Gene-Xpert法與TB-SAT法對艾滋病合并肺結核的診斷效能對比研究

doi：10.3969/j.issn.1672-6375.2023.11.020

摘 要：目的：對比探討Gene-Xpert MTB/RIF法（Gene-Xpert法）與RNA 恒溫擴增技術快速檢測法（TB-SAT法）對艾滋病合并肺結核的診斷效能。方法：選取甘肅省中醫院近一年間所收治的艾滋病合并肺結核患者108例為研究對象，采集其痰標本采用不同檢測方法進行檢驗，對比其檢測結果，分析檢測一致性。結果：Gene-Xpert法檢測陽性率明顯高于TB-SAT法，MGIT 960法、Gene-Xpert法檢測陽性率比較差異無統計學意義（χ²=0.167，P=0.683＞0.05）。以MGIT 960法檢測結果為金標準，分別比較Gene-Xpert法、TB-SAT法檢測準確度、靈敏度、特異度、陽性預測值與陰性預測值，檢測結果一致性分析顯示Gene-Xpert法與MGIT 960法檢測結果一致性良好（Kappa值為0.849），TB-SAT法與MGIT 960法檢測結果具有較高一致性（Kappa值為0.651）。結論：Gene-Xpert法對艾滋病合并肺結核的診斷效能優于TB-SAT法，且與MGIT 960法檢測結果具有良好一致性，可優先選用該檢測技術診斷艾滋病合并肺結核。

關鍵詞：艾滋病；肺結核；Gene-Xpert法；TB-SAT法；MGIT 960法；診斷

中圖分類號：R446.61" " " " " " " " " " " " " " " " " " " " " " " " " " " " "文獻標志碼：A

近年來，隨著經濟社會的進一步發展，艾滋病（acquired immune deficiency syndrome，AIDS）的傳播速度加快，病死率較高，現已成為具有極大危害的重要傳染性疾病，有數據統計顯示目前全球感染人類免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）者已超過3 800萬人^[1]。我國AIDS疫情較嚴重，至2019年10月底已累計報告HIV感染/AIDS患者達95.8萬例^[2]。結核病（tuberculosis，TB）是由結核分枝桿菌（Mycobacterium tuberculosis，MTB）所引起的一種慢性的傳染性疾病，是全球第二大致死性傳染病。AIDS患者免疫力低下，合并TB的風險高于一般人群^[3]。既往研究指出^[4-5]，合并TB是HIV/AIDS患者最常見的死亡原因，其主要與此類患者缺乏特異性臨床癥狀、診斷難度較高以及容易合并其他病原體感染有關。目前仍以病原學檢測作為診斷AIDS合并肺結核的主要依據，常用檢測技術包括涂片法、Gene-Xpert MTB/RIF法（Gene-Xpert法）、RNA 恒溫擴增快速檢測法（TB-SAT法）以及BACTEC MGIT 960 液體培養法（MGIT 960 培養法）等，但不同檢測技術對AIDS合并肺結核的診斷效能如何目前仍待進一步明確。鑒于此，本研究對比探討了Gene-Xpert法與TB-SAT法對AIDS合并肺結核的診斷效能，旨在為臨床診斷AIDS合并肺結核提供依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取甘肅省中醫院近一年間所收治的艾滋病合并肺結核患者108例，其中男性患者83例，女性患者25例，年齡均在20～68歲，平均（47.25±15.36）歲。納入標準：①患者年齡需超過18歲；②患者需符合《艾滋病診療指南（2018版）》^[6]、WS 288—2017國家肺結核診斷標準^[7]中的相關診斷標準；③所有患者需要自愿參與研究，并簽署相關知情同意書并通過院倫理委員會批準。排除標準：①在近一月之間有使用免疫抑制劑或免疫增強劑的患者；②患有糖尿病、高血壓、嚴重心肺功能不全、惡性腫瘤以及其他免疫系統疾病的患者；③處于妊娠或哺乳期的特殊患者人群。

