鄭州地區(qū)表觀健康人群sdLDL-C生物參考區(qū)間的建立與驗(yàn)證*

劉鳳珍,郭鳳霞,毋小玉,魏曉霞,崔發(fā)財(cái)

河南省人民醫(yī)院檢驗(yàn)科,河南鄭州 450003

冠心病(CHD)是世界范圍內(nèi)引起人類死亡的主要原因,而動脈粥樣硬化是導(dǎo)致CHD發(fā)生的主要危險因素[1]。小而密低密度脂蛋白膽固醇(sdLDL-C)屬于低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)亞型,它與低密度脂蛋白(LDL)受體親和力低且不易被降解代謝,在循環(huán)系統(tǒng)中停留時間長且易被氧化,因此更易滲入動脈血管壁堆積并介導(dǎo)泡沫細(xì)胞的形成[2],參與動脈粥樣硬化過程。多項(xiàng)研究結(jié)果表明,體內(nèi)高sdLDL-C水平與CHD的發(fā)病風(fēng)險密切相關(guān),且sdLDL-C檢測的敏感性高于傳統(tǒng)的LDL-C檢測[3-4]。sdLDL-C檢測方法眾多,不同試劑廠家提供的參考區(qū)間存在差異,參考區(qū)間的不適用將會對患者的診斷和治療造成影響。截至目前,國家衛(wèi)生健康委員會已陸續(xù)更新、發(fā)布了10個部分的《臨床常用生化檢驗(yàn)項(xiàng)目參考區(qū)間》行業(yè)標(biāo)準(zhǔn),但sdLDL-C參考區(qū)間尚未包含在內(nèi)。為此,本研究擬采用過氧化物酶法檢測鄭州地區(qū)表觀健康人群血清sdLDL-C活性值,并初步建立和驗(yàn)證適合本地區(qū)的參考區(qū)間。

1.1一般資料 隨機(jī)選取2019年6月至2022年6月在本院特需中心體檢健康的785例成年人為研究對象1,用于建立血清sdLDL-C活性值參考區(qū)間,其中男性18～<30歲70例,30～<40歲74例,40～<50歲64例,50～<60歲84例,≥60歲77例;女性18～<30歲87例,30～<40歲94例,40～<50歲97例,50～<60歲78例,≥60歲60例。將其按照性別和年齡(18～<30歲、30～<40歲、40～<50歲、50～<60歲和≥60歲)進(jìn)行分組。另選取2022年8月在本院特需中心體檢健康的100例成年人為研究對象2,用于驗(yàn)證新建立的血清sdLDL-C活性值參考區(qū)間。納入標(biāo)準(zhǔn):健康人群分布覆蓋鄭州市六區(qū)六縣且居住1年以上,血壓正常,體質(zhì)量指數(shù)(BMI)18.5～<23.9 kg/cm2,血常規(guī)、尿常規(guī)、血脂和血糖均正常,胸部X線片或胸部CT、心電圖及B超檢查均正常。排除標(biāo)準(zhǔn):有吸煙史、飲酒史、糖尿病史、家族遺傳病史和慢性病史,既往或目前患心腦血管疾病、腎臟疾病、內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病、消化系統(tǒng)疾病、代謝和營養(yǎng)性疾病、風(fēng)濕性疾病。本研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會審批通過[審批號:(2020)倫審第76號]。

1.2儀器與試劑 血清sdLDL-C活性值檢測試劑盒及配套校準(zhǔn)品和質(zhì)控品均購自寧波美康生物科技股份有限公司,檢測儀器為ABBOTT ARCHITECT c16000全自動生化分析儀。

1.3方法

1.3.1標(biāo)本采集及檢測 采集所有研究對象空腹8 h外周靜脈血3 mL于含分離膠無抗凝劑的真空采血管中,2 h內(nèi)離心(2 980×g,5 min)并分離血清,保存于-80 ℃超低溫冰箱。樣本檢測前應(yīng)確保檢測系統(tǒng)處于在控狀態(tài),采用過氧化物酶法檢測健康體檢者血清sdLDL-C活性值。

1.3.2參考區(qū)間的建立和驗(yàn)證 根據(jù)美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(NCCLS)C28-A2文件《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室參考區(qū)間的定義、建立和確認(rèn)》[5]進(jìn)行參考區(qū)間的建立,收集研究對象1血清sdLDL-C活性值數(shù)據(jù),采用狄克遜(Dixon)檢驗(yàn)法剔除離群值,對有效數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)并計(jì)算95%CI。根據(jù)WS/T 402-2012文件《臨床實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)項(xiàng)目參考區(qū)間的制定》[6]進(jìn)行參考區(qū)間驗(yàn)證,檢測研究對象2血清sdLDL-C活性值,以新建參考區(qū)間內(nèi)樣本數(shù)與總樣本數(shù)比值為比率值(R),R≥0.90判定參考區(qū)間驗(yàn)證合格。

