外周血單個核細胞Toll樣受體4和B淋巴細胞刺激因子表達水平與IgA腎病患者臨床指標的關系

鄧曙鵬

湖南省郴州市第三人民醫院腎臟風濕免疫科,郴州市 423000

肉眼血尿或伴蛋白尿是免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)A腎病的一種常見臨床表現。IgA腎病進展為終末期腎病的風險高,確診后5年內有5%～15%的患者進展為終末期腎病,20年內有10%～50%的患者進展為終末期腎病[1-2],嚴重影響患者的生活質量和生命健康。當前,IgA腎病的發病機制尚不完全明確[3]。Toll樣受體(Toll-like receptor,TLR)在免疫反應和炎癥性疾病中有重要作用,而且參與IgA腎病的發生發展[4]。B淋巴細胞刺激因子(B lymphocyte stimulator,BLyS)是腫瘤壞死因子超家族的成員,與B淋巴細胞表面受體結合后,可誘導其增殖分化并分泌Ig,后者在體液免疫中起重要作用[5-6]。BLyS的異常表達可致自身免疫性疾病[7]。本研究探究IgA腎病患者外周血單個核細胞TLR4和BLyS表達與臨床指標的相關性,現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年5月至2022年5月我院收治的122例IgA腎病患者作為研究對象。納入標準:(1)符合IgA腎病的診斷標準[8];(2)經腎穿刺活檢確診;(3)腎穿刺活檢前均未使用糖皮質激素或免疫抑制劑;(4)臨床資料完整。排除標準:(1)伴有其他繼發性腎病;(2)存在各種原因引發的急性腎損傷。本研究符合《赫爾辛基宣言》,獲研究對象簽署的研究知情同意書,經我院醫學倫理委員會審查批準。

1.2 方法

1.2.1 資料收集 收集所有患者的年齡、性別、病程(從出現腎病癥狀或確診至腎穿刺活檢時)、收縮壓、舒張壓、高血壓史、肉眼血尿史、尿紅細胞計數、24 h尿蛋白定量、血清白蛋白、總膽固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白(low-density lipoprotein,LDL)、血尿酸、血肌酐、尿素氮和紅細胞沉降率(erythrocyte sedimentation rate,ESR),以及外周血單個核細胞TLR4和BLyS表達水平。高血壓定義為既往存在2次或以上收縮壓≥140 mmHg和(或)舒張壓≥90 mmHg,目前正服用降壓藥。肉眼血尿定義為肉眼可直接觀察的血樣、濃茶樣或洗肉水樣尿,同時排除急性泌尿系統感染、泌尿系統惡性腫瘤或結石等引發的血尿。外周血單個核細胞TLR4和BLyS表達水平經2位病理科醫師獨立診斷,最終診斷經所有研究人員參與討論后確定。

1.2.2 經皮腎活檢 患者保持俯臥位,在B超引導下于右腎下極經皮腎穿刺獲取腎組織。石蠟包埋,切片厚度2～3 μm,常規染色;冰凍切片厚度4～5 μm,對1 mm3以下的腎組織進行預處理后制作超薄切片,并進行光學顯微鏡、免疫熒光和電鏡檢查。腎臟病理的診斷是經2位病理科醫師獨立診斷,如果出現意見分歧,由第三位病理科醫生參與診斷,最終診斷經所有研究人員參與討論后確定。

1.2.3 外周血單個核細胞TLR4和BLyS表達水平的檢測 抽取靜脈血液前告知所有研究對象禁食禁水,次日清晨由專人抽取 8 mL靜脈血液,注入血肝素抗凝,采用離心機(北京海富達科技有限公司,型號PPT10-SS)離心5 min,混入適量氯化鈉,應用Ficoll分離液獲得單個核細胞。應用實時熒光定量PCR儀(安捷倫科技有限公司,型號SureCycler 8800)檢測TLR4表達水平,應用酶標儀[美谷分子儀器(上海)有限公司,型號SpectraMax iD3]檢測BLyS表達水平。TLR4試劑盒(貨號:fs-E3898)購自上海撫生實業有限公司,BLyS試劑盒(貨號:mlsw_E1135)購自上海酶聯生物科技有限公司。

1.2.4 分組標準 根據患者外周血單個核細胞TLR4表達水平將其分為低TLR4水平組(TLR4<12.06)和高TLR4水平組(TLR4≥12.06)。比較兩組患者臨床指標,并分析外周血單個核細胞TLR4表達水平與IgA腎病患者臨床指標的關系。根據患者外周血單個核細胞BLyS表達水平將其分為低BLyS水平組(BLyS<122.09 ng/L)和高BLyS水平組(BLyS≥122.09 ng/L)。比較兩組患者臨床指標,并分析外周血單個核細胞BLyS表達水平與IgA腎病患者臨床指標的關系。

