瓜蔞薤白湯正丁醇部位對(duì)Ⅱ型心腎綜合征大鼠內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的調(diào)控作用

劉陽(yáng)陽(yáng)，張?jiān)圃疲顫崳∮婪?，彭蘊(yùn)茹

（1. 南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，江蘇 南京 210028； 2. 江蘇省中醫(yī)藥研究院，江蘇 南京 210028）

心血管相關(guān)疾病一直是臨床診治的熱點(diǎn)和難點(diǎn)，約2/3的心衰患者同時(shí)患有慢性腎衰疾病［1］，最終發(fā)展為終末期的纖維化狀態(tài)，這屬于臨床上心腎綜合征的特征之一。Ⅱ型心腎綜合征（type Ⅱ cardiorenal syndrome，CRS）是慢性心腎綜合征，由于慢性心衰而導(dǎo)致慢性腎病的發(fā)生和發(fā)展，心腎之間互相加重、惡性循環(huán)，約40%的慢性腎臟病患者因心血管疾病而死亡，其患病率的持續(xù)攀升嚴(yán)重威脅著國(guó)民健康，桎梏著我國(guó)心血管疾病的防治進(jìn)程。與高患病率相對(duì)的是貧乏的治療手段和較差的預(yù)后。治療Ⅱ型CRS 的常用藥物為利尿劑和血管擴(kuò)張藥物，但在腎功能不全合并心力衰竭的患者中其有效性和安全性仍需大量臨床研究證實(shí)。

中醫(yī)從整體治療觀出發(fā)，對(duì)Ⅱ型CRS 有更好的療效。瓜蔞薤白湯（Gualou Xiebai Decoction，GXD）出自《金匱要略》，由瓜蔞、薤白和白酒三味中藥組成，具有通陽(yáng)散結(jié)、行氣祛痰之功效。課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，瓜蔞薤白湯通過(guò)調(diào)控Ⅱ型CRS 心、腎組織的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化，保護(hù)心臟和腎臟，抑制纖維化。但是瓜蔞薤白湯保護(hù)心、腎的具體分子機(jī)制還不明確，因此，本研究通過(guò)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激通路來(lái)探討瓜蔞薤白湯干預(yù)CRS 的內(nèi)在分子機(jī)制和具體作用靶點(diǎn)，為今后藥物研發(fā)奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

SPF 級(jí)健康雄性Wistar 大鼠，由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司提供，體質(zhì)量250～300 g，許可證號(hào)：SCXK（滬）2017－0005。大鼠飼養(yǎng)于江蘇省中醫(yī)藥研究院動(dòng)物中心［SYXK（蘇）2021－0025］，恒溫20～25 ℃，恒濕50%～70%，明暗交替12 h，本研究所有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)已獲得江蘇省中醫(yī)藥研究院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

瓜蔞皮（TrichosantheskirilowiiMaxim）、薤白（Allium macrostemon）購(gòu)自江蘇華洪藥業(yè)科技有限公司，按1∶1用50%乙醇提取、正丁醇萃取得到瓜蔞薤白湯正丁醇部位。

XBP－1s、ATF－4、phospho－eIF2α 抗體（貨號(hào)：40435、11815、3398，Cell Signaling TECHNOLOGY 公司）；CHOP 抗體（批號(hào)：15204－1－AP，Proteintech 公司），ATF－6、GRP78 抗體（貨號(hào)：ab37149、ab21685，Abcam 公司）；NT－proBNP ELISA 試劑盒（E－ELR3023，武漢伊萊瑞特生物科技有限公司）；Cys－C ELISA試劑盒（JL11506－96T，江萊生物）。

電泳儀（PowerPac Basic，Bio－Rad）；熒光PCR（Quant-Studio DX，Thermo）；凝膠成像系統(tǒng)（5200，Tanon）；小動(dòng)物呼吸機(jī)（ALC－V8S，上海奧爾科特生物科技有限公司）；透射電鏡（HT7700，日立）。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物造模及分組

