大柴胡湯加味方對急性水腫型胰腺炎大鼠的治療作用及炎癥因子指標的影響※

賈晶晶，陳戰，郭亞麗，陳玉珍

(1.山西省中醫院，山西太原 030012；2.山西省中西醫結合醫院，山西太原 030012)

急性胰腺炎是常見的腹部急癥之一，具有發病急、病情進展快及治療費用高的特點，部分患者反復發作，給患者造成很大的困擾。根據其病理發展分為急性水腫型胰腺炎和出血壞死型胰腺炎，其中急性水腫型胰腺炎比較常見，其特點為胰腺出現腫脹、充血，胰腺周圍積液，伴有局限性脂肪壞死，臨床以上腹部疼痛、惡心嘔吐、排氣少、便秘等癥狀，實驗室檢查示血、尿淀粉酶水平升高等。隨著人們生活水平的提高，不規律飲食情況普遍，如過食酒漿、肉食等，導致急性胰腺炎發病率逐年升高，高三酰甘油及酒精也成為急性胰腺炎發病的主要誘因。目前，臨床治療該病主要采用禁飲食、胃腸減壓、抑制胰酶分泌、抗感染等常規療法。中醫特色療法(中藥灌腸、芒硝外敷等)對急性胰腺炎也有突出的治療作用[1]。本研究觀察大柴胡湯加味方治療急性胰腺炎的作用機制，為該方的臨床應用提供依據。

1 材料與儀器

1.1 動物 SD 雄性大鼠21只，體質量200～240g，購自中國食品藥品檢定研究院實驗動物資源研究所(批號111251210100417652)。動物在溫度(20±2)℃、濕度(43±5)%的環境下喂養，飼養于山西省中醫院中心實驗室動物房。

1.2 主要試劑及藥物 雨蛙素購自索萊寶；二甲基亞砜購自北京博奧拓達科技有限公司；白細胞介素-6(IL-6)、腫瘤壞死因子α(TNF-α)試劑盒均購自伊萊瑞特生物試劑公司；大柴胡湯加味方組成藥物[大黃10g(后下)，黃芩9g，清半夏9g，白芍12g，牡丹皮10g，柴胡12g，丹參9g，枳實9g，厚樸15g，敗醬草9g，生姜6g]由山西省中醫院提供，先將10味中藥用300mL清水浸泡1h，加水300 mL 繼續煎煮30 min后加入生大黃再煎5 min，將藥液倒出，加水沒過藥渣約1cm繼續煎煮30min，再次將藥液倒出，將2次藥液混勻，濃縮至110mL，制成1000g/L的藥液。

1.3 主要儀器 萬能顯微鏡熒光成像系統(OLYMPUS BX51，門季生物科技有限公司)；SpectraMax M2e多功能酶標儀[美谷分子儀器(上海)有限公司]；電熱恒溫鼓風干燥箱(上海躍進醫療器械廠)；攤片機(湖北泰康醫療設備有限公司)；染色機(賽默飛有限公司)。

2 方法

2.1 急性水腫型胰腺炎大鼠模型制備及分組 取雄性SD 大鼠21只，隨機分為對照組、模型組及治療組，每組7只。各組大鼠自由飲水條件下禁食12h后接受實驗。用雨蛙素腹腔注射復制急性水腫型胰腺炎大鼠模型[2]。具體操作方法如下:將1 mg 雨蛙素用1mL二甲基亞砜溶解，于-20 ℃環境下保存，實驗前取上述溶液用0.9%氯化鈉溶液稀釋成濃度2μg/mL溶液，操作時需放置于冰上保持溫度，按20μg/kg給模型組及治療組大鼠腹腔注射，每小時注射1次，連續注射4次。對照組腹腔注射同等劑量0.9%氯化鈉溶液。治療組及模型組在第1次注射前1h、注射后4h及處死前1h按10g/kg分別給予大柴胡湯加味方、0.9%氯化鈉溶液灌胃，對照組大鼠按照上述時間給予同等次數和劑量的0.9%氯化鈉溶液灌胃。于末次注射后3h用10%水合氯醛(按0.3mL/100g給藥)麻醉大鼠，腹腔動脈穿刺取血4～5 mL，處死大鼠，取胰腺組織，血清標本放置1h，用離心機離心(轉速3000r/min，離心半徑200px)10min，取血清，并于-80 ℃低溫凍存待測。