2 結(jié) 果

2.1正態(tài)性檢驗(yàn) K-S法檢驗(yàn)結(jié)果顯示,鄭州地區(qū)表觀健康人群血清sdLDL-C活性值服從正態(tài)分布(P>0.05),進(jìn)一步按照性別和年齡進(jìn)行分組后,各組血清sdLDL-C活性值也均服從正態(tài)分布(P>0.05)。

2.2血清sdLDL-C活性值的性別及年齡組間比較 男性表觀健康人群血清sdLDL-C活性值顯著高于女性(P<0.01),提示需按照性別設(shè)置參考區(qū)間。單因素方差分析結(jié)果顯示,女性各年齡組間血清sdLDL-C活性值比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。男性各年齡組間血清sdLDL-C活性值比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。男性18～<50歲各年齡組間sdLDL-C活性值比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),但顯著高于≥50歲各年齡組sdLDL-C活性值(P<0.05),提示男性需按照18～<50歲和≥50歲設(shè)置參考區(qū)間。見表1。

表1 不同年齡的表觀健康成年人血清sdLDL-C活性值比較

2.4血清sdLDL-C活性值參考區(qū)間的驗(yàn)證 100例健康人群中,有98例的血清sdLDL-C活性值在新建立參考區(qū)間內(nèi),有2例超出參考區(qū)間,R=0.98>0.90,參考區(qū)間驗(yàn)證合格。

3 討 論

LDL-C是臨床用于預(yù)防CHD高風(fēng)險人群發(fā)病的首選干預(yù)指標(biāo)[7],然而近年研究報道,部分CHD患者發(fā)病前LDL-C水平未見異常,另有部分CHD高風(fēng)險人群通過飲食或藥物治療降低體內(nèi)LDL-C水平后,CHD事件發(fā)生風(fēng)險仍未降低[8-9]。因此,單純的LDL-C檢測并不能完全反映CHD患者真實(shí)的血脂水平。sdLDL-C屬于LDL-C亞型,多項(xiàng)研究顯示sdLDL-C水平與CHD發(fā)病風(fēng)險密切相關(guān)[10-12],其作為預(yù)測和評估CHD發(fā)病風(fēng)險的指標(biāo)比LDL-C更敏感,已被美國國家膽固醇教育計(jì)劃成人治療組列入新發(fā)現(xiàn)的主要心血管疾病危險因素之一。目前,越來越多的實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)開展了sdLDL-C檢測,過氧化物酶法具有操作簡便、檢測時間短、易于大批量樣本檢測等優(yōu)點(diǎn),已成為常用的檢測方法,然而基于該方法的各試劑廠家提供的sdLDL-C參考區(qū)間存在差異,且廠家建立參考區(qū)間時納入的研究對象受地域限制,不具有代表性。為了更好地發(fā)揮sdLDL-C的臨床應(yīng)用價值,建立適合本地區(qū)的 sdLDL-C參考區(qū)間尤為重要。

本研究結(jié)果顯示,血清sdLDL-C活性值在鄭州地區(qū)表觀健康人群中呈正態(tài)分布,男性整體高于女性,女性不同年齡段間血清sdLDL-C活性值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),男性18～<50歲的3個年齡組間sdLDL-C活性值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),但顯著高于≥50歲各年齡組sdLDL-C活性值,提示男性需按照18～<50歲和≥50歲分段設(shè)置參考區(qū)間。根據(jù)數(shù)據(jù)分析結(jié)果,本研究初步建立了鄭州地區(qū)表觀健康人群血清sdLDL-C活性值參考區(qū)間,并參考WS/T 402-2012文件進(jìn)行了參考區(qū)間的驗(yàn)證。我國目前已建立sdLDL-C活性值參考區(qū)間的地區(qū)有成都[13]、蘭州[14]和呼和浩特[15],其研究結(jié)果均表明sdLDL-C活性值在人群中的分布具有性別差異,男性整體均值高于女性,這與本研究結(jié)果一致。然而sdLDL-C活性值在表觀健康人群中的分布狀態(tài)以及在各年齡段間的差異性表現(xiàn)與上述地區(qū)存在差異,這可能與地域、氣候環(huán)境及生活習(xí)慣等因素有關(guān),也可能與納入研究的樣本量有關(guān),后續(xù)筆者將進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量進(jìn)行驗(yàn)證,同時本研究結(jié)果也有待得到本地區(qū)其他醫(yī)療機(jī)構(gòu)的驗(yàn)證。

綜上所述,本研究初步建立和驗(yàn)證了鄭州地區(qū)表觀健康人群血清sdLDL-C活性值參考區(qū)間,有助于篩查心腦血管疾病高風(fēng)險人群,便于臨床采取有效的干預(yù)手段來降低心腦血管疾病的發(fā)生率和病死率。