CCCK-18 CTRP-3 miR-340-5p預測重癥高血壓性腦出血患者預后的價值

龐珊珊 姜 瑩 姜 旭

哈爾濱醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150000

高血壓性腦出血是高血壓最嚴重的并發(fā)癥，其會導致患者肢體偏癱、認知障礙等后遺癥，病情持續(xù)惡化會發(fā)生腦水腫［1］。早期識別高血壓性腦出血對改善患者生存狀況具有重要意義［2］。細胞角蛋白18 裂解片段（cytokeratin18，CCCK-18）水平與腦卒中、創(chuàng)傷性腦損傷等不良預后有關［3］。補體C1q腫瘤壞死因子相關蛋白3（complement-C1q/tumor necrosis factor-related protein 3，CTRP-3）參與炎癥反應、細胞凋亡等生理過程［4］。微小核糖核酸（microRNA）340-5p（miR-340-5p）廣泛參與細胞增殖、分化等多種生命活動過程［5］。本研究旨在探討CCCK-18、CTRP-3、miR-340-5p 預測重癥高血壓性腦出血患者預后的價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取哈爾濱醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院2019-10—2021-10 收治的80 例重癥高血壓性腦出血 患 者 為 觀 察 組，男45 例，女35 例；年 齡40～80（53.21±3.41）歲；體重指數(shù)16～26（22.35±2.25）kg/m2；高 血 壓 病 程2～15（8.58±1.33）a；血 腫 體 積15～30（20.87±1.05）mL；合并血脂異常20 例，糖尿病15 例，冠心病10 例。另選取80 例同期健康體檢者為對照組，男42 例，女38 例；年齡40～80（53.42±3.25）歲；體重指數(shù)17～25（22.31±2.20）kg/m2。2 組研究對象性別、年齡、體重指數(shù)對比差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 納入及排除標準納入標準：（1）符合2010美國《成人自發(fā)性腦出血診斷標準》［6］中的診斷標準；（2）年齡在40～80歲者；（3）有明確高血壓史者；（4）就診時發(fā)病時間24 h 以內(nèi)；（5）參與研究前未服用過降壓藥；（6）首次發(fā)病；排除標準：（1）腦血管畸形；（2）合并其他器質(zhì)性病變；（3）入院時呈深度昏迷、雙側(cè)瞳孔散大者；（4）既往有腦血管疾病、腦創(chuàng)傷史、腦卒中病史；（5）血液疾病、動脈瘤、抗凝藥物導致的腦出血；（6）既往有開顱手術史者；（7）惡性腫瘤患者。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準，患者及家屬均知情同意。

1.3 方法

1.3.1 治療方法：重癥高血壓性腦出血患者入院后給予常規(guī)心電監(jiān)護，給予依達拉奉注射液、奧美拉唑注射液、甘露醇注射液等治療。

1.3.2 隨訪結(jié)果：對患者進行3 個月的隨訪，參照改良Rankin量表（modified Rankin scale，mRS）［7］評估預后，mRS 評分在2 分及以下為預后良好組（55 例），2分以上為預后不良組（25例）。

1.3.3 血清CCCK-18、CTRP-3、miR-340-5p 檢測：采集2 組空腹靜脈血5 mL，離心半徑14 cm，3 000 r/min離心5 min 分離血清，置于低溫環(huán)境中保存?zhèn)溆茫褂妹嘎?lián)免疫吸附法檢測血清CCCK-18、CTRP-3水平。另采集2 組空腹靜脈血3 mL，抗凝，分離血清，上層血漿分裝至1 mL 冷凍管，-15 ℃保存?zhèn)溆茫幌?00 μL血漿中加入QIAzol 試劑和等體積100%氯仿，放置3 min，離心15 min，取上層水相300 μL 加入100%乙醇，混勻，12 000 r/min 離心15 s，棄廢液，加入500 μL RPE，離心，棄廢液，換新2 mL 收集管，空轉(zhuǎn)2 min，使用3 μL 的RNease water 溶解RNA。使用逆轉(zhuǎn)錄定量聚合酶鏈反應技術檢測miR-340-5p水平。

1.4 觀察指標和評價標準比較對照組與觀察組血清CCCK-18、CTRP-3、miR-340-5p 水平，比較不同預后患者各項臨床指標水平，Logistic 回歸分析影響重癥高血壓性腦出血患者的預后因素，Person相關系數(shù)分析血清CCCK-18、CTRP-3、miR-340-5p 水平間的相關性，分析CCCK-18、CTRP-3、miR-340-5p 單獨及聯(lián)合檢測對重癥高血壓性腦出血預后的預測價值并編制ROC曲線。

