血液保存前不同溫度及暴露時間對血液質量的影響

袁 園 李 銀 李艷玲

（1 贛州市中心血站，江西 贛州 341000；2 贛南衛生健康職業學院，江西 贛州 341000；3 贛南醫學院第一附屬醫院，江西 贛州 341000）

輸血治療是臨床上對多種疾病搶救的重要方法和手段，能幫助患者快速糾正貧血、補充并維持血容量，有助于增加血壓、糾正各種凝血因子，能改善紅細胞及含氧能力，幫助患者抵抗及預防休克。而血液保存質量是保證患者安全、合理輸血的關鍵[1]。由于血液脫離血液循環后，血液中的相關成分會發生明顯的變化，多與暴露時間有關[2]。梁曉峰研究表明[3]：血液保存溫度和暴露時間不同，血液中主要成分包括紅細胞、血小板及pH值改變，會對輸血質量造成影響（主要以白細胞、血小板變化較為明顯，而纖維蛋白原相對穩定）。近年來，隨著低溫生物學原理在血液保存中的廣泛應用，大幅度延長了血液紅細胞外存活時間，并提升存活率[4]。目前，國際上全血的保存溫度為2～8℃，而我國普遍以6℃組保存，但是由于我國地域范圍相對較廣，采供血質量的管理尚存在諸多問題，對于血液保存前溫度及暴露時間缺乏統一的標準[5]。因此，本研究分析了236份血液樣本，探討血液保存前不同溫度及暴露時間對血液質量的影響。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2020年5月至2022年3月血液樣本236份作為研究對象，根據血液保存前溫度不同分為2℃組（n＝145份）和6℃組（n＝91份）；根據血液保存前暴露時間不同分為暴露2 h組（n＝75份）和暴露4 h組（n＝161份）。236份血液標本中，男175例，女61例，年齡（23～57）歲，平均（41.29±4.63）歲；體重指數（BMI）（18.2～29.5）kg/m2，平均（21.63±3.59）kg/m2；本研究獲得倫理委員會批準，患者輸血前均簽署同意書。

采血標準：①均自愿獻血，且獻血者均可耐受；②既往體檢，無傳染性疾病，符合獻血要求；③輸血前均需要進行血液檢測，保證符合輸血適應證。排除標準：①伴有自身免疫系統疾病、凝血功能障礙或器質性疾病者；②采血不合格或采血量過少者。

1.2 方法

（1）標本采集。常規采集全血標本50 ml，將其放置在含有血液保存液II（ACD-B）的采血袋中進行保存。采血及其成分制備分析嚴格按照規定進行操作。

（2）考察不同溫度（根據血液保存前溫度不同分為2℃組和6℃組）、不同暴露時間（根據血液保存前暴露時間不同分為暴露2 h組和暴露4 h組）對血液質量的影響。血液質量相關指標包括血液中游離血紅蛋白（FHb）、pH值、K+、膜磷脂、紅細胞胞漿鈣調素（CaM）、紅細胞膜過氧化物（LPO）及紅細胞膜Na+-K+-ATP酶水平 。

（3）實驗方法。①FHb、pH及K+含量測定。采集血液樣本后分為4份，分別放置在2℃和6℃組環境中保存2 h和4 h；然后再全部轉存到6℃組環境中，分別于采血后第0、4、8、16 天檢測血中FHb水平（采用紫外分光光度法），并完成pH[采用pHS-3C型酸度計（購自于江蘇江分電分析儀器有限公司）]和K+含量（采用離子色譜法測定）測定。②其他相關指標測定。采用薄層色譜分析法檢測膜磷脂水平；采用同步法檢測紅細胞膜Na+-K+-ATP酶（試劑盒購自于軍事醫學科學院放射醫學研究所）；采用純化心肌環腺苷酸磷二酯酶（PDE）法檢測紅細胞CaM；采用分光光度法測定紅細胞膜LPO水平（試劑盒購自于軍事醫學科學院放射醫學研究所）等，上述操作嚴格遵循儀器與試劑盒說明書完成[6-7]。

（4）血液質量的影響因素分析。根據血液質量分為良好組與一般組，查閱不同血液標本參數，包括血液采集量、血液轉運、血液保存時間、血液暴露時間、血液采集專業技能，進行單因素和多因素Logistic回歸分析影響血液質量的因素。

1.3 統計學分析 采用SPSS 26.0軟件處理，計數資料行χ2檢驗，采用n（%）表示，正態分布的計量資料行t檢驗，采用±s表示，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同溫度下血液質量相關指標的差異 在各時間檢測點，2℃組的FHb、K+、LPO水平低于6℃組（均P＜0.05）；而pH值、膜磷脂、CaM及Na+-K+-ATP酶水平高于6℃組（均P＜0.05），提示低溫更有利于血液保存。見表1。