3 觀察指標及統計學方法

3.1 觀察指標 ①處死大鼠前觀察模型組及治療組大鼠的精神狀態。②組織病理學改變。取3組大鼠胰腺組織，浸泡于10%中性甲醛液中固定，并進行脫水、包埋、切片、蘇木精-伊紅(HE)染色。光學顯微鏡下觀察胰腺組織的病理改變，采用盲法由2位病理專業人員在光鏡下閱片。③處死大鼠后取血清，采用酶聯免疫吸附法檢測血清淀粉酶(AMY)、脂肪酶(LPS)，采用半導體激光流式細胞技術檢測全血白細胞(WBC)水平。以上指標均由山西省中醫院檢驗科測定。④血清IL-6、TNF-α水平。采用酶聯免疫吸附試驗法檢測。

3.2 統計學方法 采用SPSS26.0統計軟件分析數據。計量資料以均數±標準差(±s)表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD法。P＜0.05為差異有統計學意義。

3.3 結果

(1)大鼠精神狀態 與對照組和治療組比較，模型組大鼠外觀觀察可見精神萎靡、少動、蜷縮、呼吸急促，對外界反應遲鈍。與模型組相比，治療組大鼠精神狀態好，自主活動正常，對外界反應靈敏，小便次數增多、色黃，未見排稀便。

(2)組織病理學結果 對照組大鼠胰腺組織結構清晰，胰腺腺泡細胞內無脂肪壞死、間質無水腫、無炎癥細胞浸潤，胰島多為橢圓形，且形態完整。模型組大鼠胰腺葉、小葉間隔增寬，間質水腫明顯，胰島數量減少，可見少許脂肪壞死、少量炎癥細胞。治療組大鼠胰腺葉、小葉間隔擴張及間質水腫較模型組減輕，炎癥細胞浸潤不明顯。見圖1(見正文第125頁)。

圖1 3組大鼠胰腺組織顯微鏡組織病理學結果(×200)

(3)血清AMY、LPS及全血WBC 水平比較 模型組血清AMY、LPS 及全血WBC 水平均高于對照組，差異均有統計學意義(P＜0.05)。治療組血清AMY、LPS及全血WBC水平均低于模型組、對照組，差異均有統計學意義(P＜0.05)。見表1。

表1 3組大鼠血清淀粉酶、脂肪酶及全血白細胞水平比較(±s)

表1 3組大鼠血清淀粉酶、脂肪酶及全血白細胞水平比較(±s)

注:1.AMY，淀粉酶；LPS，脂肪酶；WBC，白細胞。2.與對照組比較，△P＜0.05；與模型組比較，▲P＜0.05。3.模型組、治療組為急性水腫型胰腺炎大鼠。

組別 只數 AMY(U/L) LPS(U/L) WBC(×109/L)對照組 71377.5±56.45 9.11±3.38 7.49±0.85模型組 7 14098.24±525.09△13.07±0.51△治療組 7 11121.44±987.98△▲723.70±43.73△629.50±22.71△▲10.99±0.62△▲

(4)血清IL-6、TNF-α水平比較 模型組血清IL-6、TNF-α水平均高于正常組，差異均有統計學意義(P＜0.05)。治療組血清IL-6、TNF-α水平均低于模型組、對照組，差異均有統計學意義(P＜0.05)。見表2。

表2 3組大鼠血清白細胞介素-6、腫瘤壞死因子α水平比較(pg/mL,±s)

表2 3組大鼠血清白細胞介素-6、腫瘤壞死因子α水平比較(pg/mL,±s)

注:1.IL-6，白細胞介素-6；TNF-α，腫瘤壞死因子α。2.與對照組比較，△P＜0.05；與模型組比較，▲P＜0.05。3.模型組、治療組為急性水腫型胰腺炎大鼠。

組別只數IL-6TNF-α對照組737.57±1.3060.78±4.20模型組751.73±2.60△88.14±2.98△治療組742.88±1.18△▲74.8±5.23△▲

