生活飲用水中微生物檢測的質(zhì)量控制

張 寧，張燕杰

（陽谷縣疾病預防控制中心檢驗科，山東聊城 252300）

生活飲用水微生物檢測是利用微生物學的理論與方法，檢驗微生物的種類、數(shù)量、性質(zhì)，可根據(jù)檢測結(jié)果對飲用水質(zhì)量是否合格進行判定。但微生物檢測容易受到檢測環(huán)境、實驗設備、樣品因素等外源因素的影響，導致檢測結(jié)果與實際情況不符，進行使檢驗人員對生活飲用水的質(zhì)量做出誤判[1-2]。因此，在生活飲用水的微生物檢測過程中，需要對影響檢測結(jié)果的各個外源因素采取質(zhì)量控制措施，降低各因素的干擾程度，保證檢測結(jié)果的準確性、可靠性。基于此，本文針對生活飲用水微生物檢測及質(zhì)量控制影響因素、質(zhì)量控制措施展開分析。

1 生活飲用水微生物檢測

生活飲用水微生物檢測項目主要有菌落總數(shù)、總大腸菌群、耐熱大腸菌群等。其中，菌落總數(shù)檢測是將待測水樣混勻，移取一定量到培養(yǎng)皿，使其均勻分布于平皿中的培養(yǎng)基內(nèi)。按照規(guī)定的培養(yǎng)方法，將其放在37 ℃環(huán)境中培養(yǎng)2 d。培養(yǎng)結(jié)束后取出培養(yǎng)皿，再進行菌落計數(shù)，得到水樣的菌落總數(shù)?？偞竽c菌群檢測一般使用多管發(fā)酵法，先進行發(fā)酵試驗，即在乳糖蛋白培養(yǎng)液中添加適量的水樣，混勻后進行培養(yǎng)，觀察是否有產(chǎn)酸產(chǎn)氣現(xiàn)象，若無，則說明水樣中總大腸菌群含量很低，指標符合要求；若有產(chǎn)酸產(chǎn)氣現(xiàn)象，則應使用伊紅美藍培養(yǎng)基檢測并判斷菌落特征，對菌落種類進行初步判斷，之后借助革蘭氏染色、顯微鏡觀察等方法進一步明確具體的大腸菌群類型[3]。耐熱大腸菌群的檢測也可以采用多管發(fā)酵法，在發(fā)酵后進行耐熱培養(yǎng)，即在44 ～45 ℃環(huán)境中培養(yǎng)1 d，觀察產(chǎn)酸產(chǎn)氣特征并進行后續(xù)的檢測步驟；耐熱大腸菌群還可以使用平板培養(yǎng)法，即在耐熱培養(yǎng)后，將出現(xiàn)產(chǎn)酸產(chǎn)氣的菌種接種在平板上，于37 ℃繼續(xù)培養(yǎng)1 d，再進行確認及出具檢測報告。

2 生活飲用水微生物檢測的影響因素

2.1 檢測環(huán)境

檢測環(huán)境與飲用水微生物檢測結(jié)果密切相關，如室內(nèi)溫度、濕度、室內(nèi)空氣消毒質(zhì)量等均會影響檢測結(jié)果。室內(nèi)溫度過高可能會導致水樣中的微生物大量死亡，進而影響檢驗結(jié)果?？諝庀举|(zhì)量不合格容易導致空氣中的微生物超標，若空氣中的微生物進入水樣中，則可能會導致水樣污染，進而使檢測結(jié)果與實際不相符，即出現(xiàn)假陽性情況[4]。實驗室內(nèi)濕度為細菌和霉菌的生長提供了條件，濕度過高會導致微生物快速蔓延，增加了實驗過程中水樣受到污染的風險。因此，在進行生活飲用水微生物檢驗前，應保證檢測環(huán)境符合相關標準要求。

2.2 實驗設備

生活飲用水微生物檢測過程中，通常需要借助各種設備儀器，如恒溫箱、菌落計數(shù)器、厭氧培養(yǎng)箱、微生物勻質(zhì)器及生化培養(yǎng)箱等。如果存在儀器設備滅菌不合格、設備老化、設備缺乏維護及設備無法能正常運行等情況，容易影響檢驗結(jié)果。