1.5 統(tǒng)計學方法數(shù)據(jù)錄入SPSS 22.0軟件中分析，計數(shù)資料用頻數(shù)（百分率）［n（%）］表示，行χ2檢驗，計量資料以均數(shù)±標準差（x±s）表示，行t檢驗，Logistic 回歸分析影響患者預后的因素，Pearson 相關系數(shù)進行相關性分析，使用受試者工作特征（Receiver operating characteristic，ROC）曲 線 分 析CCCK-18、CTRP-3、miR-340-5p 單獨及聯(lián)合檢測的靈敏度和特異度，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 對照組與觀察組血清檢測結(jié)果比較觀察組血清CCCK-18水平高于對照組，CTRP-3、miR-340-5p低于對照組（P＜0.05），見表1。

表1 對照組與觀察組血清檢測結(jié)果比較 （x±s）Table 1 Comparison of serum test results between control group and observation group （x±s）

2.2 影響重癥高血壓性腦出血患者不同預后的單因素分析預后良好組與預后不良組年齡、性別、體重指數(shù)、高血壓病程、血腫體積、出血量差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），血清CCCK-18、CTRP-3、miR-340-5p差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表2。

表2 影響重癥高血壓性腦出血患者不同預后的單因素分析Table 2 Univariate analysis of different outcomes in patients with severe hypertensive intracerebral hemorrhage

2.3 影響重癥高血壓性腦出血患者不同預后的多因素分析Logistic 回歸分析顯示，血清CCCK-18、CTRP-3、miR-340-5p 均是重癥高血壓性腦出血患者預后的影響因素（P＜0.05），見表3。

表3 影響重癥高血壓性腦出血患者不同預后的多因素分析Table 3 Analysis of multiple factors affecting prognosis of patients with severe hypertensive intracerebral hemorrhage

2.4 相關性分析Person 相關性分析顯示，血清CCCK-18 與血清CTRP-3、miR-340-5p 呈負相關（r=-0.385、-0.406，P＜0.05）。

2.5 CCCK-18、CTRP-3、miR-340-5p檢測對重癥高血壓性腦出血預后的預測價值CCCK-18、CTRP-3、miR-340-5p 聯(lián)合檢測預測重癥高血壓性腦出血預后的AUC值高于單項檢測（P＜0.05），見表4。ROC曲線見圖1。

圖1 CCCK-18、CTRP-3、miR-340-5p 檢測預測重癥高血壓性腦出血預后的ROC曲線Figure 1 ROC curve of CCCK-18,CTRP-3 and miR-340-5p detection to predict prognosis of severe hypertensive intracerebralhemorrhage

表4 CCCK-18、CTRP-3、miR-340-5p檢測對重癥高血壓性腦出血預后的預測價值Table 4 Predictive value of CCCK-18，CTRP-3 and miR-340-5p detection for prognosis of severe hypertensive cerebral hemorrhage

3 討論

高血壓、血液疾病及腦部細小動脈硬化患者罹患腦出血風險顯著高于正常人群［8］。腦出血導致的腦水腫多在出血24 h 后進展到高峰狀態(tài)，且持續(xù)時間較長，若腦水腫控制效果不佳，會升高顱內(nèi)壓，引起腦疝，威脅患者生命安全，同時血腫產(chǎn)生的毒性作用會導致腦水腫壞死，增加患者神經(jīng)功能障礙［9-10］。重癥高血壓性腦出血可在發(fā)病數(shù)分鐘內(nèi)死亡，原因為急性出血壓迫正常腦組織，影響心血管運動中樞和呼吸中樞。隨著近年來高血壓腦出血診療方法不斷優(yōu)化，雖一定程度上降低了其致死率和致殘率，但仍會出現(xiàn)不同程度的認知功能障礙、語言功能障礙及運動功能障礙［11］。現(xiàn)階段臨床缺乏診斷重癥高血壓性腦出血特異性診斷指標，目前主要采用影像學檢查方法進行診斷，但敏感度較低，選擇合理、有效指標評估重癥高血壓性腦出血患者病情和預后，對臨床治療和提高患者生存質(zhì)量具有重要意義。

