肺結核新型診斷技術研究與評價

摘要：目的 探討實時熒光定量核酸擴增檢測（Xpert）和結核分枝桿菌（MTB）/利福平（RIF）檢測診斷肺結核的價值。方法 選擇2021年1月—2023年7月新余市人民醫(yī)院接診的疑似肺結核患者164例，均接受痰涂片鏡檢、Xpert amp;MTB/RIF檢測，以結核分枝桿菌培養(yǎng)作為金標準，對比兩種檢測方式診斷肺結核的價值及與臨床診斷的一致性，并對比兩種檢測方式的檢查所需時間。結果 164例疑似肺結核患者，經(jīng)臨床確診為肺結核84例（51.22%），非肺結核80例（48.78%）。Xpert amp;MTB/RIF對肺結核診斷的陰性預測值為72.73%、特異度為100.00%（80/80）、靈敏度為64.29%（54/84）、準確度為81.71%（134/164）、陽性預測值為100.00%（54/54），均高于痰涂片鏡檢，有統(tǒng)計學差異（P＜0.05）；Xpert amp;MTB/RIF診斷結果與臨床診斷結果一致性尚可（kappa=0.637，P＜0.05）；痰涂片鏡檢診斷結果與臨床診斷結果一致性不佳（kappa=0.278，P＜0.05）；Xpert amp;MTB/RIF檢查所需時間短于痰涂片鏡檢，有統(tǒng)計學差異（P＜0.05）。結論 Xpertamp;MTB/RIF診斷效能優(yōu)于痰涂片鏡檢，且檢查所需時間較短，利于臨床早期制定治療方案。

關鍵詞：肺結核；痰涂片鏡檢；結核分枝桿菌培養(yǎng)；Xpertamp;MTB/RIF；一致性

中圖分類號：R978" " " " "文獻標志碼：A" " " " "文章編號：1001-8751（2024）05-0342-05

Research and Evaluation of New Diagnostic Technologies for

Pulmonary Tuberculosis

Peng Lei，" "Zhou Min，" "Zhang Cui，" "Liu Dan，" "Yin Qiong

（Xinyu People’s Hospital， Xinyu" " Jiangxi" "338000）

Abstract： Objective To investigate the value of real-time fluorescence quantitative nucleic acid amplification test （xpert）-Mycobacterium tuberculosis（MTB）/rifampicin （RIF） in the diagnosis of pulmonary tuberculosis. Methods A total of 164 patients with suspected pulmonary tuberculosis admitted to Xinyu People’s Hospital from January 2021 to July 2023 were selected. All patients underwent sputum smear microscopy and Xpertamp;MTB/RIF detection. Mycobacterium tuberculosis culture was used as the gold standard. A comparison was made between the two detection technologies' usefulness in diagnosing pulmonary tuberculosis， as well as their consistency with clinical diagnosis and time requirements. Results Among 164 suspected pulmonary tuberculosis patients， 84 cases （51.22%） were clinically diagnosed as pulmonary tuberculosis， and 80 cases （48.78%） were non-pulmonary tuberculosis. The negative predictive value of Xpertamp;MTB/RIF for the diagnosis of pulmonary tuberculosis was 72.73%， the specificity was 100.00%（80/80）， the sensitivity was 64.29% （54/84）， the accuracy was 81.71% （134/164）， and the positive predictive value was 100.00% （54 / 54）， which were higher than those of sputum smear microscopy， with statistical differences （Plt;0.05）; The findings of Xpertamp;mtb/rif testing agreed with the clinical diagnosis （kappa=0.637， P lt;0.05）. There was insufficient agreement between the results of sputum smear microscopic diagnosis and the clinical diagnosis （kappa = 0.278， Plt;0.05）; there was a statistically significant difference in the time required for Xpertamp;mtb/rif testing and sputum smear microscopy（Plt;0.05）. Conclusion The diagnostic efficacy of Xpertamp;MTB/RIF is better than that of sputum smear microscopy， and the examination time is shorter， which is conducive to early clinical treatment.

Key words： tuberculosis;" "sputum smear microscopy;" "Mycobacterium tuberculosis culture;" "Xpertamp;MTB/RIF; consistency