4 討論

急性胰腺炎指因胰酶異常激活對胰腺自身及周圍器官產生消化作用而引起的以胰腺局部炎性反應為主要特征，甚至可導致器官功能障礙的急腹癥。本病的發病機制主要有胰酶激活、炎癥介質活化、胰腺血液循環紊亂、腸道屏障、細胞凋亡等[3]。其中炎癥介質在急性胰腺炎發生、發展中起到很大的作用，IL-6 主要是由單核巨噬細胞分泌的一種炎癥介質，是參與炎癥和免疫反應的一個非常重要的促炎因子，對調節急性胰腺炎的炎性反應起著重要的作用；TNF-α主要由單核巨噬細胞激活后分泌，可調節炎癥、免疫反應，升高TNF濃度，引起胰腺腺泡細胞壞死，還可刺激其他細胞因子釋放，引起炎癥級聯反應[4-5]。有報道稱，IL-6、TNF-α在急性胰腺炎早期就明顯升高，且與胰腺炎的嚴重程度相關[6-7]。促炎因子升高，會使血管壁受損、通透性增加，進而損傷機體的重要器官，導致全身炎性反應[8]。故TNF-α、IL-6水平對急性胰腺炎的早期診斷及預后評估均有重要價值。現代醫學治療急性胰腺炎以內科常規療法為主，主要采用胃腸減壓、灌腸、抑制胰液分泌、抑制胰酶活性、營養支持、抗感染、鎮痛、防治并發癥等綜合對癥支持治療[9]。基于本病治療的復雜性，臨床仍有待繼續尋找治療急性胰腺炎有效的治療方法。

急性胰腺炎歸屬中醫“胃心痛”“結胸”“脾心痛”“腹痛”等范疇。對于本病的病因，不同學者各抒己見，多有膽石、暴飲暴食、蟲積、創傷和情志不舒等病史，多辨為里實熱證[10]。病機演變是各種病因引起中焦氣機不暢，脾胃升降失常，痰濕內停，郁久化熱，濕熱內結，久則血瘀，濕、熱、濁、瘀膠結，阻滯胃腸，從而導致“腑氣不通，不通則痛”[11-13]。其中，腑氣不通為發病的關鍵。臨床醫家多采取通里攻下法治療急性胰腺炎，常用方劑有大承氣湯、大柴胡湯、大陷胸湯、清胰湯等，除了口服湯藥外，還有中藥灌腸、針刺、外敷等外治法[14]。本課題組在大柴胡湯基礎上加牡丹皮、丹參、厚樸、敗醬草，增加通腑泄熱、化瘀解毒的功效。大柴胡湯出自《傷寒雜病論》，是治療少陽陽明合病的方劑，原方組成為柴胡半斤，半夏半斤，大黃2兩，黃芩、芍藥各3兩，枳實4枚，生姜5兩，大棗12枚。方中，柴胡合黃芩可疏肝瀉膽，清少陽經郁熱；大黃、枳實、厚樸配伍，取小承氣湯之意，可行氣通腑，瀉陽明里實；生姜伍半夏可和胃止嘔，且生姜辛散上行，可牽制大黃峻下之力，進而和胃護胃。考慮熱實內結，血脈不通，故加丹參、牡丹皮增強活血清熱作用，且白芍合丹參、大棗可緩急止痛，配大黃以平膽逆之火。諸藥合用，既可解肝膽之郁，又能通陽明之實。筆者在臨床上多用該方治療肝膽郁熱、胃腸壅滯、氣血運行不利所致急性、實性病證。研究表明，大柴胡湯能夠抑制胃酸分泌，松弛Oddi括約肌張力，降低血脂水平，改善毛細血管滲透性，還能促進胃蠕動，減輕腸麻痹，減少IL-6、TNF-α的釋放[15-17]。柴胡、敗醬草、黃芩、大黃具有明顯的抗菌、抗炎作用[18]。

本研究結果表明，大柴胡湯加味方能明顯降低急性水腫型胰腺炎大鼠血清TNF-α、IL-6 及全血WBC水平，從而減少胰腺局部炎性反應，降低血清AMY、LPS水平。通過光鏡下觀察大鼠胰腺組織病理，也證實大柴胡湯加味方對急性水腫型胰腺炎大鼠具有明顯的治療作用，其作用機制主要與減少早期炎癥介質釋放、促進細菌和毒物排泄有關。段會強等[19]認為大柴胡湯能夠改善急性胰腺炎患者的凝血狀態，減少腸道細菌移位，降低炎癥因子的表達。

本課題組從炎癥介質著手，論證大柴胡湯加味方治療急性水腫型胰腺炎的作用機制，為臨床應用大柴胡湯加味方提供了基礎支持。在用藥方面，在大柴胡湯基礎上增加行氣活血的藥物，加強通腑活血的力度，使氣行瘀通，可見大鼠胰腺相關指標及鏡下組織病理學結果得到改善。本研究樣本量小，大柴胡湯加味方的劑量為臨床常用劑量換算所得，尚未進行大柴胡湯加味方更大劑量的實驗研究，后續研究將進一步完善實驗方案，以明確大柴胡湯加味方治療急性水腫型胰腺炎的最佳劑量。