2.3 檢測人員

飲用水中微生物檢測結(jié)果的準確性也會受到檢測人員的影響，主要表現(xiàn)在檢測人員操作的規(guī)范性方面。檢測人員在檢測過程中，若出現(xiàn)未按照相關檢測標準執(zhí)行、違規(guī)操作設備、未按要求持證上崗、缺乏責任心以及操作技能掌握不熟練等情況，容易導致微生物檢測結(jié)果與實際存在較大誤差[5]。

2.4 樣品因素

生活飲用水的樣品采樣、樣品存儲條件、樣品存儲時間會影響微生物檢測結(jié)果。例如，采樣容器不適宜、采樣后樣品未按要求密封、樣品長距離運輸?shù)惹闆r都可能導致樣品中的微生物含量發(fā)生改變，進而影響檢測結(jié)果。對于需要長距離運輸?shù)乃畼樱舨杉畼訒r使用密封性不好的容器，則容易導致水樣溢出瓶外，造成水樣污染。樣品存儲時間越長，菌落總數(shù)檢測結(jié)果越高，但不影響總大腸菌群的定性結(jié)果。

2.5 實驗試劑

實驗試劑的選擇與使用過程都會影響水中微生物的檢測結(jié)果。例如，若實驗中使用的培養(yǎng)基質(zhì)量不合格，容易出現(xiàn)微生物污染情況，將其用于水樣的接種和培養(yǎng)，易導致檢測結(jié)果不準確；或者培養(yǎng)基各含量配比不當，含有的成分不能滿足待測菌種的生長條件，在接種后容易導致待測菌種無法正常生長，此種情況也將會直接影響檢測結(jié)果的準確性。

2.6 檢測過程

微生物檢測過程中，取樣體積、檢測方法、操作流程、消毒細節(jié)、標準限值、技術標準以及培養(yǎng)條件等因素均可對檢測結(jié)果產(chǎn)生影響。例如，檢測過程中，受檢驗方法的限制，生活飲用水中的細菌無法被全部檢測出來。在培養(yǎng)環(huán)節(jié)，培養(yǎng)時間過長容易導致細菌數(shù)量過多、平板中菌種密度過大，影響觀察和分析結(jié)果；若培養(yǎng)時間不足，容易導致細菌生長過少，使細菌無法檢出。

3 生活飲用水微生物檢測的質(zhì)量控制

3.1 檢測環(huán)境質(zhì)量控制

為保證檢測環(huán)境符合生活飲用水微生物檢測要求，需要對檢測環(huán)境進行檢查，并采取相應的措施。實驗室應當具備良好的通風、排氣、排水系統(tǒng)，確保實驗室內(nèi)部空氣質(zhì)量、污染物排放量符合標準。根據(jù)要求對實驗室的空氣進行紫外線消毒，紫外線強度應達到70 μW·cm-2，若紫外線強度太低，應該及時更換燈管[6]。進行空氣消毒后，應及時檢測空氣中浮菌數(shù)，確保消毒質(zhì)量合格。此外，實驗室應限制人員進出，盡可能保持實驗室環(huán)境干凈整潔，降低污染的風險。

3.2 實驗設備質(zhì)量控制

實驗設備質(zhì)量控制需要從實驗設備的日常維護入手，主要包括制定作業(yè)指導書和檢定校準計劃。在制定作業(yè)指導書方面，對實驗室內(nèi)的所有設備制定儀器/設備清單，安排專人管理，儀器上面標有設備編號、名稱、型號、廠家等基本信息以及檢定狀態(tài)，其中檢定狀態(tài)包括送檢、送校、自檢、自校。對于檢定校準合格的設備，要貼合格證、編號、校驗日期、下次校驗日期，而不合格的設備要停止使用。實驗室設備在使用時要按規(guī)范操作，例如，使用高壓滅菌鍋時，需要按照作業(yè)指導書規(guī)范操作，并標記好材料、開始時間、壓力/溫度、取出時間等信息。天平要放在水平臺面上，并且確保無振動、無氣流影響，每次檢查后要做好檢查記錄。pH 計在使用前需要用標準液校準，并定期維護、定期清洗電極外表。