肺結核是臨床常見的嚴重慢性傳染性疾病之一，由結核分枝桿菌侵入人體所致，患者會出現(xiàn)乏力、盜汗和咳嗽等癥狀，部分患者伴有胸痛、咯血和呼吸困難癥狀，胸部影像學表現(xiàn)特點是病變多位于下葉背段和上葉尖后段，邊緣清晰，密度不均，變化緩慢，易形成空洞。但部分患者缺乏影像學表現(xiàn)和典型癥狀，給肺結核的及時診斷治療帶來很大難度[1-2]。痰涂片鏡檢是臨床診斷篩查肺結核的有效手段，但痰涂片的靈敏度較差，且存在標本獲取的問題；培養(yǎng)所需時間較長，不能滿足快速診斷的需要[3-4]。應用新的診斷技術，盡早發(fā)現(xiàn)患者并給予規(guī)范的治療和管理，迅速應用新的診斷技術和藥品，提高耐多藥和利福平耐藥（MDR/RR）患者發(fā)現(xiàn)率和成功治療率，減輕患者經(jīng)濟負擔，減少了大量社會勞動力的損失，取得顯著的社會效益和經(jīng)濟效益。實時熒光定量核酸擴增檢測（Xpert）和結核分枝桿菌（MTB）/利福平（RIF）是基于熒光定量聚合酶鏈式反應技術實施診斷，診斷的同時還能判斷利福平耐藥情況，其具有安全性高、操作簡便和快速的優(yōu)點，逐漸被應用于肺結核診斷[5]。本研究分析Xpertamp;MTB/RIF診斷肺結核價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2021年1月—2023年7月新余市人民醫(yī)院接診的疑似肺結核患者164例，年齡21～79歲，平均（49.65±6.16）歲；男92例，女72例。納入標準：（1）影像學檢查表現(xiàn)與活動性肺結核相似，或有咳嗽、咯血等肺結核表現(xiàn)；（2）簽署知情同意書；（3）臨床資料完整；（4）年齡≥18歲。排除標準：（1）入組前2年內(nèi)未接受抗結核藥物治療者；（2）肺外結核；（3）合并其他全身器官系統(tǒng)疾病；（4）合并可能影響實驗結果疾病；（5）存在精神類疾病者，無法配合檢查。本研究經(jīng)新余市人民醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會審核批準，倫理審批號為2021011。

1.2 主要試劑與儀器

珠海貝索生物技術有限公司抗酸染色液；奧林巴斯BX53型顯微鏡；珠海貝索生物技術有限公司生產(chǎn)的分枝桿菌羅氏培養(yǎng)基；美國Cepheid公司Genexpert MTB/RIF檢測系統(tǒng)和配套試劑。

1.3 方法

1.3.1 痰涂片鏡檢

留取患者3～5 mL痰液，制作涂片，待其干燥后，使用染色架上火焰固定，干燥，使用顯微鏡鏡檢，陽性結果為細長略帶彎曲紅色桿菌。

1.3.2 結核分枝桿菌培養(yǎng)

留取痰液1～1.5 mL，離心15 min，3000 r/min，用4%NaOH處理，取下層沉淀，并接種至羅氏培養(yǎng)管，置于結核分枝桿菌培養(yǎng)箱37 ℃孵育，每周觀察一次，2～8周才能得到肉眼可見的菌落。

1.3.3 Xpert amp;MTB/RIF檢測

留取1 mL患者痰液，按照1：2比例加入處理液，使用漩渦混合器震蕩15～30 s，室溫下靜置15 min。在試劑盒內(nèi)加入裂解的樣品2 mL，用菌吸管吸取2 mL混合液并轉移至反應盒內(nèi)，使用Xpertamp;MTB/RIF系統(tǒng)自動監(jiān)測。靶序列取ropB基因，用6種分子信標探針檢測，探針循環(huán)閾值≤38即為陽性，5個探針中至少2個探針Ct值≤38即為檢測到MTB。對利福平耐藥情況：△Ct值（特異性分子信標晚期Ct值與早期Ct值的差值）＞3.5即表示對利福平耐藥，△Ct值≤3.5提示對利福平敏感。

1.4 觀察指標

（1）以結核分枝桿菌培養(yǎng)作為金標準，分析痰涂片鏡檢和Xpertamp;MTB/RIF檢測對肺結核診斷價值及其診斷結果與臨床診斷結果的一致性，其中診斷價值包含準確度、靈敏度、特異度、陰性預測值和陽性預測值。以n表示總例數(shù)，a表示真陽性，b表示假陽性，c表示假陰性，d表示真陰性。（a+d）/n=準確度，a/（a+c）=靈敏度，d/（c+d）=陰性預測值，d/（b+d）=特異度，a/（a+b）=陽性預測值。（2）對比兩種檢測方式的檢查所需時間。

1.5 統(tǒng)計學方法

數(shù)據(jù)用Spss 23.0軟件分析，用均數(shù)±標準差（x±s）表示計量資料，兩組間對比用t檢驗，計數(shù)資料以例數(shù)與百分比（n，%）表示，用x2檢驗，使用一致性檢驗（kappa），一致性良好：kappa值≥0.75，一致性尚可：0.4～0.74，一致性不佳：＜0.4，P＜0.05為有統(tǒng)計學差異。

2 結果

2.1 臨床診斷結果

164例疑似患者經(jīng)臨床診斷顯示確診84例（51.22%）肺結核，80例（48.78%）為非肺結核，其中6例（3.66%）為非典型分枝桿菌肺部感染，74例（45.12%）為一般肺部感染。

