兩種國產化學發光測試系統測定乙型肝炎病毒表面抗體的一致性評價

曹春玲，張潤鋒，嚴詩云，潘曉芳，吳靜標（通信作者）

廣東省醫療器械質量監督檢驗所 （廣東廣州 510663）

乙型肝炎病毒表面抗體（hepatitis b virus surface antibodies，HBsAb）濃度高于10 mIU/ml 時能對患者進行有效保護，也可以此判斷乙型肝炎病毒感染后體內抗體的反應和直觀了解接種疫苗后的機體免疫狀態[1]。化學發光法由于具有靈敏度高、快速、自動化、可定量、可降低人為誤差、可用于乙肝病毒感染的動態監測等優勢，被廣泛應用于臨床，日漸成為主流的HBsAb 檢測方法[2-4]。由于不同測試系統特別是當測試系統量值溯源不同時，檢測結果的差異可能影響對患者免疫狀態的評估結果。因此，本研究比較2 種國產化學發光測試系統間結果的一致性和統計學關系，并與臨床使用廣泛的測試系統A 的結果進行一致性評價，分析系統間的一致性和互換性。

1 材料和方法

1.1 測試樣本

采用乙肝五項全陰性血漿的HBsAb 國家標準品1 號樣本（中國食品藥品檢定研究院，批號：300015-201802，濃度：160 mIU/ml），按比例稀釋為100、50、30、20、12、6 mIU/ml。使用全自動化學發光免疫分析儀（雅培公司，型號：Alinityi）及配套HBsAb 檢測試劑盒（Anti-HBs Reagent Kit）對6 個樣本進行測試，均值分別為108.12、55.33、35.79、25.70、16.45、9.12 mIU/ml。

1.2 測試系統

測試系統1：采用全自動化學發光免疫分析儀（深圳市新產業生物醫學工程股份有限公司，型號：Maglumi 4000 Plus）及配套的HBsAb 測定試劑盒（化學發光免疫分析法，批號：12422011）測定樣品濃度。

測試系統2：采用全自動化學發光免疫分析儀（深圳邁瑞生物醫療電子股份有限公司，型號：CL 2000i）及配套的HBsAb（Anti-HBs）測定試劑盒（化學發光免疫分析法，批號：2022010111）和HBsAb 校準品（批號：2021110100）測定樣品濃度。

測試系統A：采用型號為Alinityi 的全自動化學發光免疫分析儀（雅培公司，型號：Alinityi）及配套HBsAb 檢測試劑盒（Anti-HBs Reagent Kit）測定樣品濃度。

1.3 樣品檢測

試驗前調試儀器，確定儀器狀態良好，設置儀器參數信息。測試系統裝載試劑后進行定標，對樣品進行上機測試。測試系統1、測試系統2 分別對每份樣品平行檢測2 次。

1.4 統計學處理

對2 個測試系統采用配對t檢驗進行統計學分析和相關性分析。P<0.05 為差異有統計學意義。將測試系統1 和測試系統2 的結果分別與測試系統A 的結果采用加權最小二乘法進行直線擬合，得到線性回歸方程，分別計算測試值均值（Y）、標準差（SD）、權重（W），根據權重公式計算斜率（a）和截距（b），將測試系統A 的結果代入回歸方程Y=aX+b計算預測值、絕對線性偏差和相對線性偏差，上述代入測試系統的結果與預測值計算絕對線性偏差和相對線性偏差。

2 結果

2.1 測試系統結果的統計學分析和相關性分析

測試系統1 和測試系統2 的結果均值和信號值均值作為變量，測試系統1 和測試系統2 間HBsAb 定量檢測結果比較，差異有統計學意義[υ=8，ABS（t）=2.535，t0.05（8）=2.306，P<0.05]。兩直線斜率比較，差異有統計意義（|t|≥t0.05（8），P≤0.05），不平行，見表1。對測試系統1 和測試系統2 的結果進行線性二次回歸擬合，相關系數r=0.99341，擬合曲線圖見圖1。