按文獻(xiàn)［2］方法，采用10%水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠，仰臥位固定，氣管插管，小動(dòng)物呼吸機(jī)輔助呼吸。沿胸骨左緣第3、4 肋間隙切開(kāi)皮膚，鈍性分離肌肉，暴露心臟，距離主動(dòng)脈約2/3 位置，用6－0 線結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支，之后逐層縫合胸壁。假手術(shù)組大鼠除不結(jié)扎外，其余操作同造模組。

術(shù)后72 h 將造模大鼠24 只隨機(jī)分為模型組和瓜蔞薤白湯高、低劑量組，其中瓜蔞薤白湯高、低劑量組分別給予灌胃瓜蔞薤白湯正丁醇部位12、6 g/kg，給藥容積為10 mL/kg，假手術(shù)組（n=8）和模型組給予等體積生理鹽水，連續(xù)給藥10周。

1.2.2 生化指標(biāo)檢測(cè)

末次給藥后1 h，麻醉動(dòng)物后腹主動(dòng)脈采血，離心分離血清后 -80 ℃保存。按試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，ELISA法檢測(cè)血清中NT－proBNP、Cys－C的含量。

1.2.3 組織病理學(xué)檢測(cè)

取血后，動(dòng)物開(kāi)胸、開(kāi)腹，取出心臟、腎臟組織，置于4%多聚甲醛固定，按標(biāo)準(zhǔn)步驟對(duì)心、腎組織切片進(jìn)行HE和Masson染色，光學(xué)顯微鏡觀察并照相。

1.2.4 超微病理學(xué)檢測(cè)

取2 mm × 2 mm × 1 mm 大小心臟和腎臟組織塊，冰生理鹽水沖洗后立即投入電鏡固定液中室溫固定2 h，再轉(zhuǎn)移至4 ℃保存。制成電鏡觀察標(biāo)本，利用透射電鏡觀察內(nèi)質(zhì)網(wǎng)超微結(jié)構(gòu)，并進(jìn)行圖像采集。

1.2.5 RT－PCR 檢測(cè)collagen Ⅰ、collagen ⅢmRNA表達(dá)

稱取50～80 mg 凍存心臟或腎臟組織于EP 管中，加入Trizol 研磨，氯仿抽提，異丙醇沉淀，采用HiScriptⅢ RT SuperMix for qPCR（ + gDNA wiper）試劑盒逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，再按照Taq Pro Universal SYBR qPCR Master Mix 試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行PCR 擴(kuò)增。以GAPDH作為內(nèi)參，采用2-ΔΔCt法計(jì)算出目的基因mRNA 的相對(duì)表達(dá)量。

目的基因collagen Ⅰ上游引物為5'－GCTGCATA?CACAATGGCCTA－3'，下游引物為5'－CTTCTGGG?CAGAAAGGACAG－3'，預(yù)計(jì)擴(kuò)增片段227 bp；collagenⅢ上游引物為5'－CAAGTCTGGAGTCGGAGGAA－3'，下游引物為5'－ATGGACCAATAGCACCAGGA-3'，預(yù)計(jì)擴(kuò)增片段230 bp；GAPDH上游引物為5'－GATCGTGG?AAGGGCTAATGA－3'，下游引物為5'－GAGCTCTG?GGATGACTTTGC－3'，預(yù)計(jì)擴(kuò)增片段234 bp。

1.2.6 Western blot檢測(cè)ERS相關(guān)蛋白的表達(dá)

取20 mg凍存心臟或腎臟組織，RIPA 裂解30 min，BCA 法測(cè)定蛋白濃度，100 ℃水浴變性10 min，每孔加入等量蛋白樣品（10～30 μg），采用SDS－PAGE 凝膠電泳，轉(zhuǎn)膜，封閉，分別加入GRP78、CHOP、p－eIF2α、ATF－4、ATF－6、XBP－1s 抗體4 ℃過(guò)夜，室溫孵育二抗1 h，ECL 顯影，凝膠成像系統(tǒng)中成像并分析結(jié)果，以GAPDH為內(nèi)參，檢測(cè)目的蛋白表達(dá)情況。