1.3 統計學處理 采用SPSS 20.0軟件對數據進行統計分析。計量資料以(x±s)表示,兩組間均數的比較采用獨立樣本t檢驗。計數資料以例數和百分數表示,比較采用χ2檢驗。相關性分析采用Pearson相關性分析。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 不同外周血單個核細胞TLR4表達水平的IgA腎病患者臨床指標的比較 低TLR4水平組和高TLR4水平組的性別、收縮壓、高血壓史、LDL、血尿酸、血肌酐和尿素氮差異均有統計學意義(均P<0.05),見表1。

2.2 IgA腎病患者外周血單個核細胞TLR4表達水平與臨床指標的相關性 IgA腎病患者外周血單個核細胞TLR4表達水平與收縮壓、LDL、血尿酸和血肌酐水平均呈正相關(均P<0.05),見表2。

表2 IgA腎病患者外周血單個核細胞TLR4表達水平與臨床指標的相關性

2.3 不同外周血單個核細胞BLyS表達水平的IgA腎病患者臨床指標的比較 低BLyS水平組和高BLyS水平組的性別、收縮壓、高血壓史、LDL、血尿酸、血肌酐和尿素氮差異均有統計學意義(均P<0.05),見表3。

表3 不同外周血單個核細胞BLyS表達水平的IgA腎病患者臨床指標的比較

2.4 IgA腎病患者外周血單個核細胞BLyS表達水平與臨床指標的相關性 IgA腎病患者外周血單個核細胞BLyS表達水平與收縮壓、LDL、血尿酸和血肌酐水平均呈正相關(均P<0.05),見表4。

表4 IgA腎病患者外周血單個核細胞BLyS表達水平與臨床指標的相關性

3 討 論

TLR如同天然免疫的眼睛,監視與識別各種不同的疾病相關分子模式,是機體抵抗感染性疾病的第一道屏障,參與機體天然免疫的調控,也是連接非特異性免疫和特異性免疫的橋梁。天然黏膜免疫異常與IgA腎病的發生和發展相關:黏膜免疫異常可能導致黏膜抗原清除障礙,使得炎癥慢性化并持續分泌IgA[9]。在IgA腎病患者的外周血單個核細胞中,TLR4相對表達水平上調[10]。TLR4被激活后可導致IgA1異常糖基化,可能通過激活核因子-κB和獨立的MyD88信號轉導途徑參與IgA腎病的發生[11-12]。IgA腎病的病理涉及B細胞活化和腎臟異常糖基化IgA1沉積:BLyS是B細胞活化的關鍵因子,可誘導B細胞增殖分化,分泌Ig,參與體液免疫[13],血清BLyS水平和IgA腎病患者腎小球組織病理學特征顯著相關,BLyS可影響IgA1鉸鏈區O-糖基化的過程,導致異常糖基化IgA1大量生成、堆積[14]。本研究探究IgA腎病患者外周血單個核細胞TLR4和BLyS表達與臨床指標的相關性。

本研究結果顯示,低TLR4水平組、低BLyS水平組的男性患者占比、合并高血壓史患者占比、收縮壓、LDL、血尿酸、血肌酐和尿素氮水平均低于高TLR4組、高BLyS水平組。進一步行Pearson相關性分析后,結果顯示,IgA腎病患者外周血單個核細胞TLR4、BLyS表達水平與收縮壓、LDL、血尿酸、血肌酐水平均呈正相關。TLR4是一種I型跨膜蛋白,廣泛分布于心肌細胞、單核細胞、血管內皮細胞,可與其配體結合,促進核因子-κB的核轉位,進而參與免疫炎癥反應、血管內皮損傷,最終影響血壓[15-16]。有研究結果顯示,高度氧化糖化LDL可通過髓樣分化蛋白2的介導,誘導TLR4-MyD88和TLR4-NOX4信號通路的激活[17]。TLR4是炎癥反應的關鍵上游調控因子,可增強腎臟中的炎癥信號傳導,促進病情的進展,進而影響患者腎功能[18];而血尿酸和血肌酐水平是評估腎功能的重要指標。BLyS屬于腫瘤壞死因子家族,BLyS的生成失調可能有助于誘導異常的單核/巨噬細胞活化,導致某些炎癥性自身免疫性疾病[19],進而影響血壓水平[20]、脂質代謝[21]和腎臟功能。

綜上所述,外周血單個核細胞TLR4和BLyS表達與IgA腎病患者收縮壓、LDL、血尿酸、血肌酐水平存在相關性。