不同處方扶正辟邪顆粒藥效學初探*

任桂林，杜仕靜，譚正懷，任 維，3，羅 群，蒲清榮，熊靜悅，畢 濤，楊露銀，楊思進，3△

（1. 西南醫科大學附屬中醫醫院，四川 瀘州 646000； 2. 四川省中醫藥科學院，四川 成都 610041； 3. 西南醫科大學中西醫結合研究所，四川 瀘州 646000）

新型冠狀病毒（簡稱新冠病毒）感染（舊稱新冠肺炎）為急性呼吸道傳染病，傳染性強，而中醫藥對其有良好的預防和治療作用［1-2］。該病屬中醫“疫毒”范疇，病性為濕毒，扶正辟邪顆粒（新冠0 號）是根據《四川省新型冠狀病毒感染的肺炎中醫藥防控技術指南》中針對體弱人群研發的預防處方，用于“風溫夾濕，正氣不足”的疫病或普通易感人群［3-5］。為進一步將該方研制為新藥，且考慮到該方中薄荷、荊芥、廣藿香、連翹均含有揮發油，本研究中比較了含與不含揮發油制劑樣品的急性毒性和部分藥效學作用，以期找到使制劑效果更佳的處方工藝。現報道如下。

1 儀器、試藥與動物

1.1 儀器

Milli-Q Direct8超純水系統（美國Millipore 公司）；LQ-C3002 型及LQ-C10002 型電子天平（上海瑤新電子科技有限公司，精度均為0.01 g）；ME204/02 型電子天平（梅特勒-托利多儀器＜上海＞有限公司，精度為0.1 mg）；MC - 347 型電子體溫計（歐姆龍＜大連＞有限公司）。

1.2 試藥

醋酸潑尼松片（浙江仙琚制藥股份有限公司，批號為LA21250）；注射用胸腺法新（海南雙成藥業股份有限公司，批號為22030507）；阿司匹林腸溶片（Bayer Healthcare Manufacturing S. r. l，批號為BJ46000）；羧甲基纖維素鈉（CMC - Na，批號為2014102701），二甲苯（批號為2014082301），均購自成都市科龍化工試劑廠；食用植物調和油（益海嘉里食品營銷有限公司，批號為20210905）；環磷酰胺（江蘇恒瑞醫藥股份有限公司，批號為20112425）；丙酮（成都長聯化工試劑有限公司，批號為20200610）；2，4-二硝基氟苯（上海麥克林生化科技有限公司，批號為C14025929）；薇婷絲滑沁香脫毛膏（利潔時家化＜中國＞有限公司，批號為2024070401X）；脂多糖（LPS，美國Sigma 公司，批號為0000135218）；0.9 %氯化鈉注射液（河北天成藥業股份有限公司，批號為1S210505101）。

1.3 動物

KM 小鼠（體質量18～22 g），SD 大鼠（體質量180～220 g），均為SPF 級，雌雄兼有，分別由四川省中醫藥科學院實驗動物中心和成都恩斯維爾生物科技有限公司提供，實驗動物生產許可證號分別為SCXK（川）2018-19和SCXK（湘）2019-0004；實驗動物使用許可證號分別為SYXK（川）2018-100和SCXK（湘）2019-0004。分籠飼養，自由攝食、飲水，定期更換墊料，室溫22～25 ℃，相對濕度（50±5）%，12 h明暗交替。

2 方法與結果

2.1 樣品制備

按處方量稱取連翹、薄荷、廣藿香、荊芥4 味飲片，加2 倍量的水，浸泡0.5 h，95～100 ℃（加熱蒸汽壓力0～0.1 MPa，下同）提取4.5 h，收集揮發油。藥渣與處方中其余6 味藥材飲片加10 倍量的水，浸泡1.0 h，95～100 ℃、提取0.5 h，煎煮3 次；合并煎煮液置濃縮器中，減壓（溫度＜80 ℃，真空度- 0.04～- 0.08 MPa，蒸汽壓力＜0.1 MPa）濃縮，濃縮液相對密度達1.13～1.16（約25 ℃）時停止操作，得浸膏。將浸膏以真空干燥機干燥，真空度（- 0.04 ± 0.02）MPa，溫度70～80 ℃，烘干后粉碎。浸膏粉末均分為2份，1份作為樣品A；1份加入相應體積的揮發油，混勻，作為樣品B。

