急性呼吸窘迫綜合征新生兒微小RNA-206 表達(dá)水平與炎癥因子的相關(guān)性分析

張 寧 ，王慶法，丁寶棟，竇金蘭，劉國(guó)志

（濰坊市益都中心醫(yī)院新生兒科，山東 濰坊 262500）

新生兒急性呼吸窘迫綜合征又稱新生兒肺透明膜病，是指新生兒出生后出現(xiàn)進(jìn)行性呼吸困難、發(fā)紺、呻吟等急性呼吸窘迫癥狀，病情隨著病程延長(zhǎng)呈進(jìn)行性加重，若不加以控制，可導(dǎo)致呼吸衰竭，對(duì)新生兒的生命安全造成嚴(yán)重威脅。微小RNA-206（miR-206）是一種多功能miRNA，位于人類6q12 染色體上，對(duì)肺功能有一定調(diào)節(jié)作用。由于急性呼吸窘迫綜合征新生兒存在肺損傷，所以miR-206 表達(dá)量下降，且病情越嚴(yán)重， miR-206 表達(dá)量越低[1]。新生兒急性呼吸窘迫綜合征疾病進(jìn)展與炎癥反應(yīng)有關(guān)，主要表現(xiàn)為炎癥因子大量釋放會(huì)損傷肺組織。降鈣素原（PCT）是降鈣素的前肽物質(zhì)，在炎癥、免疫相關(guān)性疾病等患者血清中含量很高；C-反應(yīng)蛋白（CRP）是炎癥反應(yīng)標(biāo)志物，機(jī)體處在炎癥反應(yīng)狀態(tài)時(shí)其水平迅速升高；白細(xì)胞介素-6（IL-6）、白細(xì)胞介素-17（IL-17）可趨化多種炎癥物質(zhì)的釋放，引起氧化應(yīng)激損傷，加重新生兒急性呼吸窘迫綜合征。PCT、CRP、IL-6、IL-17 等炎癥因子水平及miR-206 表達(dá)量均可在一定程度反映新生兒急性呼吸窘迫綜合征病情[2-3]。基于此，本研究旨在分析急性呼吸窘迫綜合征新生兒miR-206 表達(dá)水平及與炎癥因子的相關(guān)性，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料回顧性分析2019 年9 月至2021 年9 月濰坊市益都中心醫(yī)院收治的73 例急性呼吸窘迫綜合征新生兒的臨床資料，將其作為觀察組，并根據(jù)其病情輕重程度[4]分為輕度組[27 例，200 mmHg（1 mmHg=0.133kPa） ＜ 動(dòng)脈血氧分壓（PaO2） / 吸入氣體中氧氣的所占比例（FiO2） ≤ 300 mmHg]、中度組（25 例，100 mmHg＜PaO2/FiO2≤ 200 mmHg）、重度組（21 例，PaO2/FiO2≤ 100 mmHg）；另回顧性分析同期48 例進(jìn)行健康體檢的新生兒的體檢資料作為對(duì)照組。對(duì)照組中男、女新生兒均為24 例；出生時(shí)間3～24 h，平均（13.35±1.26） h；體質(zhì)量2.58～4.06 kg，平均（3.62±0.21） kg。觀察組中男、女患兒分別為38、35例；出生時(shí)間4～24 h，平均（13.36±1.25） h；體質(zhì)量2.52～4.10 kg，平均（3.66±0.24） kg。兩組研究對(duì)象上述各項(xiàng)資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），組間可比。納入標(biāo)準(zhǔn)：觀察組患兒符合《實(shí)用新生兒學(xué)》[4]中急性呼吸窘迫綜合征的診斷標(biāo)準(zhǔn)；發(fā)病時(shí)間≤ 24 h；所有研究對(duì)象臨床資料齊全。排除標(biāo)準(zhǔn)：先天性呼吸道畸形；合并免疫性疾病；肝臟、心臟、腎臟等重要臟器功能不全。濰坊市益都中心醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)已詳細(xì)審核本次研究是否符合規(guī)范，并批準(zhǔn)開展。

1.2 檢測(cè)方法采集所有研究對(duì)象清晨空腹靜脈血6 mL，取其中3 mL 靜脈血放入臺(tái)式高速離心機(jī)（長(zhǎng)沙綜儀生物科技有限公司，型號(hào)：MH3180R）中離心10 min，轉(zhuǎn)速設(shè)置為3 000 r/min，得到血清，其中3 mL 血清使用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定血清PCT、CRP、IL-6、IL-17 水平；取剩余3 mL 靜脈血，抗凝后以相同的離心條件取血漿，參考Trizol 試劑盒說明書提取血漿中總RNA，使用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒將提取的RNA 逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。將U6作為內(nèi)參，上游：5'CTCGCTTCGGCAGCACA-3'，下游：5'AACGCTTCACGAATTTGCGT-3'；miR-206，上游：5'CGTCAGAAGGAATGATGCACAG-3'，下游：5'-ACCTGCGTAGGTAGTTTCATGT-3'。使用熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法測(cè)定miR-206 相對(duì)表達(dá)量，使用全自動(dòng)實(shí)時(shí)熒光定量PCR 儀（qRT-PCR）（山東萊恩德智能科技有限公司，型號(hào)：LD-PCR）進(jìn)行擴(kuò)增，反應(yīng)條件：95 ℃10 s，59 ℃ 15 s，72 ℃ 33 s，重復(fù)40 循環(huán)，在72 ℃收集信號(hào)，采集熒光，用2-ΔΔCt法計(jì)算miR-206 相對(duì)表達(dá)量。