表1 血液保存前不同溫度對血液質量的影響

2.2 血液保存前不同暴露時間血液質量相關指標的差異 在各時間檢測點，暴露2 h組FHb、K+、LPO水平低于暴露4 h組（均P＜0.05）；而pH值、膜磷脂、CaM及Na+-K+-ATP酶水平高于暴露4 h組（均P＜0.05），提示暴露時間越短血液質量越好。見表2。

表2 血液保存前不同暴露時間對血液質量的影響

2.3 血液保存質量影響單因素分析 單因素結果表明：血液采集量不影響血液保存質量（P＞0.05）；血液轉運、血液保存前溫度、血液保存前暴露時間、血液采集專業技能均與血液質量相關（P＜0.05）。見表3。

表3 血液保存質量影響單因素分析

2.4 影響血液保存質量的多因素Logistic回歸分析 將單因素分析中有統計學意義的變量納入多因素Logistic回歸分析中，結果表明血液轉運不合格、血液保存前溫度高（6℃）、血液保存前暴露時間長（4 h）、血液采集專業技能一般/不熟練均為影響血液保存質量的獨立危險因素（P＜0.05）。見表4。

表4 血液保存質量影響的多因素Logistic回歸分析

3 討論

血液的保存質量是保證輸血安全的關鍵，而血液保存對臨床治療的效果具有重要的作用。但是，在實際操作過程中，血液保存過程中，血液質量影響因素相對較多，包括：溫度、時間、運輸條件等[8]。血液脫離血液循環后，血液中的成分會發生明顯的變化，且主要因素與保存時間和暴露時間相關[9]。馬印圖等[10]研究表明，血液中主要成分，如紅細胞、血小板、pH值等均會發生變化。本研究中，2℃組采血后第0、4、8及16天 游離Hb、K+、LPO水平低于6℃組（P＜0.05）；而pH、膜磷脂、CaM及Na+-K+-ATP酶水平高于6℃組（P＜0.05）；提示低溫更有利于血液保存。血液保存前暴露2 h組采血后第0、4、8及16天游離Hb、K+、LPO水平低于暴露4 h組（P＜0.05）；而pH、膜磷脂、CaM及Na+-K+-ATP酶水平高于暴露4 h組（P＜0.05），提示血液保存前暴露時間越短血液質量越好。本研究結果說明血液保存前不同溫度、暴露時間均會對血液質量產生影響。分析原因：隨著溫度的不斷升高，紅細胞破壞程度不斷增加，紅細胞各種成分釋放到血液中，導致游離Hb濃度增加，以及K+、LPO水平升高，pH、膜磷脂、CaM及Na+-K+-ATP酶水平降低，即血液保存前溫度越高、暴露時間越長，血液質量越差[11]。

Bami MK等[12]研究表明隨著血液保存期的延長，抗損傷物質不斷消耗，且缺乏后援補充，導致血液抗損傷功能不斷削弱，而細胞的裂解產物、各種代謝產物的堆積，亦可誘發更加強烈的損傷反應，包括過氧化反應、加速細胞老化進程、啟動凋亡程序等，從而引起一系列血液中細胞結構和功能及離子成分的改變[13-14]。而在上述改變中，生物膜最先受損，不同自由基及凋亡信號等損傷因子，能通過磷脂信使分子激活絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）等信號途徑，誘發凋亡反應。同時，通過改變或破壞細胞膜結構亦可加速細胞老化進程，引起細胞衰老、死亡，血液有效功能喪失。本研究中，單因素及多因素Logistic回歸分析結果表明：血液轉運、血液保存前溫度、血液保存前暴露時間、血液采集專業技能均為影響血液保存質量的獨立影響因素（P＜0.05）。血液保存質量受到的影響因素較多，不同因素之間也可相互作用及影響。因此，為了保障血站血液質量的穩定性，應及時對收集血液進行包裝，減少相關影響血液質量的相關因素，并采取冷鏈方式運送到血站[15]。

綜上所述，血液保存前不同溫度及暴露時間會對血液質量產生影響，低溫及暴露時間短均更有利于血液保存。同時血液轉運是否合格、血液采集專業技能是否熟練等都會影響血液的保存質量。因此在血液保存時應注意低溫保存，減少采集后的暴露時間，同時加強血液轉運的專業化規范化管理及血液采集的技術水平，以更有效地提升血液保存質量。