2.2 急性毒性實驗

經預實驗發現，一次灌胃給藥難以測出半數致死量（LD50），故改為測試最大耐受量。取小鼠60 只，雌雄各半，適應性喂養1 d后禁食不禁飲12 h，按體質量隨機分為對照1組（等體積0.5%CMC-Na溶液）及樣品A1組（217.2 g/ kg，以原生藥計）及樣品B1組（217.2 g/ kg，以原生藥計），以最大濃度、最大體積分別灌胃相應藥物或0.5%CMC-Na 溶液2 次（間隔4 h），觀察小鼠給藥后14 d 內的中毒反應及死亡情況，如有死亡，解剖并肉眼觀察其主要臟器，肉眼可見異常者進行顯微觀察。同時取各組小鼠心、肝、脾、肺、腎，稱定濕重，計算臟器系數。

結果，對照1 組無死亡小鼠，樣品A1組小鼠給藥第2 天死亡3 只，其中雌鼠2 只，雄鼠1 只。樣品B1組小鼠給藥當天死亡1只（雄鼠）；給藥第2天死亡8只，其中雌鼠6只，雄鼠2只；給藥第3天死亡11只，其中雌鼠1只，雄鼠10 只。給藥第2 天，樣品A1組、樣品B1組小鼠糞便呈黑色黏稠狀，之后恢復正常。肉眼觀察各死亡鼠主要臟器無明顯異常。樣品A1組、樣品B1組存活小鼠體質量均自然增大，心、肝、脾、肺、腎的臟器系數（體質量、臟器質量均以g計）。與對照1組比較，差異均無統計學意義（P＞0.05），詳見表1、表2。

表1 各組小鼠體質量變化比較（，g）Tab.1 Comparison of body mass of mice in each group（，g）

表1 各組小鼠體質量變化比較（，g）Tab.1 Comparison of body mass of mice in each group（，g）

組別對照1組（n=20）樣品A1組（n=17）樣品B1組（n=9）給藥后7 d 27.25±2.32 26.59±2.67 27.51±1.11給藥前16.93±1.00 17.03±1.06 17.14±1.12給藥后14 d 32.21±3.90 31.73±3.78 33.18±2.42

表2 各組小鼠臟器系數比較（）Tab.2 Comparison of organ coefficients of mice in each group（）

表2 各組小鼠臟器系數比較（）Tab.2 Comparison of organ coefficients of mice in each group（）

組別對照1組（n=20）樣品A1組（n=17）樣品B1組（n=9）心肝脾肺腎0.50±0.05 0.48±0.06 0.50±0.07 6.41±0.80 5.93±0.60 6.04±0.60 0.47±0.08 0.48±0.13 0.52±0.11 0.62±0.06 0.60±0.08 0.61±0.07 1.42±0.20 1.41±0.20 1.47±0.20

2.3 抗炎實驗

取雄性小鼠，適應性喂養后按體質量隨機分為模型1 組（等體積0.5 % CMC - Na 溶液），醋酸潑尼松組（10 mg / kg），樣品A 低、高劑量組（樣品A2組、A3組；10 g/kg、30 g/kg，以原生藥計）及樣品B 低、高劑量組（樣品B2組、B3組，用量同樣品A2、A3組），各10 只。各組每日灌胃給藥或0.5% CMC - Na 溶液2 次，連續5 次。末次給藥后50 min將二甲苯50μL 均勻涂于小鼠左耳，致炎后30 min 處死小鼠，沿耳郭基線剪下雙耳，用直徑8 mm 打孔器分別在其左、右耳同一位置打下耳片并稱定質量，以后者與前者的差值為耳腫脹度［6-8］。

結果樣品A2組和樣品B2組小鼠耳腫脹度與模型1組比較，差異均有統計學意義（P＜0.05），詳見表3。

表3 抗炎實驗各組小鼠耳腫脹度比較（，n=10）Tab.3 Comparison of ear swelling degree of mice in each group in the anti - inflammation test（，n = 10）

表3 抗炎實驗各組小鼠耳腫脹度比較（，n=10）Tab.3 Comparison of ear swelling degree of mice in each group in the anti - inflammation test（，n = 10）

注：與模型1組比較，*P ＜0.05，**P ＜0.01。Note：Compared with those in the model group one，*P ＜ 0.05，**P ＜0.01.

