設施蔬菜灰霉病菌的抗藥性檢測及綠色防控技術分析

郝 鵬，胡 珍

（單縣農業農村局，山東 菏澤 274000）

現階段，對于設施蔬菜灰霉病菌的防治以化學藥劑防治為主，但灰霉病菌的繁殖速度極快，大量用藥后，灰霉病菌對多種藥劑產生了抗藥性，甚至還存在多重抗藥性。

最常見的防治灰霉病菌藥劑為腐霉利和嘧霉胺，隨著這兩種藥劑的長時間使用，防治效果逐步下降。灰霉病菌抗藥性檢測能夠為后續病害防治工作開展提供指導，降低設施蔬菜種植人員的經濟損失。

1 我國灰霉病常見化學藥劑抗藥性發展

灰霉病防治藥劑已經在我國使用很多年，這使得灰霉病菌對于各種藥劑的抗藥性大幅提升，并演變出很多新的多重抗性菌株。例如，在山東省，番茄灰霉病對于腐霉利的中抗菌株占比為33.33%，對于嘧霉胺的高抗菌株高達99.39%。山興盛蔬菜灰霉菌對嘧霉胺抗性頻率高達50.29%，針對乙霉威抗性頻率在50%左右［1］。

2 材料與方法

為了更好地檢測設施蔬菜灰霉病菌抗藥性，以山東省菏澤市設施蔬菜種植情況為研究對象，具體試驗材料和方法如下。

2.1 試驗材料

2.1.1 供試菌株

相關人員需開展菌株采集與分離操作。試驗開展階段，工作人員從菏澤市牡丹區、曹縣、單縣、東明縣等6 個地區開展設施蔬菜采集工作，經過分離純化之后，得到的灰霉病菌株46 個，依靠PDA 斜面培養基保存，將其放置在冰箱中。試驗所用的敏感菌株為黃瓜灰霉病菌，來源為山東省化工研究院。

2.1.2 供試藥劑與培養基

在供試藥劑制作方面，主要材料包括50%霉菌利可濕性粉劑、40%嘧霉胺懸浮劑。

培養基以PDA 培養基為主，主要是應用在菌株分離培養以及腐霉利抗藥性測定過程中，常見材料包括葡萄糖、瓊脂以及MgSO4·7H2O 等，當加入所有材料后再加入水1 000 mL。

2.2 試驗方法

灰霉病菌抗藥性測定過程中最為常見的方式是菌落直徑法，也被稱為菌絲生長速率法。具體測定時，試驗人員可利用抑制菌絲生長50%時的殺菌劑，對質量濃度進行有效抑制。當上述工作完成之后，相關工作人員可分別測定敏感菌以及各地菌株的EC50情況。為了確保最終試驗結果的準確度，相關人員可將各個菌株放置到PDA 平板上，執行活化培養操作，具體培養時間約5 d，之后選取同一圓周的菌絲塊，將其轉移到含系列質量濃度的培養基平板中央，菌絲塊直徑為0.5 cm。然后取同樣直徑的菌絲塊放置到培養基平板中間，整體轉移到恒溫箱內，恒溫箱內部溫度應保持在25 ℃，培養3 d 后工作人員可以測量菌落直徑，得到最終菌落直徑的平均值，為后續菌絲生長抑制率計算提供前提條件。應用DPS 軟件，能夠得到濃度對數值（x）以及抑制率幾率值（y）的線性回歸關系，列出毒力回歸方程以及有效抑制中濃度的具體數值。通過各地菌株EC50數值以及敏感菌EC50數值進行抗性水平判斷，如果測試菌株EC50數值低于敏感菌株的5 倍，工作人員可將其視為敏感（S）；處于5～10 倍區間內，可將其稱之為抵抗（LR）；10～40 倍，可稱之為中抗（MR）；超過40 倍的為高抗（HR）。相關工作人員可根據最終的分析結果，了解各地菌株抗性頻率以及抗性表型比例，明確兩種藥劑產生抗性之后的雙重抗性頻率，抗性頻率可通過公式：抗性菌株數量/總菌株數量×100%計算。抗性表型比例可通過公式：各抗性表型菌株數/總菌株數×100%計算。雙重抗性頻率可利用公式：雙重抗性菌株數/決菌株數×100%來獲取［2］。