圖1 兩測試系統結果的線性二次回歸擬合曲線

表1 測試系統結果的統計學分析和相關性分析

2.2 測試系統的一致性和相關性分析

以測試系統A 的結果為自變量，以測試系統1和測試系統2 的結果為因變量進行線性擬合，測試系統1 與測試系統A 的相關系數r=0.99814，絕對線性偏差為-8.70～9.24 mIU/ml，相對線性偏差為-7.53%～6.09%；測試系統2 與測試系統A的相關系數r=0.98821，絕對線性偏差為-3.46～1.00 mIU/ml，相對線性偏差為-18.16%～10.03%，測試系統1、測試系統2 與測試系統A 不同濃度點間的結果一致性良好，見表2～3。

表2 測試系統1 與測試系統A 的線性擬合計算結果

表3 測試系統2 與測試系統A 的線性擬合計算結果

3 討論

感染乙型肝炎病毒是慢性肝炎的主要病因，感染者可進展為肝硬化、肝衰竭，甚至可引發肝癌[5-6]。HBsAg 作為乙型肝炎病毒標志物之一，是檢測乙型肝炎病毒的常用指標，可準確反映人體的免疫狀態和乙型肝炎病毒的含量。乙型肝炎病毒感染的1～2 個月，在感染者血清中會出現HBsAg，當HBeAg 結果呈陽性時，提示受檢者患有乙型肝炎，若患者HBeAg 結果長期呈陽性，乙型肝炎轉變為慢性肝炎的風險增加，并提示病毒復制活躍、傳染性強，因此感染者需定期監測HBeAg 水平[7-8]。目前，臨床主要采用酶免疫法和化學發光法檢測HBeAg 水平。由于化學發光法是對體系化學發光強度進行檢測，受化學反應過程均勻性和完整性影響，結果存在一定誤差，導致檢測可能不準確，但誤差不可避免，因此在變系數模型的基礎上再考慮協變量存在測量誤差的問題，使估計結果更具有參考性[9]。

本研究結果發現，測試系統1 和測試系統2間HBsAb 定量檢測結果比較，差異有統計學意義；測試系統1 和測試系統2 結果的相關系數r=0.99341，提示在整個線性區間內具良好相關性。表明配對樣本t檢驗對隨機誤差檢出不敏感，對系統誤差檢出敏感，對濃度集中組數據間差異有統計學意義的結果存在假陽性，不建議單獨使用[10]。故本研究采用配對樣本t檢驗，組內相關系數，線性回歸模型對數據進行綜合評價，以期得到更準確的結果。統計數據分析中首選模型之一即為經典的線性回歸模型，此模型的估計和推斷體系較為系統。本研究選擇測試系統A 結果作為參比值，結果顯示，測試系統1 與測試系統A 的相關系數r=0.99814，絕對線性偏差為-8.70～9.24 mIU/ml，相對線性偏差為-7.53%～6.09%；測試系統2 與測試系統A 的相關系數r=0.98821，絕對線性偏差為-3.46～1.00 mIU/ml，相對線性偏差為-18.16%～10.03%，測試系統1 和測試系統2 的結果與測試系統A 結果間的相關系數r均大于0.95，說明測試系統1 與測試系統A、測試系統2 與測試系統A 均具有良好的相關性。絕對線性誤差均在臨界值時分別為-2.11、0.11 mIU/ml，在參考區間的范圍中HBsAb 的結果100%落在正常參考范圍內。結果陰、陽性定性判斷均一致，結果總體一致性較為良好。因不同測試系統的量值溯源性不完全一致，故在線性回歸分析中存在一定偏差，在實際臨床應用中此類偏差對臨床判斷影響不大。需要特別關注的是，臨界值樣本檢測難度較大，但本研究中定性結果均能達到一致性判定。測試系統A 為雅培化學發光測試系統，一直是歐洲肝病學會、美國肝病學會及亞太肝病學會指南明確提出并認可的測試系統[11-12]，本研究所用的兩組國產化學發光法測試系統結果與雅培化學發光測試系統的線性相關性良好，定量的濃度值差值在可接受范圍內，包括臨界值樣本在內的系列濃度樣本結果陰、陽性判定均達到一致，故可認為2 種國產化學發光法測試系統與被歐洲肝病學會、美國肝病學會及亞太肝病學會指南明確提出并認可的測試系統的結果有較好的一致性。

綜上所述，2種國產測試系統的結果具有良好的可比性，與雅培化學發光測試系統的結果一致性較好，均可用于HBsAb 檢測，其定性判斷結果均能達到一致，臨床可根據實際選擇合適的測試系統。