化學發光微粒子免疫檢測法和ELISA法檢測乙型肝炎表面抗體的價值

白 羽

福建省泉州市第一醫院檢驗科 362000

乙型肝炎表面抗體(HBsAb)由乙型肝炎表面抗原(HBsAg)誘導產生,是乙型肝炎免疫力的重要標志,檢測該抗體水平對于評估疫苗反應至關重要[1-2]。在完成初次疫苗接種計劃1～2個月后,抗體水平>10mIU/ml 被認為具有血清保護作用。隨著時間和年齡的增長,已知抗體滴度明顯降低,且部分個體可能對加強劑量反應更好[3]。因此,測量HBsAb水平在暴露后預防的決策制定中起著重要作用。化學發光微粒子免疫檢測法(CMIA)、酶聯免疫吸附測定(ELISA)是兩種常用測量HBsAb的方法[4]。但ELISA和CMIA基于不同的測試原理,ELISA是一種直接的抗體夾心酶測定法,利用天然HBsAg(亞型ad和ay)作為固相,利用偶聯物和底物之間反應產生的顏色強度來測量存在的抗體量。CMIA則為化學發光測定技術與免疫反應相結合的方法。與血清中的抗HbsAg結合的重組HBsAg包被的順磁性微粒和吖啶酯標記的HBsAb的包被粒子作為綴合物,HBsAb抗體濃度由抗原抗體反應發出的光決定,并使用相對光單位測量。研究報道,由于方法信號及方法學等方面的差異,CMIA及ELISA對HBsAb的測量數值可能存在不同[5]。基于此,本文對CMIA及ELISA檢測HBsAb的價值進行分析。

1 資料與方法

1.1 樣本來源 隨機抽取我院2022年2—12月已按要求按時接種乙型肝炎疫苗接種的血液樣本共180份。

1.2 方法

1.2.1 儀器和試劑:儀器:全自動化學發光免疫分析儀(美國雅培公司,型號:Architect i2000SR)、全自動酶標儀(意大利 SEAC公司,型號:Alisei)。試劑:CMIA法試劑盒、ELISA 法試劑盒分別由美國雅培公司、北京萬泰公司提供。

1.2.2 檢測方法:ELISA法:按照全自動操作流程規范對收集的180份血清樣本予以檢測。儀器檢測范圍為2～1 000mIU/ml,若檢測過程中某血清樣本檢測值超過儀器檢測上限(>1 000mIU/ml)則需對血清樣本進行稀釋后再次予以檢測。以HBsAb水平≥10mIU/ml為陽性判定標準。CMIA法:將血清樣品加入96孔板相應孔中后,添加50μl酶標試劑,孵育60min;洗板顯色,對待測樣本抗體濃度予以定標曲線計算濃度。HBsAb水平≥10mIU/ml為陽性判定標準,以上嚴格按試劑盒說明書進行相關操作。檢測前均進行精密度、正確度驗證及線性評價。

1.3 觀察指標 分別從定性檢測和定量檢測兩個方面對比CMIA法和ELISA法檢測HBsAb的價值。

2 結果

2.1 CMIA法和ELISA法定性檢測HBsAb結果的一致性對比 180份血清樣本中,CMIA法檢測陽性170例,陰性10例,陽性率為94.44%, ELISA法檢測陽性164例,陰性16例,陽性率為91.11%,兩組陽性率對比差異無統計學意義(P>0.05),且一致性檢驗顯示Kappa值=0.752>0.75,提示上述方法定性檢測HBsAb結果一致性好,見表1。

表1 CMIA法和 ELISA法定性檢測結果一致性對比

2.2 CMIA法和ELISA法定量檢測HBsAb結果對比 Bland-Altman圖顯示:兩種方法平均差值為356.4mIU/ml>0,CMIA法和ELISA法定量檢測結果一致性差,見圖1。

圖1 CMIA法和ELISA法檢測HBsAb水平Bland-Altman圖

2.3 CMIA法和ELISA法對不同濃度樣本檢查結果對比 隨機選取CMIA法檢測濃度>2 000mIU/ml的30例血清樣本進行ELISA法檢測,結果顯示ELISA法檢測值較CMIA法低;選取CMIA法檢測濃度10～50mIU/ml樣本20例予以ELISA法檢測,結果顯示ELISA法檢測20例樣本中有4份(20.00%)樣本為陰性(<10mIU/ml)。見表2。

