探討新生兒溶血病血清學檢測在HDFN診斷中的應用價值

梁婷婷 李麗紅

因母嬰血型不合而引發的新生兒或胎兒溶血性疾?。╤emolytic disease of the fetus and newborn，HDFN），臨床將其稱為溶血癥。父母雙方的血型決定了胎兒的血型，當父方帶給胎兒的是母方沒有的血型抗原后，此抗原進入母體導致母體生成相應的免疫抗體；免疫抗體順著胎盤絨毛膜憑借Ig-G 抗體形式到達胎兒血液循環引發抗原抗體免疫反應，進而誘發肝脾腫大、水腫、貧血等臨床癥狀，并會在出生后發生進行性黃疸加重[1]。ABO 血型不合是引發該疾病發生的主要因素，而Rh 血型D 抗體引發該疾病病情較重，會引發髓外造血、膽紅素腦病等病癥，對新生兒的生命安全以及成長發育造成不利影響[2]。流式細胞儀法、血清學檢查以及常規檢查均為HDFN 實驗室檢查常用方式[3]?，F對2019 年1月—2022 年12 月龍巖市第二醫院收治的100 例疑似HDFN 患兒的血樣進行血清學測定，以臨床綜合診斷為“金標準”，分析血清學檢測在HDFN 診斷中的應用價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019 年1 月—2022 年12 月龍巖市第二醫院新生兒科接受治療的高膽紅素血癥患兒100 例，男56 例，女44 例；年齡1 ～15 d，平均（4.03±0.23）d。分娩孕周36 ～40 周，平均（38.03±0.45）周。本研究基本流程已上交至醫院醫學倫理委員會（批號180729），在其批準下開展。參與研究的100 例患兒家屬均對本研究知情同意。

HDFN 臨床診斷標準[4]：（1）紅細胞抗體釋放試驗或直接抗人球蛋白試驗陽性。（2）血紅蛋白及紅細胞量減少（臍帶血＜13 g/dL）。（3）無其他可能誘發新生兒溶血的情況。

HDFN 實驗室診斷標準[5]：抗體放散試驗、游離抗體試驗、直接抗人球蛋白試驗（direct antiglobulin test，DAT）試驗中，3 項結果均為陽，可確診為HDFN ；游離抗體試驗為陰，另2 項為陽性，也可確診為HDFN ；只有抗體放散試驗為陽，也可確診為HDFN。游離抗體試驗、DAT 試驗單項或2 項結果為陽性，為疑似HDFN。

納入標準：（1）100 例患兒的皮膽素均在15 mg/dL以上，出現高膽紅素血癥相關臨床表現，疑似為母嬰血型不合而引發的HDFN。（2）臨床資料完整。排除標準：（1）經檢測發現患兒體內存在單純皰疹病毒抗體、巨細胞病毒抗體、風疹病毒抗體或合并地中海貧血等。（2）伴有免疫性疾病者。

1.2 方法

測定試劑：上海血液生物醫藥有限責任公司生產的Rh（D）血型定型試劑以及抗A、抗B 血型定型試劑、反定型標準紅細胞。由戴安娜生物技術有限公司生產的抗人球蛋白檢測卡以及新生兒血型卡（直抗卡）。邁瑞醫療器械有限公司生產的BC-7500 檢測血細胞比容、血紅蛋白。西門子醫學診斷有限公司生產的ADVIA 2120 全自動生化分析儀檢測相關生化項目。