1.2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用GraphPad Prism 8 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用單因素方差分析（One－way ANOVA），結(jié)果以均數(shù) ±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示。P＜ 0.05 為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠血清中NT－proBNP、Cys－C水平比較

造模10 周后，模型組大鼠血清中NT－proBNP、Cys－C 的水平明顯升高，與假手術(shù)組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜ 0.01）；連續(xù)給藥10 周，與模型組比較，瓜蔞薤白湯高、低劑量組NT－proBNP、Cys－C 含量明顯降低（P＜ 0.01）。提示慢性心衰大鼠心臟、腎臟功能發(fā)生明顯損害，瓜蔞薤白湯可明顯保護(hù)由慢性心衰導(dǎo)致的Ⅱ型CRS 大鼠的心、腎功能。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠血清NT－proBNP、Cys－C含量比較（±s）

表1 各組大鼠血清NT－proBNP、Cys－C含量比較（±s）

注：與假手術(shù)組比較，##P ＜ 0.01；與模型組比較，**P ＜ 0.01。

組別假手術(shù)組模型組瓜蔞薤白湯低劑量組瓜蔞薤白湯高劑量組Cys－C/（ng/mL）1.09 ± 0.15 2.31 ± 0.24##1.88 ± 0.27**1.77 ± 0.24**n8 8 8 8 NT－proBNP/（pg/mL）963.93 ± 105.00 2 789.32 ± 247.65##2 340.99 ± 243.83**2 191.51 ± 108.94**

2.2 各組大鼠心、腎組織病理變化情況比較

HE 和Masson 染色結(jié)果顯示，假手術(shù)組的心肌細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰，間隙均勻，排列規(guī)則，細(xì)胞核呈橢圓形或扁長(zhǎng)形，大小形態(tài)正常；模型組的心肌細(xì)胞出現(xiàn)壞死，排列紊亂，胞核不規(guī)則，肌纖維斷裂，有大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)和成纖維細(xì)胞增生，藍(lán)色膠原纖維沉積增多，纖維化程度增強(qiáng)。與模型組比較，瓜蔞薤白湯高、低劑量組心肌纖維排列相對(duì)規(guī)則，細(xì)胞壞死和炎性細(xì)胞浸潤(rùn)有不同程度的改善，膠原纖維沉積減少。

假手術(shù)組的腎小球基底膜完整，大小形態(tài)正常，腎小管結(jié)構(gòu)清晰、排列緊密；模型組大鼠的腎小管擴(kuò)張，腎小球萎縮，腎間質(zhì)中可見(jiàn)廣泛的藍(lán)色膠原沉積。瓜蔞薤白湯高、低劑量組腎小管上皮細(xì)胞脫落減少，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)有所改善，腎間質(zhì)纖維化程度顯著減輕。結(jié)果見(jiàn)圖1、2。

圖1 各組大鼠心臟HE和Masson染色圖（ × 100）

圖2 各組大鼠腎臟HE和Masson染色圖（× 100）

2.3 各組大鼠心臟、腎臟組織內(nèi)質(zhì)網(wǎng)超微結(jié)構(gòu)的比較

心臟、腎臟電鏡觀察發(fā)現(xiàn)，假手術(shù)組細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰，細(xì)胞核基本呈圓形，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)呈軌道樣致密、連貫排列，核糖體附著在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)表面；模型組心、腎組織內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腫脹，斷裂，連貫性破壞，核糖體脫落；與模型組相比，瓜蔞薤白湯高、低劑量組心、腎組織中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)結(jié)構(gòu)基本恢復(fù)正常。表明瓜蔞薤白湯可減輕Ⅱ型CRS 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)損傷，保持內(nèi)質(zhì)網(wǎng)結(jié)構(gòu)的完整性。結(jié)果見(jiàn)圖3。