3 結果與分析

3.1 灰霉病菌對腐霉利以及嘧霉胺的抗性頻率

從實際研究結果可知，設施蔬菜灰霉病菌已經對腐霉利以及嘧霉胺產生了不同程度的抗藥性，其中，對于腐霉利的抗性已經達到嚴重程度，具體抗性頻率在50%以上。而對嘧霉胺的抗性頻率比例值相對較低，除了曹縣的菌株處于60%外，其余各地的抗性頻率均未超過40%。根據不同地區所呈現出的菌株抗性頻率特點，曹縣灰霉病菌株所表現出的殺菌劑抗性頻率較高。另外，菌株對于嘧霉胺的抗性頻率數值最低，占比為16.67%。

3.2 灰霉病菌對腐霉利和嘧霉胺的抗性水平

通過具體研究和分析發現，不同地區的灰霉病菌對于腐霉利所展示出的抗性較高，其中高抗頻率均處于10%以上，高抗頻率最高的當屬鎮海，對應的比例數值為40%，其次是奉化菌株，對應的高抗頻率為28.6%。相比之下，菏澤市設施蔬菜灰霉病菌對于嘧霉胺的整體抗性水平并不高。除了曹縣菌株存在高抗菌株外，其他各地均未檢測出高抗菌株，敏感頻率均超過60%。此外，本次研究區域內的灰霉菌株，抗性水平最低的當屬牡丹區菌株，在具體檢測過程中沒有出現高抗菌株，敏感菌株占比最高，能夠達到83.3%［3］。

3.3 討論與結論

在開展菏澤市設施蔬菜灰霉病菌對常規防治藥劑的抗藥性研究過程中，相關人員主要應用的方式為菌絲生長速率法，研究結果顯示，所測定的灰霉病菌對腐霉利以及嘧霉胺均產生了抗性，其中，抗性更為明顯的是對腐霉利，平均抗性頻率達到80.43%，高抗菌株頻率為22.84%。相比之下，嘧霉胺的抗性要更弱一些，其整體抗性頻率為34.78%，其中高抗菌株頻率為1.67%。根據不同地區的研究結果，菌株對于這兩種藥劑具備雙重抗性，且雙重抗性頻率比例在32%左右。更為重要的是，不同地區灰霉病菌抗藥性差異十分明顯，例如，曹縣菌株所表現出的抗藥性最強，對應的抗性頻率較高。

長期以來，腐霉利和嘧霉胺對于蔬菜灰霉病防治起到了重要作用，在實際生產過程中的應用時間較長，尤其是在設施蔬菜灰霉病高發階段，兩種藥劑被頻繁、大量應用，為灰霉病菌抗藥性培養提供了充分條件。從以往研究數據能夠了解到，當高抗菌株頻率超過20%，證明藥劑的應用價值很低。本次試驗所得到的腐霉利高抗菌株比例為22.84%，證明該藥劑無法在菏澤市設施蔬菜灰霉病防治過程中繼續應用［4］。

4 設施蔬菜灰霉病菌的發生特點

4.1 寄主范圍廣

灰霉病菌寄主范圍具有明顯的廣泛性。據相關數據統計，灰霉病菌能夠侵染1 400 多種植物，如番茄、辣椒、黃瓜等，其中還包括一部分農田雜草。灰霉病菌甚至能夠在枯死秸稈或者是被殺死的雜草中生長，并出現很多分生孢子。如果設施蔬菜生長環境溫暖且潮濕，空氣中便極有可能含有一些灰霉病菌分生孢子，最終導致設施蔬菜大面積感染。

4.2 發生季節多在早春

設施蔬菜灰霉病的出現，不同年份的發生趨勢存在明顯差異。例如，在番茄灰霉病發生過程中，其葉片會在3 月上旬開始腐壞，到3 月下旬或4 月初會蔓延到莖稈及花朵，4 月上旬便能為害果實。花朵和莖稈發病的高峰期在5 月，果實發病高峰期出現在5 月下旬。葉片發病率不高，很難對其發病高峰期進行判斷。灰霉病屬于低溫高濕型病害，當溫度條件適宜時，灰霉病菌會隨著濕度的增加提升致病力，一旦設施蔬菜被感染，將會在短期內大面積流行，導致設施蔬菜產量大幅下滑。因此，在設施蔬菜灰霉病菌預防上，可從3 月上旬開展預防操作，并在5 月重點預防。

4.3 容易產生殺菌劑抗性

現階段，針對灰霉病菌抗藥性研究屬于農業發展領域中的重要內容之一，相關人員應根據實際情況，對灰霉病防治策略進行合理有效地設計和積極調整，通過應用合適的殺菌劑，降低灰霉病菌的發生概率，積極研究新的藥劑，大力提升灰霉病菌的防治效率。