3.3 檢測人員質(zhì)量控制

檢測人員質(zhì)量控制主要從人員配置、人員資質(zhì)、人員培訓3 方面入手。在人員配置方面，應確保檢驗人員人手充足，注重檢測人員的技能水平，確保其能夠完成現(xiàn)有的檢驗工作，維持實驗室運行日常。人員資質(zhì)方面，檢測人員應有微生物學或者相近專業(yè)知識的教育背景，確保其知識儲備能夠滿足檢測要求。同時，采用內(nèi)部質(zhì)量控制、能力驗證、實驗室間比對等方法對檢測人員的能力進行評估，確保檢測人員具有基本的操作能力。在人員培訓方面，應注重對檢測人員的培訓，培訓內(nèi)容包括檢測設備操作、檢測技術等，如無菌操作、消毒滅菌、菌落計數(shù)、菌種的轉(zhuǎn)種等，培訓結(jié)束后還應針對培訓內(nèi)容進行考核，并將考核覆蓋到日常工作中。

3.4 樣品的質(zhì)量控制

生活飲用水水樣采集時，應確保采集水樣的代表性，使用的容器要根據(jù)水樣需求選擇，包括材質(zhì)、開口、體積等。容器的內(nèi)壁不能對水樣中待測組分有吸收或吸附作用，容器應有一定的密封性、抗震能力[7]。在采集自來水水樣時，采集出廠水的地點應在飲用水處理后運送至各用水區(qū)域之間的節(jié)點。末梢水的采樣中，應在用戶經(jīng)常使用并且距離用戶水表最近的出水處采集水樣[8]。水源水的采樣中，采集地點應在汲水處，同時要根據(jù)水源特點采集，如河流、湖泊等表層水可以直接采集；水庫水可以用直立式采水器采集；不自噴的泉水則先用新水代替抽水管中的水后，再進行采集。每天核對酶標儀的濾光片波長，每周清洗儀器表面，確保光學零件不沾灰塵。需要長距離運輸?shù)乃畼硬蓸訒r不宜使用500 mL 磨口試劑瓶，可以改用有密封圈的耐高溫螺紋瓶，防止在運輸過程中出現(xiàn)污染或滲漏。

3.5 實驗試劑質(zhì)量控制

配制完試劑后，要標注試劑名稱、配制日期、有效期、配制者，并做好記錄；商品試劑要標注購買日期、有效期。此外，還要定期對試劑進行性能測試，不合格的試劑應進行無害化處理。例如，配制的氧化酶試劑在使用前應進行測試（每天），靛基質(zhì)試劑每周測試1 次。實驗人員應根據(jù)試劑特點選擇適宜的保存方法，如氧化酶試劑要裝入棕色瓶，置于4 ℃環(huán)境中儲存。

3.6 檢測過程質(zhì)量控制

在檢測過程中，每批樣品檢測需抽取10%以上或樣品數(shù)≥2 個進行平行樣檢測，同時設置培養(yǎng)基空白、空氣質(zhì)控平板、全程空白對照，空白對照應為“未檢出”狀態(tài)。檢測過程中還應使用標準菌株、滅菌純水作為陰、陽對照。當樣品數(shù)量較少時，應適當增加平行雙樣測定，提高檢測結(jié)果的準確性。對培養(yǎng)基、無菌純水、采樣容器進行消毒時應遵循標準流程，并使用化學指示劑檢測卡和生物指示劑監(jiān)測殺菌效果。檢測結(jié)果應根據(jù)具體情況進行分析，當平板菌落數(shù)在30 ～300 CFU·mL-1時，實驗室與菌落總數(shù)平行雙樣偏差應控制在20%以內(nèi)。

4 結(jié)語

對生活飲用水中微生物進行檢測有助于相關人員對水質(zhì)量、水污染問題進行準確研判，是保障居民生活飲用水安全的重要措施。但生活飲用水的微生物檢測結(jié)果容易受到檢測環(huán)境、實驗設備、檢測人員、樣品等因素影響，通過采取檢測環(huán)境質(zhì)量控制、實驗設備質(zhì)量控制、檢測人員質(zhì)量控制及實驗試劑質(zhì)量控制等多種措施，可以有效消除生活飲用水微生物檢測的干擾因素，確保微生物檢測結(jié)果的準確性。