圖3 各組大鼠心臟、腎臟內(nèi)質(zhì)網(wǎng)結(jié)構(gòu)圖（× 12 000）

2.4 各組大鼠心臟、腎臟Ⅰ、Ⅲ型膠原mRNA 表達(dá)水平比較

采用RT－PCR 法對(duì)Ⅱ型CRS 大鼠Col Ⅰ、Col Ⅲ的表達(dá)情況進(jìn)行檢測(cè)。與假手術(shù)組比較，模型組心臟、腎臟膠原表達(dá)水平顯著增高（P＜ 0.01）；與模型組比較，瓜蔞薤白湯組劑量依賴性地降低了Col Ⅰ、Col Ⅲ的表達(dá)水平（P＜ 0.01）。表明瓜蔞薤白湯對(duì)Ⅱ型CRS中心臟、腎臟的膠原沉積有明顯的改善作用。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 各組大鼠Ⅰ、Ⅲ型膠原mRNA表達(dá)水平比較（±s）

表2 各組大鼠Ⅰ、Ⅲ型膠原mRNA表達(dá)水平比較（±s）

注：與假手術(shù)組比較，##P ＜ 0.01；與模型組比較，**P ＜ 0.01。

心腎組別Col Ⅲ1.023 ± 0.278 9.259 ± 0.488##3.805 ± 0.302**2.554 ± 0.260**n3 3 3 3 Col Ⅰ1.000 ± 0.020 10.750 ± 0.701##2.734 ± 0.040**2.287 ± 0.059**假手術(shù)組模型組瓜蔞薤白湯低劑量組瓜蔞薤白湯高劑量組Col Ⅲ1.002 ± 0.068 13.000 ± 0.371##2.300 ± 0.159**1.789 ± 0.110**Col Ⅰ1.007 ± 0.144 12.290 ± 3.084##5.427 ± 0.845**4.059 ± 1.075**

2.5 各組大鼠心臟、腎臟組織中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激通路相關(guān)蛋白表達(dá)水平比較

Western blot 結(jié)果顯示，與假手術(shù)組比較，模型組心、腎組織中ATF－6、GRP78 BiP、XBP－1s、ATF－4、p－eIF2α、CHOP 等內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激通路相關(guān)蛋白的表達(dá)水平明顯上調(diào)（P＜ 0.01）。與模型組比較，給藥組心、腎組織中ATF－6、GRP78 BiP、XBP－1s、ATF－4、peIF2α、CHOP 等蛋白的表達(dá)水平顯著下調(diào)（P＜ 0.05～0.01）。表明瓜蔞薤白湯對(duì)Ⅱ型心腎綜合征大鼠心、腎組織中的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激通路相關(guān)蛋白有一定的調(diào)控作用，通過(guò)維持內(nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)態(tài)，從而改善心、腎功能。結(jié)果見(jiàn)表3、表4和圖4。

圖4 各組大鼠ERS相關(guān)蛋白表達(dá)圖

表3 各組大鼠心臟ERS相關(guān)蛋白表達(dá)水平比較（±s）

表3 各組大鼠心臟ERS相關(guān)蛋白表達(dá)水平比較（±s）

注：與假手術(shù)組比較，##P ＜ 0.01；與模型組比較，**P ＜ 0.01。

組別假手術(shù)組模型組瓜蔞薤白湯低劑量組瓜蔞薤白湯高劑量組ATF－4 1.000 ± 0.012 2.272 ± 0.025##2.153 ± 0.017 1.066 ± 0.125**n3 3 3 3 GRP78 1.000 ± 0.008 2.253 ± 0.022##2.143 ± 0.013**0.992 ± 0.014**CHOP 1.000 ± 0.012 1.802 ± 0.019##1.462 ± 0.021**1.186 ± 0.002**ATF－6 1.000 ± 0.019 1.977 ± 0.021##1.314 ± 0.023**0.998 ± 0.014**p－eIF2α 1.000 ± 0.013 4.401 ± 0.041##4.430 ± 0.059 3.770 ± 0.022**XPB－1s 1.000 ± 0.030 6.583 ± 0.096##4.849 ± 0.120**1.858 ± 0.030**