表2 CMIA法和 ELISA法對不同濃度樣本檢查結果對比

3 討論

HBsAb可在自然感染或注射疫苗后產生,其能有效減少HBV的傳播,降低乙型肝炎感染風險[6]。通常測量HBsAb可確定機體在接種疫苗后是否產生足夠的免疫反應,評估是否具有保護效價,另外,動態檢測HBsAb水平有助于為暴露后管理決策提供理論依據。雖然ELISA因成本低、操作簡便、批量檢測等優勢成為臨床廣泛使用的檢測方法,但臨床實際工作檢測中,多數ELISA試劑盒無法做到定量檢測均為定性檢測,即使能進行定量檢測的科研用試劑盒在HBsAb低水平狀態下,也存在一定的漏診及誤診風險,因此無法準確判斷處于較低HBsAb水平者是否需要加強免疫[7]。若出現溶血樣本、黃疸樣本等情況將會對結果造成干擾。近年來,化學發光免疫分析法技術的發展逐漸用于血清中的小分子物質、腫瘤標志物等檢測中,CMIA作為化學發光免疫分析法技術中的一種方法,在電化學發光技術基礎上增加了生物索—親和素技術以及磁性微珠包被技術,有助于提高該檢測方法的靈敏度[8]。本研究從定性和定量測量兩個方面對比CMIA和ELISA方法檢測HBsAb的價值。

本文結果顯示,在定性檢測方面,180份血清樣本中,CMIA法檢測陽性170例,陰性10例,陽性率為94.44%,ELISA法檢測陽性164例,陰性16例,陽性率為91.11%,兩組陽性率對比差異無統計學意義(P>0.05),且一致性檢驗顯示Kappa值為0.752>0.75,兩種檢測方法對HBsAb水平檢測的一致性好,說明兩種方法均能有效檢測出HBsAb。HBsAb檢測受內源性和外源性影響,類風濕因子、各種補體、特殊自身抗體、交叉反應物質等為ELISA檢測的內源性干擾因素[9]。標本溶血、血清標本離心處理過程、試劑質量等為ELISA檢測結果的外源性干擾因素[10]。相較于ELISA檢測,CMIA法檢測可有效保證標本離心分離效果,盡量避免外源性干擾因素,以提高對HBsAb的檢測效能。

在定量檢測方面,Bland-Altman圖顯示兩種方法平均差值為356. 4mIU/ml>0,說明檢測結果一致性較差。分析這兩種定量檢測結果較差的原因,一方面,ELISA法為全手工操作,容易受人為因素的干擾,且血清樣本在加樣、洗板、孵育溫度和時間任一環節出現失誤將影響HBsAb結果[11],而相較于ELISA法的手工操作,CMIA法全程自動化程度較高。另一方面,ELISA法定量檢測范圍僅為10～160mIU/ml[12],相對較窄。部分接種完乙型肝炎疫苗后,體內HBsAb水平在短時間內迅速上升,因此在檢測時需對血液樣本予以稀釋,此過程可能會對結果造成影響。且ELISA法檢測范圍的下限正好為HBsAb判斷陰性、陽性的界限,這一情況可導致對低樣本靈敏度不足,對弱陽性樣本錯判為陰性,影響檢測結果。而CMIA法可檢測范圍較ELISA法10～160mIU/ml范圍廣,為2 ～1 000mIU/ml,且CMIA法以“鏈霉親和素—生物素”放大系統與三聯吡啶釕相結合為檢測原理,能在電場中持續獲得電子發光,增強獲得的信號強度,延長信號發光的持續時間,以提高檢測結果的靈敏度和特異性。黃韜等[12]研究對比ELISA與CMIA法對HBsAb檢測結果發現,相較于ELISA法,CMIA法診斷性能更高。另有研究顯示,ELISA法對其他肝炎的抗原或者抗體中弱陽性樣本檢測結果重復性較差,易造成假陰性結果[13]。另外值得注意的是,由于本研究檢測儀器僅擇了Architect i2000SR型免疫分析儀和Alisei型酶標儀對血清中HBsAg的檢測結果進行了比較和評估,是否存在檢測儀器型號等其他差異則需要后期展開進一步探討。

綜上所述,HBsAb定性檢測中CMIA法和ELISA法的一致性較高,在控制檢測成本的情況下可選擇ELISA法;CMIA法定量檢測效能較ELISA法更高,且重復性更好,操作簡便,但CMIA法成本相對較高,臨床工作中建議結合臨床實際和檢驗需求等因素綜合考慮以選擇合適的檢測方法,有條件的實驗室可以CMIA法檢測為主,也可以先予以ELISA法檢測,對于可疑結果再使用CMIA法復核其結果。