2.2 兩種檢測方式診斷肺結核的價值及臨床診斷的一致性檢驗

Xpertamp;MTB/RIF對肺結核診斷的陰性預測值、特異度、靈敏度、準確度和陽性預測值較其余兩種檢查方式高，有統(tǒng)計學差異（P＜0.05），見表1-3。經(jīng)kappa檢驗顯示，Xpert amp;MTB/RIF診斷結果與臨床診斷結果一致性尚可（kappa=0.637，P=0.000）；痰涂片鏡檢診斷結果與臨床診斷結果一致性不佳（kappa=0.278，P=0.000）。

2.3 兩種檢測方式的檢查所需時間比較

Xpertamp;MTB/RIF檢查所需時間短于痰涂片鏡檢，有統(tǒng)計學差異（P＜0.05）。結果見表4。

3 討論

我國結核病占全球總數(shù)的14.3%，居于甲、乙類傳染病前列，而肺結核是結核病的主要類型之一，其可經(jīng)呼吸道傳播，若不及時治療，可能引起大范圍暴發(fā)流行，嚴重危害人民群眾健康，已成為全球主要公共衛(wèi)生問題之一[6-7]。早發(fā)現(xiàn)和早治療是控制肺結核的關鍵。目前臨床主要采用痰涂片鏡檢和結核分枝桿菌培養(yǎng)診斷肺結核，前者操作簡單，檢測速度快，但其對痰標本內(nèi)結核桿菌含量要求高，一般情況下痰標本內(nèi)結核菌數(shù)量＞5000 條/mL才能檢出陽性結果，但易出現(xiàn)漏檢，且技術要求高，生物安全性低，易引起污染[8-9]。結核分枝桿菌固體培養(yǎng)檢出率高，但因結核分枝桿菌生長緩慢，檢測所需時間較長，可能導致治療延誤，造成肺結核患者病情進一步惡化及傳播，因?qū)嶒炇业纳锇踩墑e要求較高，臨床應用受到一定局限性[10-11]。

Mansoori等[12]分析顯示，Xpert方法根據(jù)培養(yǎng)方法檢測到88例（95.7%）陽性病例，而根據(jù)涂片顯微鏡檢測到78例（84.8%）陽性病例。Xpert方法診斷結核病的總體敏感性和特異性分別為95.7%和99%，涂片鏡檢的敏感性和特異性分別為84.8%和97.5%，提示Xpert測定顯示出高的總體敏感性。田海兵等[13]分析顯示，Xpert amp;MTB/RIF檢測具有操作簡單、快速、安全等優(yōu)勢，且靈敏度和特異度都較高，可以作為基層醫(yī)院早期檢測肺結核的重要方法之一。本研究中，Xpertamp;MTB/RIF對肺結核診斷的陰性預測值、特異度、陽性預測值、準確度和靈敏度均高于痰涂片鏡檢，進一步分析顯示，Xpertamp;MTB/RIF診斷結果與臨床診斷結果的一致性尚可，其余痰涂片鏡檢診斷肺結核結果與臨床診斷結果一致性不佳，而Xpertamp;MTB/RIF檢查所需時間短于痰涂片鏡檢，提示Xpertamp;MTB/RIF診斷肺結核準確率更高，且檢查所需時間較短，與上述研究結果相似。GeneXpert MTB/RIF檢測原理是熒光定量聚合酶鏈式反應（PCR），針對MTB rpoB基因利福平耐藥決定區(qū)（RRDR）81bp設計探針和引物，判斷其是否出現(xiàn)突變，并可從痰液內(nèi)檢出MTB及其是否對利福平耐藥[14]。Xpertamp;MTB/RIF內(nèi)對照取1個球芽孢桿菌特異探針，可質(zhì)控檢測效率及DNA擴增效率，其整合了基于實時熒光定量PCR檢測所需的擴增、樣品準備和檢測的3個步驟，只需用處理液消化處理待測樣本并置于反應試劑盒內(nèi)，系統(tǒng)會自動運行并檢測，全程約2 h，唯一的手工操作步驟是將具有殺菌作用的緩沖液加入痰標本后轉移至反應試劑盒內(nèi)[15-16]。Xpertamp;MTB/RIF在密閉環(huán)境內(nèi)進行操作，手段操作時間短，不易造成交叉感染，對操作者及周圍環(huán)境相對安全。但Xpertamp;MTB/RIF核心是檢測MTB的DNA，失活MTB仍可使其出現(xiàn)假陽性結果，對于確診復查的MTB患者，不建議使用Xpertamp;MTB/RIF監(jiān)測治療效果，且監(jiān)測利福平耐藥性時，檢測結果可能會受到異常基因突變、痰液黏稠和標本污染等因素影響而出現(xiàn)假陰性結果。故Xpertamp;MTB/RIF仍不能完全替代傳統(tǒng)MTB培養(yǎng)與藥敏試驗。

綜上所述，與痰涂片鏡檢相比，使用Xpertamp;MTB/RIF診斷可提高肺結核檢出率，且檢測耗時較短，值得臨床推廣使用。

參 考 文 獻

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