MAD1在乳腺癌組織中的表達及其臨床意義

崔靜 孫倩

(1.上海市長寧區婦幼保健院乳腺科,上海 200051;2.河源市和平縣人民醫院外三科,廣東 河源 517299)

我國癌癥的發病率逐年增高,乳腺癌發病居首位,嚴重危害女性的生命健康[1]。已有的傳統臨床病理參數及組化分子指標已經無法滿足人們對乳腺癌日益精準化治療和預后判斷的要求。有絲分裂阻滯缺陷蛋白(MAD)屬于原癌基因MYC家族,且MAD1研究在MAD各亞型中最為廣泛,其在乳腺癌、鼻咽癌、白血病等的惡性腫瘤中產生的調控作用顯著[2]。本研究主要探討MAD1在乳腺癌組織中的表達及其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2020年2月至2022年2月上海市長寧區婦幼保健院具備完整的臨床病例資料且符合入選標準的乳腺癌組織石蠟標本100例。應用免疫組化法檢測MAD1表達。分析MAD1表達與患者預后及腫瘤生物學行為的關系。入選病例組織均已得到患者授權使用。納入標準:提供詳細資料;均為初次確診;具備手術條件;臨床資料完整;標本采集前均未實施留體類激素藥物治療;排除遠處轉移可能。排除標準:有其它惡性腫瘤患病史;初次治療時就已經發生遠處轉移,無法實施手術的患者;術前接受過化療、放療等;伴有其他嚴重內科疾病患者;隨訪中因各原因脫落病例;非原發性乳腺癌患者。一般資料比較差異無統計學意義(P>0.05)。

1.2 方法按照AJCC(第八版)分期標準實施患者疾病的臨床分析,依據中國抗癌協會乳腺癌《乳腺癌診療指南(2017版)》判定患者乳腺癌的分子分型標準[3]。組織樣本放置于干冰上,低溫條件下切取適宜大小的組織塊,放置于預先加入了1 mL Trizol試劑和1個鋼柱的2 mL防爆Ep管中。總RNA使用Invitrogen或者Takara公司的Trizol試劑進行抽提。所有使用的試劑、耗材均需預先進行去RNase處理,具體操作步驟參照試劑盒說明書完成。常規脫蠟復水將切片放于烤箱中,烤10 min軟化石蠟。3 h后二甲苯、梯度乙醇脫蠟水化,之后抗原修復25 min,選擇檸檬酸鹽高溫煮沸完成,把內源性過氧化物酶阻斷劑滴入,通過BS沖洗3次,每次3 min;常規脫水、烘干、封固,上鏡觀察MAD1表達。通過DNase I(Sigma)處理的方式,去除可能存在于提取的總RNA中的DNA污染。同時選擇260/230 mm、260 mm/280 mm值驗證純度,并選擇NanoDrop對純化之后的RNA的質量實施檢測。選擇工作濃度1∶100的兔抗人Madl多克隆抗體(Bio．swamp公司),工作濃度1∶100的兔抗人Hp多克隆抗體,即用型的兔抗人Ki_67單克隆抗體、邁新公司的DAB酶底物顯色和S．P試劑盒。

1.3 觀察指標分析MAD1表達與患者預后及腫瘤生物學行為的關系。免疫組化結果選擇NikonE800 顯微鏡拍照觀察。結果判斷[4]:進行雙盲獨立讀片時,選擇兩位高年資病理科醫師。借助圖像分析系統采集顯微鏡下圖像,陽性信號為棕褐色顆粒。以半定量方法進行判定,結果為陽性,則細胞質出現黃色～棕黃色染色顆粒。染色強度分級:(++)～(+++)為弱表達～陽性表達,(-)～(+)分為無表達。

2 結 果

2.1 MAD1在不同乳腺病變的表達在乳腺癌組織中,MAD1蛋白的血管內皮細胞和癌細胞表達,少量定位于細胞核,主要定位在患者的血管內皮細胞的細胞質和癌細胞。陽性顯影為棕黃色沉積。在正常乳腺的上皮,MAD1表達為強陽性,乳腺導管內癌的表達稍弱。

2.2 隨訪結果100例患者中共獲得有效隨訪100例,隨訪率為100.00%。其中患者的1年生存率為97例(97.00%),高于2年87(87.00%)、3年的80例(80.00%)(P<0.05)。

2.3 MAD1表達同人類表皮生長因子受體2(HER-2)指標的關系MAD1的表達同乳腺癌患者臨床常用評價腫瘤高危因素密切關聯。通過分析MAD1表達差異,HER-2高表達同低表達患者存在統計學意義(P<0.05)。隨著組織學分級的增高,MAD1蛋白高表達率有降低趨勢,但差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 MAD1表達同HER-2指標的關系(n)

3 討 論

MAD1的過度表達說明乳腺癌患者生命周期在縮短,并存在早期復發的傾向,通過三苯氧胺和化療均無法取得較佳的療效[5]。患者乳腺癌組織中MAD1經檢測后,能夠更方便的指導臨床,被視為獨立判斷乳腺癌預后指標,可選擇更為合理、科學、恰當的治療方案,改善患者疾病預后[6-7]。但免疫組織化學法存在不足,需再次應用熒光原位雜交法檢測,規避其假陽性比較高的缺陷,獲得乳腺癌患者MAD1狀態。MAD1低表達則說明對生存有著潛在的不良影響,通常預示著患者腫瘤的生物學行為差;MAD1的表達同乳腺癌患者臨床常用評價腫瘤高危因素密切關聯。MAD1在正常體細胞中能夠穩定表達,隨著乳腺癌腫瘤侵襲性的增強,MAD1發揮的功效逐漸被削弱,提高MAD1的表達可能在乳腺癌早期時產生抗腫瘤的作用[8]。

本研究結果顯示,在乳腺癌組織中,MAD1蛋白的血管內皮細胞和癌細胞表達,少量定位于細胞核,主要定位在患者的血管內皮細胞的細胞質和癌細胞。陽性顯影為棕黃色沉積。在正常乳腺的上皮,MAD1表達為強陽性,乳腺導管內癌的表達稍弱;100例患者中共獲得有效隨訪100例,隨訪率為100.00%。其中患者的1年生存率為97例(97.00%)高于2年87(87.00%)、3年的80例(80.00%),說明MAD1的表達在預測乳腺癌患者生存情況時,其作為新的標志物發揮著關鍵作用,有良好的預后。

綜上所述,MAD1是判斷乳腺癌患者預后的關鍵分子標志物,其高表達顯示出乳腺癌患者有較好的長期生存和疾病預后。

利益沖突說明/Conflict of Intetests

所有作者聲明不存在利益沖突。

倫理批準及知情同意/Ethics Approval and Patient Consent

本研究通過上海市長寧區婦幼保健院倫理委員會(科學倫理委員會)批準,患者及家屬均知情同意。