1.2 試劑與儀器

主要有抗酸染色液（珠海貝索生物）、BACTEC MGIT 960分枝桿菌培養系統（美國BD公司）、培養管（美國BD公司）、Gene-Xpert檢測儀及相關試劑盒（美國Cepheid 公司）、H37Rv標準菌株（由中國疾控國家結核病參比實驗室提供）。

1.3 檢測方法

所有108例受檢者采集痰標本前均未使用抗結核藥物。收集受檢者5～6 mL 晨痰標本，置于無菌杯中送檢，所收集痰標本均接受MGIT960法、Gene-Xpert法、TB-SAT法檢測。

（1）MGIT960法：按照說明書進行操作，將患者留好的痰標本吸0.5 mL進離心管中，加 1～2 mL前處理液后震蕩15 min吸出到磷酸鹽緩沖液中，離心去上清后加1 mL磷酸鹽緩沖液，重懸沉淀后吸0.1 mL到培養管里，放入培養系統培養后判斷結果。

（2）Gene-Xpert法：將患者留好的痰標本吸0.5 mL 進前處理管中，加標本處理液后瞬時震蕩，靜置15 min后取2 μL標本加入反應盒，進行聚合酶鏈反應（PCR）檢測，提取并擴增后通過系統對MTB利福平耐藥基因rpoBde 81 bp核心區進行檢測，觀察基因突變情況。

（3）TB-SAT法：按照說明書進行操作，將患者留好的痰標本吸1 mL進離心管中，13 000轉/min離心5 min后棄上清，加1 mL洗滌用生理鹽水洗滌后加TB裂解液重懸，使用300 W超聲儀處理15 min后取2 μL標本，加入含有30 μL擴增檢測液的微量反應管里，在熱恒溫器中60 ℃ 10 min后繼續42 ℃ 5 mL。吸取42 ℃反應酶10 μL加入反應管中，震蕩后使用實時熒光定量核酸擴增檢測系統（qPCR）進行檢測，設定的反應程序為單個循環42 ℃ 1 min，共40個循環于FAM熒光通路中，過程中持續收集40次熒光信號。陽性判讀：標本曲線與閾值線交叉點橫坐標讀數所需時間低于40 min^[8]。

1.4 統計學方法

采用SPSS20.0軟件分析數據，計量資料以（±s）表示，采用t檢驗，計數資料予以χ2檢驗，采用Kappa分別檢驗Gene-Xpert法、TB-SAT法與MGIT 960法的檢測一致性，Kappa≤0.04提示一致性較差，介于0.4～0.6提示一致性一般，介于0.6～0.8提示一致性較高，Kappa＞0.8時提示一致性良好，P＜0.05具有統計學意義。

2 結果

2.1 3種檢測技術檢測結果比較

Gene-Xpert法的檢測陽性率為50.93%（55例/108例），TB-SAT法的檢測陽性率為36.11%（39例/108例），MGIT 960培養法的檢測陽性率為53.70%（58例/108例）。MGIT 960法、Gene-Xpert法檢測陽性率均明顯高于TB-SAT法（χ²=4.822、6.755，P=0.028、0.009＜0.05），MGIT 960法、Gene-Xpert法檢測陽性率比較差異無統計學意義（χ²=0.167，P=0.683＞0.05），見表1、表2。

2.2 2種檢測技術的診斷效能及一致性分析

以MGIT 960法檢測結果為金標準，檢測結果一致性分析顯示：Gene-Xpert法與MGIT 960法檢測結果一致性良好（Kappa值為0.849），TB-SAT法與MGIT 960法檢測結果具有較高一致性（Kappa值為0.651），見表3。

3 討論

根據2019年全球結核病統計的報告數據顯示，在全球范圍內的結核病新發病例已達1 000萬例以上，其中HIV陽性患者占比約為8.6%。因結核病死亡的艾滋病患者多達25.1萬例。我國是結核病高負擔國家之一，HIV/AIDS患者結核病患病率可達22.8%^[9]，防治形勢異常嚴峻。與單純AIDS或結核病患者相比，AIDS合并肺結核患者的診斷難度更大，容易出現誤診、漏診或出現延遲診斷，進而導致延誤治療或治療效果不佳，給患者帶來負面影響。在這種背景下，世界衛生組織推薦使用分子生物學診斷方法、細菌培養以及影像學診斷等多種手段對疑似MTB感染的AIDS患者進行診斷，以提高對AIDS合并肺結核的診斷效能，縮短診斷時間，最大程度降低病死率。