1.3 觀察指標(biāo)①比較對(duì)照組、觀察組研究對(duì)象血漿miR-206 表達(dá)量及血清PCT、CRP、IL-6、IL-17 水平。②比較不同病情程度新生兒急性呼吸窘迫綜合征患兒血漿miR-206 表達(dá)量及血清PCT、CRP、IL-6、IL-17 水平。③對(duì)血漿miR-206 表達(dá)水平與血清PCT、CRP、IL-6、IL-17 進(jìn)行相關(guān)性分析。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 25.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析本研究所有數(shù)據(jù)，計(jì)量資料均使用S-W 法檢驗(yàn)證實(shí)服從正態(tài)分布，以(±s)表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)；使用Pearson 法分析血漿miR-206 表達(dá)水平與血清PCT、CRP、IL-6、IL-17 的相關(guān)性。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)照組、觀察組研究對(duì)象血漿miR-206 表達(dá)量及血清PCT、CRP、IL-6、IL-17 水平比較觀察組研究對(duì)象血漿miR-206 表達(dá)量低于對(duì)照組；觀察組血清PCT、CRP、IL-6、IL-17 水平均高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），見表1。

表1 對(duì)照組、觀察組研究對(duì)象血漿miR-206 表達(dá)量及血清PCT、CRP、IL-6、IL-17 水平比較(±s )

表1 對(duì)照組、觀察組研究對(duì)象血漿miR-206 表達(dá)量及血清PCT、CRP、IL-6、IL-17 水平比較(±s )

注：PCT：降鈣素原；CRP：C-反應(yīng)蛋白；IL-6：白細(xì)胞介素-6；IL-17：白細(xì)胞介素-17。

組別例數(shù)miR-206PCT(μg/L)CRP(mg/L)IL-6(pg/mL)IL-17(pg/mL)對(duì)照組481.31±0.220.23±0.07 2.36±0.3610.65±1.12 6.72±1.46觀察組730.63±0.152.76±0.2125.65±2.5425.53±2.2120.35±3.52 t 值20.22780.48163.02443.10725.400 P 值＜0.05＜0.05＜0.05＜0.05＜0.05

2.2 不同病情程度患兒血漿miR-206 表達(dá)量及血清PCT、CRP、IL-6、IL-17 水平比較重度組患兒血漿miR-206 水平低于中度組、輕度組，且中度組低于輕度組；重度組患兒血清PCT、CRP、IL-6、IL-17 水平均高于中度組、輕度組，且中度組均高于輕度組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），見表2。

表2 不同病情程度患兒血漿miR-206 及血清PCT、CRP、IL-6、IL-17 水平比較(±s )

注：與輕度組比，*P＜0.05；與中度組比，#P＜0.05。

組別例數(shù)miR-206PCT(μg/L)CRP(mg/L)IL-6(pg/mL)IL-17(pg/mL)輕度組270.93±0.212.34±0.1322.13±1.4522.25±2.5518.63±2.45中度組25 0.64±0.15* 2.52±0.21* 25.65±2.35* 24.43±2.84* 20.54±2.56*重度組21 0.52±0.11*# 2.93±0.23*# 27.42±2.62*# 26.52±3.26*# 23.63±4.75*#F 值39.68757.68438.23213.20313.576 P 值＜0.05＜0.05＜0.05＜0.05＜0.05

2.3 急性呼吸窘迫綜合征患兒血漿miR-206 表達(dá)量與血清PCT、CRP、IL-6、IL-17 的相關(guān)性血漿miR-206 表達(dá)量與血清PCT、CRP、IL-6、IL-17 水平均呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），見表3。