血樣采集：抽取母親靜脈血以及新生兒臍帶血各3 ～5 mL，分別置入含EDTA-K2 抗凝劑試管中，混勻送檢。

實驗室檢查：（1）母親血清抗體效價檢測：將樣本血清中的Ig-M 抗A、抗B 抗體用2-Me 試劑處理后，對干擾進行消除；對Ig-G 抗體效價進行測定，測定方式為鹽水倍比稀釋法。（2）游離抗體試驗檢測：將標準A、B 紅細胞懸液各1 滴以及新生兒血清2 滴分別加入試管中，在37 ℃溫育箱內反應30 min ；再通過生理鹽水進行3 次洗滌，將上清液去除；將抗人球蛋白試劑Ig-G 加入各個試管中，每個試管加2 滴，1 500g離心15 s ；根據是否出現凝集判定結果。（3）新生兒血樣抗體釋放試驗：在試管中加入等體積的生理鹽水以及壓積紅細胞，混勻后置入56 ℃水浴箱內反應10 min，在1 500g的條件下進行3 min 的離心；將上層放散液提取到另一潔凈試管中，加入相應抗原紅細胞，再放置37 ℃水浴箱內反應30 min ；再通過生理鹽水進行3 次洗滌，加入抗人球蛋白試劑，1 500g離心15 s。根據是否出現凝集判定結果。（4）新生兒血樣直接抗人球蛋白試驗：依據抗人球蛋白檢測卡說明書操作，洗滌3 次待檢紅細胞制成紅細胞懸液，與抗人球蛋白試劑一起加入試劑管后1 500g離心15 s。根據是否出現凝集判定結果。（5）母親不規則抗體篩查檢測：依據抗人球蛋白檢測卡說明書操作。（6）通過試管法鑒定母親與新生兒血樣標本。

1.3 觀察指標

（1）記錄100 例患兒中母嬰血型不合的發生情況，并分析造成血型不合的系統類型以及各系統引發的母嬰血型不合中發生HDFN 的情況[6]。（2）母親A、B血型發生HDFN 的情況。（3）記錄31 例HDFN 患兒的血清學檢測結果。（4）31 例HDFN 患兒采血送檢結果中，出生天數不同與其結果陽性的關系。（5）產前母體采血送檢結果與產后嬰兒采血送檢結果對比。

1.4 統計學方法

采用SPSS 26.0 統計學軟件進行分析。計數資料用n（%）表示，行χ2檢驗。P＜ 0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同血型系統發生HDFN 的情況對比

100 例患兒中，有58 例患兒出現母嬰血型不合，其中ABO 血型系統50 例，Rh 血型系統8 例。ABO 血型系統HDFN 發生率顯著高于Rh 血型系統（P＜0.05），見表1。

表1 不同血型系統發生HDFN 的情況對比 [例（%）]

2.2 母親A、B 血型發生HDFN 的情況對比

50 例ABO 血型系統母嬰不合者中，O-A 型HDFN 發生率顯著高于O-B 型（P＜0.05），見表2。

表2 母親A、B 血型發生HDFN 的情況對比[例（%）]

2.3 31 例HDFN 患兒的血清學檢測結果

抗體放散試驗、游離抗體試驗、DAT 試驗中，3項結果均為陽者1 例，占比3.23% ；前兩項試驗結果為陽性，DAT 試驗結果為陰性2 例，占比6.45% ；DAT 試驗以及抗體放散試驗結果為陽性，游離抗體試驗結果為陰性3 例，占比9.68% ；單獨抗體放散試驗為陽性者25 例，占比80.65%。單獨抗體放散試驗為陽性的HDFN 患兒占比率顯著高于其他類型（χ2＝5.362，P＜0.05）。

2.4 31 例HDFN 患兒采血送檢結果中，出生天數不同與其結果陽性的關系

31 例HDFN 患兒中，出生天數為4 ～7 d 者其陽性率顯著高于其他出生天數的患兒（χ2＝6.152，P＜0.05），及生命安全[9]。因此，對孕婦產前進行篩查，早檢測、見表3。