目前結核病的診斷金標準為MGIT 960法及菌種鑒定，并結合藥物敏感性實驗實施診斷。本研究發現MGIT 960法的檢測陽性率高于Gene-Xpert法、TB-SAT法，Gene-Xpert法的檢測陽性率則明顯高于TB-SAT法，該結論提示MGIT 960法診斷結核病具有重要價值。但該方法具有操作復雜、培養耗時長等局限性，AIDS患者尤其是合并肺結核者病情進展較快，對診斷效率有較高要求，如采用該方法診斷可能造成延遲診斷，導致患者不良結局風險升高^[10]。本研究發現，TB-SAT法檢測陽性率為36.11%，高于既往報道，但靈敏度僅為63.79%，低于既往報道。同時，本研究發現TB-SAT法與MGIT 960法一致性較高，提示其在診斷AIDS合并肺結核有較高價值。Gene-Xpert法診斷靈敏度與TB-SAT法相比明顯較高，且與MGIT 960法相比一致性良好，結果提示可采用Gene-Xpert法替代MGIT 960法，用于診斷AIDS合并肺結核，與蔣玲等的報道一致。

綜上所述，Gene-Xpert法對于艾滋病合并肺結核診斷的效能明顯優于TB-SAT法，且與MGIT 960法檢測結果具有良好一致性，可優先選用該檢測技術診斷艾滋病合并肺結核。

參考文獻：

[1]" 梁婉寧，王勻，黃海玲，等. HAART治療艾滋病患者的藥物安全性及療效分析[J]. 中國藥事，2017，31（8）：965-968.

[2]" Mohammed H，Assefa N，Mengistie B. Prevalence of extrapulmonary tuberculosis among people living with HIV/ AIDS in sub-Saharan Africa：A systemic review and meta-analysis[J]. HIV AIDS，2018，10（1）：225-237.

[3]" Sathiyamoorthy R，Kalaivani M，Aggarwal P， et al. Prevalence of pulmonary tuberculosis in India： A systematic review and meta analysis[J]. Lung India：Official Organ of Indian Chest Society，2020，37（1）：45-52.

[4]" 劉剛，盧振. γ-干擾素釋放試驗聯合GeneXpert MTB/RIF在艾滋病合并肺結核中的診斷價值[J]. 中國性科學，2021，30（12）：147-149.

[5]" 謝紹斌，陳建仁，吳修宇. Gene-XpertMTB/RIF檢測診斷肺結核的應用價值[J]. 醫學檢驗與臨床，2021，32（1）：59-61.

[6]" 中華醫學會感染病學分會艾滋病丙型肝炎學組，中國疾病預防控制中心. 中國艾滋病診療指南（2018版）[J]. 協和醫學雜志，2019，10（1）：31-52.

[7]" 中華人民共和國國家衛生健康委員會. 國家肺結核診斷標準：WS 288—2017[S]. 北京：中華人民共和國國家衛生健康委員會，2017.

[8]" 蔣玲，錢春芳，李同心，等. 4種檢測技術對艾滋病合并肺結核的診斷效能比較[J]. 檢驗醫學與臨床，2021，18（17）：2553-2555.

[9]" 馬曉光，鄭丹薇，朱巖昆，等. 恒溫擴增熒光檢測技術在基層結核病實驗室的應用價值[J]. 中國防癆雜志，2018，40（10）：1071-1074.

[10] 姜婧，劉家起，高晶晶，等. RNA恒溫擴增實時檢測技術檢測肺泡灌洗液對痰涂片陰性肺結核的快速診斷價值meta分析[J]. 現代預防醫學，2020，47（21）：3952-3955+3992.

收稿日期：2023-08-09

作者簡介：趙子瑩（1988-），女，大學本科，主管檢驗師，主要研究方向：醫學檢驗。