表4 各組大鼠腎臟ERS相關(guān)蛋白表達(dá)水平比較（±s）

表4 各組大鼠腎臟ERS相關(guān)蛋白表達(dá)水平比較（±s）

注：與假手術(shù)組比較，##P ＜ 0.01；與模型組比較，**P ＜ 0.01。

組別假手術(shù)組模型組瓜蔞薤白湯低劑量組瓜蔞薤白湯高劑量組ATF－4 1.000 ±0.037 1.654 ± 0.038##1.255 ± 0.007**1.082 ± 0.032**n3 3 3 3 GRP78 1.000 ± 0.009 1.322 ± 0.031##1.351 ± 0.010 1.181 ± 0.015**CHOP 1.000 ± 0.059 2.753 ± 0.079##2.292 ± 0.040**1.852 ± 0.046**ATF－6 1.000 ± 0.022 1.424 ± 0.041##1.261 ± 0.027**1.054 ± 0.024**p－eIF2α 1.000 ± 0.061 2.099 ± 0.041##1.696 ± 0.033**1.171 ± 0.061**XPB－1s 1.000 ± 0.028 2.029 ± 0.051##1.896 ± 0.026 1.701 ± 0.028**

3 討論

瓜蔞薤白湯主治胸痹之癥，包括胸痛徹背、喘息咳唾、短氣等癥狀，現(xiàn)代臨床用于治療冠心病、心絞痛、心肌梗死等心血管疾病。本課題組前期研究表明瓜蔞薤白湯具有抗慢性心衰作用［3-4］，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)其可明顯改善Ⅱ型心腎綜合征大鼠心肌纖維化和腎纖維化程度，保護(hù)心、腎功能，其機(jī)制可能與抑制內(nèi)皮/上皮－間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EndMT/EMT）有關(guān)［5］。本研究在前期研究的基礎(chǔ)上，通過(guò)構(gòu)建心腎綜合征大鼠模型進(jìn)一步探討瓜蔞薤白湯對(duì)Ⅱ型心腎綜合征的影響及其可能的機(jī)制。

NT－proBNP是心力衰竭診斷的重要生物標(biāo)志物，其表達(dá)水平與慢性心力衰竭的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)［6-7］；Cys－C 是反映腎小球?yàn)V過(guò)率的內(nèi)源性標(biāo)志物，腎小球損傷時(shí)即可發(fā)生明顯變化， NT－proBNP 和Cys－C 均升高的患者處于預(yù)后相對(duì)危險(xiǎn)的狀態(tài)，兩者結(jié)合可以作為臨床判斷心力衰竭和腎功能損傷預(yù)后的指標(biāo)［8-10］。本研究結(jié)果表明，瓜蔞薤白湯組NT－proBNP、Cys－C 水平顯著低于Ⅱ型CRS 模型組，表明其對(duì)心臟、腎臟功能有一定的保護(hù)作用，經(jīng)過(guò)治療后，心、腎功能得到了明顯的恢復(fù)。

真核細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)結(jié)構(gòu)是重要的細(xì)胞器，主要有粗面和滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)兩種基本類型。附著有核糖體的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)主要負(fù)責(zé)分泌蛋白質(zhì)和肽類激素的合成，無(wú)核糖體附著的滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)主要負(fù)責(zé)蛋白質(zhì)的運(yùn)輸。當(dāng)機(jī)體處于危險(xiǎn)情況下，則會(huì)啟動(dòng)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)，起初的未折疊蛋白反應(yīng)（unfold protein response，UPR）是為了保護(hù)機(jī)體，長(zhǎng)時(shí)間的UPR 造成不可逆損傷，細(xì)胞穩(wěn)態(tài)難以維持。未折疊蛋白持續(xù)的蓄積，造成蛋白激酶RNA 樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶（protein-kinase RNA－like ER kinase，PERK）、活化轉(zhuǎn)入因子－6（activating transcription factor－6，ATF－6） 及肌醇依賴酶1（inositol requiring 1，IRE1）等與葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78（glucose－regulated protein 78，GRP78）解離，進(jìn)而IRE1－XBP1、PERK－eIF2a、ATF4 下游相關(guān)通路被活化，而GRP78 的水平異常升高，UPR 進(jìn)一步加重，最終以上述三條信號(hào)通路為主激活CHOP，細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)態(tài)失衡，功能紊亂［11-12］。

