸把握輸精法。在奶牛養殖過程中，使用人工授精技術可以迅速改良奶牛群基因庫，還能對很多偏遠地區的牛群進行品種改良，提高良種覆蓋率；應用的精液量較少，一次公牛射精量可分成多份對母牛進行人工授精；購買精液不僅能選擇優良品種，還可以減少公牛飼養數量，為養殖場節省成本；同時可以有效避免公母牛之間的接觸，減少某些疾病通過直接接觸、消化道或呼吸道等進行傳播，有效控制疾病傳播。本文著重介紹了奶牛細管凍精人工授精的技術要點，希望為該人工授精技術的快速推廣提供支持，進而為奶牛養殖提供更好的技術支持。