表3 急性呼吸窘迫綜合征患兒血漿miR-206 表達(dá)量與血清PCT、CRP、IL-6、IL-17 的相關(guān)性

3 討論

新生兒急性呼吸窘迫綜合征影響因素眾多，腦損傷、感染、孕期糖尿病等均會(huì)增加新生兒急性呼吸窘迫綜合征發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，且該病具有起病急、進(jìn)展快的特點(diǎn)，是造成新生兒死亡的主要原因之一。如何對(duì)新生兒急性呼吸窘迫綜合征進(jìn)行及時(shí)有效的診斷和治療，對(duì)于改善新生兒結(jié)局具有重要意義。

miR-206 已被證實(shí)屬于抑癌因子，能夠調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的分泌表達(dá)，抑制新生血管生成，起到抑制癌細(xì)胞增殖的作用。有研究表明，miR-206 在炎癥反應(yīng)中也扮演著重要角色，miR-206 通過調(diào)控核因子信號(hào)傳導(dǎo)，參與機(jī)體免疫應(yīng)答和炎癥反應(yīng)，miR-206 在肺組織中廣泛表達(dá)，能夠抑制其下游相關(guān)靶基因突促小泡膜蛋白2 的表達(dá)，延緩肺纖維化進(jìn)程，阻斷炎癥反應(yīng)[5]。新生兒急性呼吸窘迫綜合征是肺部急性炎癥反應(yīng)過程，肺泡里面的中性粒細(xì)胞聚集，大量炎癥因子被釋放，導(dǎo)致血液中炎癥因子水平異常升高，引起局部劇烈炎癥反應(yīng)，肺泡毛細(xì)血管膜受到損傷，血管通透性增加，肺泡和肺間質(zhì)發(fā)生水腫，最終導(dǎo)致急性低氧性呼吸衰竭，且炎癥因子水平隨病情進(jìn)展而上升。PCT是一種無(wú)激素活性的糖蛋白，是降鈣素的前體肽，CRP 是一種急性時(shí)相反應(yīng)蛋白，正常情況下人體內(nèi)血液中PCT、CRP 含量較低，當(dāng)出現(xiàn)炎癥反應(yīng)時(shí)，腫瘤壞死因子-α、白細(xì)胞介素-1β 等因子能刺激巨噬細(xì)胞和單核細(xì)胞分泌大量PCT、CRP，其水平顯著增高，急性呼吸窘迫綜合征PCT、CRP 含量明顯升高[6-7]；IL-6 是促炎癥因子，主要由內(nèi)皮細(xì)胞、T 淋巴細(xì)胞及單核細(xì)胞生成，在感染、創(chuàng)傷、休克等刺激下，IL-6 表達(dá)異常上調(diào)，可促進(jìn)CRP 及補(bǔ)體表達(dá)，損傷細(xì)胞功能，同時(shí)可激活中性粒細(xì)胞，促進(jìn)超氧化合物及巨噬細(xì)胞分化及浸潤(rùn)，上調(diào)黏附因子表達(dá)，活化淋巴細(xì)胞，加劇機(jī)體炎癥反應(yīng)，急性呼吸窘迫綜合征患兒IL-6 水平異常升高[8]；IL-17 是前炎癥細(xì)胞因子，會(huì)刺激中性粒細(xì)胞增殖、成熟，還會(huì)激活巨噬細(xì)胞分泌粒細(xì)胞、前列腺素E2等，促進(jìn)呼吸道炎癥反應(yīng)，IL-17 水平持續(xù)或反復(fù)升高會(huì)造成肺內(nèi)上皮、內(nèi)皮損傷，引起呼吸道的器質(zhì)性改變，影響氧合功能，發(fā)展成急性呼吸窘迫綜合征[9]。本研究中，觀察組研究對(duì)象血漿miR-206 表達(dá)量低于對(duì)照組；觀察組研究對(duì)象血清PCT、CRP、IL-6、IL-17 水平高于對(duì)照組，且輕度、中度、重度組患兒血漿miR-206 水平逐漸降低，血清PCT、CRP、IL-6、IL-17 水平均逐漸升高，表明急性呼吸窘迫綜合征患兒體內(nèi)血漿miR-206 表達(dá)水平降低，且隨著病情進(jìn)展血漿miR-206 表達(dá)降低，血清PCT、CRP、IL-6、IL-17 水平升高。

新生兒急性呼吸窘迫綜合征存在炎癥反應(yīng)，PCT、CRP、IL-6 等炎癥因子過量分泌，加重病情，且炎癥因子水平越高，炎癥反應(yīng)程度越劇烈。當(dāng)血漿miR-206 表達(dá)量下降時(shí)，其抗炎效果減退，無(wú)法有效控制機(jī)體炎癥反應(yīng)，會(huì)造成氣道黏液分泌過量，導(dǎo)致氣道阻塞，加重患兒病情[10]。本研究結(jié)果顯示，血漿miR-206 表達(dá)量與血清PCT、CRP、IL-6、IL-17 水平均呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，表明血漿miR-206 表達(dá)量與血清PCT、CRP、IL-6、IL-17 水平存在一定關(guān)系。

綜上，急性呼吸窘迫綜合征新生兒血漿miR-206 表達(dá)量異常降低，血清PCT、CRP、IL-6、IL-17 水平異常升高，且隨病情進(jìn)展水平變化顯著，血漿miR-206 表達(dá)量與血清PCT、CRP、IL-6、IL-17 水平存在一定關(guān)系，可對(duì)相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行監(jiān)測(cè)為臨床治療新生兒急性呼吸窘迫綜合征提供參考依據(jù)。