耳腫脹度（mg）12.00±5.75 5.00±2.91**5.80±5.03*7.60±4.27 6.30±4.52*8.30±4.97組別模型1組醋酸潑尼松組樣品A2組樣品A3組樣品B2組樣品B3組劑量（g/kg）0.01 10.0 30.0 10.0 30.0

2.4 免疫調節實驗

取雄性小鼠，適應性喂養后按體質量隨機分為對照2 組（等體積0.5% CMC - Na 溶液），模型2 組（等體積0.5%CMC-Na 溶液），胸腺法新組，樣品A 低、高劑量組（樣品A4組、A5組，劑量同2.3項下）及樣品B低、高劑量組（樣品B4組、B5組，劑量同2.3項下）。胸腺法新組小鼠于第1，3，5，7，9 天皮下注射10 mg/ kg，其余各組小鼠每天上午灌胃相應藥物或0.5% CMC - Na 溶液，連續10 d。給藥同時，除對照2 組外各組小鼠均于第1，3，5，7，9 天腹腔注射環磷酰胺40 mg/kg 以復制免疫力低下小鼠模型。在給藥后第3 天各組小鼠腹部脫毛（面積1 cm×2 cm），次日在脫毛處均勻涂1%2，4-二硝基氟苯丙酮-麻油（1∶1、V/V，下同）50μL，次日重復涂布1次。第10天末次給藥后50 min各組小鼠左耳涂1%2，4-二硝基氟苯丙酮-麻油10μL，24 h 后處死小鼠，同2.3項下方法計算耳腫脹度［9-10］。

結果見表4。可見，與對照2 組比較，模型2 組小鼠耳腫脹度顯著降低（P＜0.01）；與模型2組比較，各用藥組小鼠耳腫脹度均僅有升高趨勢，但差異均無統計學意義（P＞0.05）。

表4 調節免疫實驗各組小鼠耳腫脹度比較（）Tab.4 Comparison of ear swelling degree of mice in each group in the immunomodulatory test（）

表4 調節免疫實驗各組小鼠耳腫脹度比較（）Tab.4 Comparison of ear swelling degree of mice in each group in the immunomodulatory test（）

注：與對照2組比較，#P ＜0.05，##P ＜0.01。Note：Compared with those in the control group two，#P ＜ 0.05，##P ＜0.01.

耳腫脹度（mg）5.10±4.15 1.18±0.63##2.60±2.37 1.50±1.43 1.60±1.27 1.30±1.57 1.22±0.97組別對照2組（n=10）模型2組（n=11）胸腺法新組（n=10）樣品A4組（n=10）樣品A5組（n=10）樣品B4組（n=10）樣品B5組（n=9）劑量（g/kg）0.01 10.0 30.0 10.0 30.0

2.5 解熱實驗

取雄性大鼠，適應性喂養后，每日上午、下午對其進行適應性肛溫測量。測量前用液體石蠟潤滑電子體溫計探頭，插入大鼠肛門2 cm，連續2 d，篩選出體溫在36.5～38.2 ℃范圍內且4 次溫度變化不超過0.5 ℃的大鼠。將篩選出的大鼠按體溫分為對照3 組（等體積0.5%CMC-Na溶液），模型3組（等體積0.5%CMC-Na溶液），阿司匹林組（100 mg/ kg），樣品A 低、高劑量組（樣品A6組、A7組，4.0 g/ kg、12.0 g/ kg，以原生藥計）及樣品B 低、高劑量組（樣品B6、B7組，用量同樣品A6、A7組），各10只。各組每日灌胃相應藥物或0.5%CMC-Na溶液2 次，連續5 次。末次給藥后30 min，各給藥組大鼠均腹腔注射LPS 50 μg/ kg，對照3 組同法予等體積0.9%氯化鈉注射液。于注射LPS 后0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，6.0 h時測量大鼠肛溫，計算與基礎體溫（末次給藥后30 min且未注射LPS時）的差值ΔT［11-13］。

結果見表5。可見，模型3組大鼠腹腔注射LPS后肛溫逐漸升高，且從給藥后2.0 h 起ΔT與對照組比較，差異有統計學意義（P＜0.01）；與模型3 組比較，樣品A6組大鼠于腹腔注射LPS 后3.0 h，樣品B6組大鼠0.5，1.0，3.0 h，樣品B7組大鼠1 h 的ΔT，差異均有統計學意義（P＜0.05）。

表5 各組大鼠肛溫變化值比較（，℃，n=10）Tab.5 Comparison of changes in anal temperature of rats in each group（，℃，n = 10）

表5 各組大鼠肛溫變化值比較（，℃，n=10）Tab.5 Comparison of changes in anal temperature of rats in each group（，℃，n = 10）

注：與對照3組比較，#P ＜0.05，##P ＜0.01；與模型3組比較，*P ＜0.05，**P ＜0.01。Note：Compared with those in the control group three，#P ＜ 0.05，##P ＜ 0.01. Compared with those in the model group three，*P ＜ 0.05，**P ＜0.01.