5 設施蔬菜灰霉病菌的綠色防控技術

5.1 農業防治

設施蔬菜種植前，應重點選擇抗病能力強的品種，并在后續采取輪作換茬、合理施肥澆水等措施。例如，在番茄種植階段，可選擇紅色硬果，并與不易感染灰霉病的作物進行輪作，具體輪作換茬時間應保持在3 年以上。

在澆水灌溉方面，可應用地膜暗灌或者是滴灌策略，選擇在天氣晴朗的上午進行，不能大水漫灌。當澆水工作完成后，種植戶還要做好通風降濕操作，并合理密植，避免由于植株密度過大影響整體通風效果。當植株生長到一定階段后，還要整枝打杈，去除老葉、病花、病果等，并進行深埋處理，避免再次感染其他植株［5］。

5.2 物理防治

在設施蔬菜灰霉病菌物理防治過程中，可引入高溫悶棚土壤消毒方式，拉秧后將剩余的病殘體全部消除。如果是夏季高溫天氣，可將雞糞、土雜肥等一起送入土壤內，灌滿水后蓋好地膜壓實，保持棚室密閉性，具體密閉時間約為30 d。夏季設施蔬菜的石灰氮使用數量約為1 050 kg/hm2，使用時需要保證石灰氮與表層土壤處于均勻混合狀態，后續進行澆水灌溉，保證土壤內部含水量不低于70%，如果存在大量畦面，相關人員可使用透明薄膜將其覆蓋，并做好膜的壓實工作，通過密閉大棚的方式，提升棚內溫度，15～20 d 后便可揭膜。對于設施蔬菜的種植，想要保證灰霉病菌的預防效果，應有效控制棚內溫度和濕度。冬季可選擇在晴朗的上午通風30 min，棚內濕度降到75%以下后將棚室緊閉，待棚內溫度回升至30 ℃后繼續通風，保證設施蔬菜棚內溫度始終保持在30 ℃左右。

5.3 生物防治

在設施蔬菜灰霉病發病初期，可以加入抗菌素可濕性粉劑2 250 g/hm2，或使用1%申嗪霉素懸浮劑1 500 g/hm2，加入450 kg/hm2水噴霧防治。

5.4 化學防治

設施蔬菜灰霉病菌綠色防治過程中，最常見的防治手段是化學防治，主要有以下幾種。

5.4.1 煙霧法

設施蔬菜灰霉病發病初期，種植人員可利用45%百菌清煙劑2 250 g/hm2或20%腐霉·百菌清煙劑3 000 g/hm2，在具體實施階段，可將其放置于棚內4～5 處，于傍晚階段將發煙堆點燃，閉棚熏整晚，第2 天進行通風，如果設施蔬菜灰霉病較為嚴重，工作人員可間隔7 d 再執行1 次煙熏操作。

5.4.2 噴霧法

發病初期，種植戶可以使用25%腐霉·雙懸浮劑2 250 g/hm2、50%異菌脲懸浮劑1 500 g/hm2、20%嘧霉胺懸浮劑2 250 g/hm2噴霧防治。當噴藥工作完成后，應及時通風降溫，避免由于藥劑施加，導致設施蔬菜周圍濕度大幅提升。在用藥階段，種植戶要輪換交替用藥，降低灰霉病菌產生抗藥性的概率。

5.4.3 蘸花防治

蘸花防治是設施蔬菜灰霉病預防中的常見措施之一，當果穗開花后，相關工作人員可在蘸花液中加入50%腐霉利可濕性粉劑，或者加入0.1%乙烯菌核利可濕性粉劑蘸花。如果遇到陰雨天氣，可以利用煙霧劑或者粉塵劑，提升灰霉病菌的治療效果。需要注意的是，設施蔬菜單個生育期之內，各種類型的殺菌劑使用次數不能超過2 次，用藥階段應盡可能集中在發病初期，用藥前還要將老葉、病葉等去除。

在預防階段，種植者應重點防治中心病株、植株下方以及葉片背部，選擇殺菌劑類型時，應做到不重復使用，避免設施蔬菜灰霉病菌出現較強的抗藥性。

6 結束語

設施蔬菜灰霉病屬于是低溫潮濕型病害。常見的預防和治療方式包括通風透氣、地膜覆蓋以及膜下滴灌等。后續栽培管理階段，應重點加大病殘體的無害化處理技術應用力度，突出整個灰霉病防治過程的綠色環保特點。現階段，對于灰霉病的預防，我國已經研究出很多新型技術，尤其是在生態防控技術幫助下，設施蔬菜病害防治效果能夠得到進一步提升。