表3 31 例HDFN 患兒采血送檢結果中，出生天數不同與其結果陽性的關系（例）

2.5 產前母體采血送檢結果與產后嬰兒采血送檢結果對比

產前檢測IgG 抗A 或抗B 效價結果與產后采血對比，產前檢測準確率為90.32%（28/31），產前母體采血送檢結果與產后嬰兒采血送檢結果對比見表4。

表4 產前母體采血送檢結果與產后嬰兒采血送檢結果對比

3 討論

母體與胎兒之間血型不一致是因為胎兒從父體獲得了母體不具備的紅細胞抗原，這對母體造成刺激，導致母體發生免疫反應，生成抗體IgG。該抗體通過母嬰之間的胎盤進入胎兒體內，與胎兒血液中對應抗原結合而破壞胎兒血液中的紅細胞，誘發血管外溶血的發生[7]。該疾病是誘發新生兒黃疸以及高膽紅素血癥的主要因素，而母體中的抗體數量、新生兒自身造血功能以及抗體與胎兒體內紅細胞結合量均會對溶血病的患病程度造成影響，引發不同程度的水腫、貧血、黃疸[8]。而高膽紅素血癥是該疾病引發的最危險并發癥，它會對新生兒腦干中各類神經造成損害，會對患兒的運動、智力均造成影響，威脅患兒的生活質量以早診斷、早治療對該疾病患兒具有重要意義，可為其生命安全做出保障，符合我國的優生優育政策[10]。

本研究表明，100 例患兒中58 例出現母嬰血型不合，其中ABO 血型系統50 例，Rh 血型系統8 例。ABO 血型系統HDFN 發生率顯著高于Rh 血型系統（P＜0.05）；50 例ABO 血型系統母嬰不合者中，O-A 型HDFN 發生率顯著高于O-B 型（P＜0.05）。這提示ABO 血型系統引發的HDFN 發生率更高。這是因為ABO 溶血病為同種免疫疾病類型，胎兒體內的紅細胞抗原會對母體造成影響并誘發免疫反應，進而導致母體內生成為抵抗胎兒紅細胞抗原而出現的IgG 抗體。該抗體在胎盤的借助下進入到胎兒的血液內，損害胎兒血液中的紅細胞，引發溶血[11-12]。而母親為O 型血，胎兒為A型或B 型血是主要的ABO 溶血病類型，這與O 型血母體中具有一定的抗A 或抗B 免疫抗體有關。

本研究還得出，31 例HDFN 患兒的血清學檢測結果中，單獨抗體放散試驗為陽性的HDFN 患兒占比率顯著高于其他類型（P＜0.05）。這提示血清學檢測在HDFN 檢測中具有較高的臨床應用價值，可為疾病的早期診斷提供有價值的輔助依據。這與龐建等[13]在《臨床血液學雜志》中發表的《血型血清學檢測技術對新生兒溶血病的診斷價值》一文中相應觀點一致，證實了本研究結果的可靠性。對其分析，抗體放散試驗、游離抗體試驗、DAT 試驗屬于ABO 型溶血病檢驗的主要方式，抗體放散試驗屬于直接檢驗，對有無發病進行判定；游離抗體試驗是對血清中游離抗體反應進行檢驗，進而對疾病的進展情況進行判定[14]。DAT 試驗是對紅細胞中IgG 抗體反應進行檢測。單獨抗體放散試驗基本可以評定患兒是否患病，而另2種檢驗方式屬于補充檢驗，三者聯合應用可提高診斷結果準確性[15]。另外，本研究還對31 例患兒檢出時間進行了研究，得出出生天數為4 ～7 d 者其陽性率顯著高于其他出生天數的患兒（P＜0.05）。這說明新生兒出生1 周內其被檢出的概率最大。而產前檢測IgG 抗A 或抗B 效價結果與產后采血對比，產前檢測準確率為90.32%，這說明母親體內IgG 抗A 或抗B 效價越高，新生兒娩出后患有該疾病的風險越大。文章中體現了中國輸血協會擬定的《胎兒新生兒溶血病實驗室檢測專家共識》的臨床參考標準[16]。

綜上所述，在HDFN 診斷中血清學檢測結果具有較高的輔助價值，對于O 型血母體、A 型血嬰兒應格外注意，以便于及時檢出疾病，為新生兒的生命安全以及健康成長提供保障。