現(xiàn)已證實(shí)，ERS 在心血管和腎臟疾病發(fā)生過(guò)程中起重要介導(dǎo)作用。目前研究表明ERS 是心肌梗死、心肌肥厚、動(dòng)脈粥樣硬化、心力衰竭、高血壓等心血管疾病發(fā)病的重要細(xì)胞分子機(jī)制，亦是心血管疾病治療的新靶點(diǎn)［13-14］。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激3 條信號(hào)通路途徑均參與誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡，提示ERS 可能與心肌梗死后心力衰竭的心肌細(xì)胞凋亡有關(guān)［15］。ERS 誘導(dǎo)GRP78 促使IRE1－XBP1、PERK－eIF2a、ATF－4通路活化，最終導(dǎo)致心肌細(xì)胞凋亡而發(fā)生心力衰竭，因此，通過(guò)抑制以上蛋白表達(dá)可減輕細(xì)胞凋亡來(lái)治療心力衰竭［16］。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)也可以協(xié)助線粒體進(jìn)行Ca2+的運(yùn)輸，所以內(nèi)質(zhì)網(wǎng)功能異常導(dǎo)致心肌細(xì)胞線粒體功能障礙。大量研究表明內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激參與了腎小管上皮細(xì)胞、腎臟足細(xì)胞以及系膜細(xì)胞的損傷過(guò)程，可能是腎臟疾病的重要機(jī)制之一，腎損傷時(shí)GRP78 及CHOP 蛋白水平顯著增高，過(guò)度的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激通過(guò)激活凋亡通路觸發(fā)細(xì)胞凋亡，進(jìn)一步促進(jìn)腎小球的損傷；內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)的腎小管細(xì)胞凋亡可能是腎間質(zhì)損傷的潛在機(jī)制，通過(guò)上調(diào)腎小管上皮細(xì)胞GRP78 表達(dá)激活Caspase－12 導(dǎo)致細(xì)胞凋亡［17-18］。因此，ERS 作為機(jī)體對(duì)有害刺激應(yīng)答的重要通路在心臟、腎臟疾病進(jìn)展中發(fā)揮重要的調(diào)控作用。本研究電鏡檢查發(fā)現(xiàn)，Ⅱ型CRS模型組心臟、腎臟的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)結(jié)構(gòu)嚴(yán)重破壞，瓜蔞薤白湯對(duì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)結(jié)構(gòu)形態(tài)有顯著改善作用。Western blot 結(jié)果表明，模型組內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激通路上的相關(guān)蛋白ATF－6、GRP78、XBP－1s、ATF－4、peIF2α、CHOP均有明顯的上調(diào)作用，而瓜蔞薤白湯對(duì)以上蛋白均有顯著的下調(diào)作用。結(jié)果提示內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)了Ⅱ型心腎綜合征的心、腎損傷，瓜蔞薤白湯對(duì)心、腎的保護(hù)作用可能是通過(guò)維持內(nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)態(tài)、下調(diào)ERS通路相關(guān)蛋白表達(dá)實(shí)現(xiàn)的。

綜上所述，本研究通過(guò)結(jié)扎冠狀動(dòng)脈前降支復(fù)制Ⅱ型心腎綜合征大鼠模型，發(fā)現(xiàn)瓜蔞薤白湯可能通過(guò)抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激實(shí)現(xiàn)對(duì)心臟、腎臟的保護(hù)作用，下一步本課題組將在細(xì)胞水平運(yùn)用基因敲除技術(shù)對(duì)相關(guān)機(jī)制進(jìn)行詳細(xì)探討。