隨著近年來分子生物學技術的不斷發(fā)展，重癥高血壓性腦出血病理變化過程中的生物因子受到臨床關注。細胞凋亡在腦缺血過程中發(fā)揮主導作用，高血壓性腦出血后由于血液供給減少，相應細胞因子活化，加重了神經(jīng)細胞破壞［12］。細胞角蛋白與胞內(nèi)其他蛋白形成復雜系統(tǒng)，其中CCCK-18 在上皮細胞凋亡時會進入血液。有學者在惡性腫瘤、膿毒癥、肝臟疾病、器官移植患者中檢測出了CCCK-18 的循環(huán)水平，認為其可能是神經(jīng)系統(tǒng)疾病預后的潛在標志物［13］。另有研究顯示，高水平的CCCK-18 是頭部損傷后繼發(fā)惡性中腦動脈梗死及腦梗死的獨立危險因素［14］。本研究中觀察組血清CCCK-18水平高于對照組，預后良好組血清CCCK-18 水平低于預后不良組，表明血清CCCK-18參與了重癥高血壓性腦出血的病情進展。分析原因在于，重癥高血壓性腦出血后的缺血缺氧導致裂解的CCCK-18進入血液，細胞凋亡加重，使機體血清CCCK-18 水平進一步升高［15］。血清CCCK-18水平越高，患者的腦細胞凋亡越嚴重，預后越差，因此其可作為重癥高血壓性腦出血患者的獨立危險因素［16-17］。

腦缺血后的炎癥反應穿過血管壁浸潤腦組織可引發(fā)繼發(fā)性腦損害，其釋放的自由基會導致氧化應激，出現(xiàn)腦細胞死亡，加劇腦組織損害［18］。CTRP-3與脂聯(lián)素有多種類似的生理活性，其以內(nèi)分泌形式在多種器官組織中發(fā)揮生物學效應，可通過抑制白介素-6、腫瘤壞死因子-α等促炎因子的表達抑制機體炎癥反應［19-21］。既往研究顯示，CTRP-3 與腦出血損傷有關，其通過影響心肌組織中缺氧誘導因子信號通路，調(diào)節(jié)血管新生的過程，進而達到保護血-腦屏障、減輕腦水腫的多重功效［22-23］。本研究顯示，觀察組血清CTRP-3低于對照組，預后良好組血清CTRP-3高于預后不良組，進一步Logistic 回歸分析顯示，血清CTRP-3 水平降低是影響高血壓性腦出血患者病情嚴重程度和預后的獨立危險因素。分析原因可能是重癥高血壓性腦出血使機體出現(xiàn)炎癥反應，激活腦細胞凋亡通路，隨著血清CTRP-3 水平的降低，加劇了患者腦組織功能的破壞，血腦屏障受損，加重了神經(jīng)功能缺損［24］。

miRNA 是非編碼RNA 的一種，主要發(fā)生在細胞內(nèi)［25］。miR-340-5p在血液、神經(jīng)及消化等多系統(tǒng)組織中均有分泌，在神經(jīng)元病理過程中有一定調(diào)控作用，可影響炎癥和免疫反應過程。高血壓腦出血患者多合并血液流變學異常，血小板功能變化會導致血栓形成，增加腦組織缺血缺氧程度，加重病情。本研究顯示，觀察組miR-340-5p水平低于對照組，預后良好組miR-340-5p高于預后不良組，提示miR-340-5p參與高血壓性腦出血疾病的發(fā)生和發(fā)展，影響患者的預后。為進一步明確影響疾病預后不良的危險因素，Logistic 回歸分析顯示，miR-340-5p 水平降低是影響患者預后的獨立危險因素。高血壓腦出血后miR-340-5p 水平降低可能是通過負向調(diào)控血清CCCK-18 和CTRP-3，參與腦損傷病理過程。另外本研究還顯示，CCCK-18、CTRP-3、miR-340-5p聯(lián)合檢測預測重癥高血壓性腦出血預后的AUC值高于單項檢測，表明上述指標聯(lián)合檢測對預測重癥高血壓性腦出血患者預后的的價值較高。

重癥高血壓性腦出血患者CCCK-18 呈高表達，CTRP-3、miR-340-5p呈低表達，其對高血壓腦出血病情判斷和預后具有重要意義。早期監(jiān)測CCCK-18、CTRP-3、miR-340-5p 的表達，有助于及時采取措施，對改善患者預后有重要作用。