6.0 h-0.50±0.31 0.58±0.55##0.85±0.36 0.59±0.79 0.52±0.56 0.74±0.60 1.01±0.64組別對照3組模型3組阿司匹林組樣品A6組樣品A7組樣品B6組樣品B7組劑量（g/kg）ΔT 0.1 4.0 12.0 4.0 12.0基礎肛溫37.18±0.36 37.18±0.31 37.18±0.28 37.19±0.32 37.19±0.25 37.19±0.33 37.19±0.37 0.5 h 0.29±0.32 0.15±0.28 0.17±0.49 0.28±0.60 0.30±0.57 0.51±0.43*0.12±0.53 1.0 h 0.36±0.49 0.65±0.42 0.39±0.52 0.34±0.69 0.28±0.39-0.07±0.48**0.10±0.63*2.0 h-0.18±0.33 0.56±0.38##0.58±0.45 0.84±0.71 0.50±0.53 0.46±0.45 0.58±0.57 3.0 h 0.09±0.36 0.96±0.47##0.52±0.42*0.50±0.49*0.58±0.35 0.27±0.45**0.54±0.49 4.0 h-0.32±0.49 0.44±0.41##0.76±0.66 0.72±0.68 0.76±0.27 0.53±0.39 0.39±0.56

3 討論

中醫“治未病”除要求做好防護措施避免疾病邪氣傷身，也可在提高免疫力、提升正氣方面進行預防。“正氣虧虛，邪毒侵擾”是新冠病毒感染的主要病機，有研究分析了北京、天津等地13 項含中藥處方的中醫藥預防新冠病毒感染的方案，發現這些方案中多用黃芪、玉屏風散等中藥和方劑補益“正氣”［14-16］。扶正辟邪顆粒組方中，黃芪重補氣，補脾肺之氣，固表實衛；山銀花、連翹辛涼輕宣，有透泄散邪，清熱解毒之效；貫眾為中醫藥常用預防藥物，增強解毒化濁之功。全方補中寓散，散不傷正，補不留邪；溫中有清，溫不助熱，清不傷陽，具有益氣解毒、祛風化濁、開通玄府之功，用于“風溫夾濕，正氣不足”的疫病或普通易感人群。

薄荷揮發油具有抗炎、鎮痛、抑菌等生理活性。研究證明，薄荷揮發油對二甲苯致小鼠耳腫脹和雞蛋清致大鼠足腫脹急性炎癥模型具有明顯的抗炎作用，可以顯著降低炎性模型大鼠血清中的前列腺素E2（PEG2）與一氧化氮（NO）的含量，降低血液中丙二醛堆積，達到抑制炎癥的作用［17］。連翹揮發油具有解熱、抗炎、抑菌、抗病毒等藥理活性，可顯著抑制脂多糖和干酵母所致模型動物發熱，降低角叉菜膠和雞蛋清誘導的大鼠足腫脹［18］。荊芥揮發油具有抗病毒、抗炎、鎮痛、抗菌等藥理作用［19］。廣藿香油不僅對金黃色葡萄球菌、幽門螺桿菌、大腸埃希菌、痢疾桿菌等有抑制作用，同時對季節性流感病毒、甲型流感病毒、柯薩奇病毒等均有明顯的抑制作用［20］。

本研究中，通過急性毒性研究發現，樣品A和樣品B給藥后，小鼠主要臟器無明顯異常，心、肝、脾、肺、腎等臟器系數均無明顯改變，但樣品A的急性毒性作用略小于樣品B。對二甲苯致小鼠耳腫脹的實驗結果表明，樣品A 10.0 g和樣品B 10.0 g均能顯著抑制二甲苯致小鼠的耳腫脹，具有相似的抗炎作用。各組均為低劑量作用強于高劑量，究其原因可能為高劑量揮發油刺激性過大，促進了炎性因子的產生。對免疫力低下模型小鼠的研究發現，樣品A和B均有增強小鼠免疫力的趨勢。對LPS致大鼠發熱實驗表明，樣品A和樣品B均有不同程度的解熱作用，且樣品B的解熱作用稍強。

綜上所述，扶正避邪顆粒具有抗炎、調節免疫力、解熱等藥效學作用。與單用浸膏比較，加入揮發油的處方藥效更強。