白花蛇舌草多糖對異煙肼致肝損傷的影響及機制 Δ

莊秀萍 ，李 莉 ，陳 超 ，王麗媛 ，曹廣尚 ，周 朋 ，王 信 （.山東中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，濟(jì)南 5055；.山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院兒科，濟(jì)南 500；.山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院藥學(xué)部，濟(jì)南 500）

肝損傷是各種肝臟疾病的病理基礎(chǔ)，長期肝損傷可導(dǎo)致肝纖維化、肝硬化、肝癌，甚至肝功能衰竭。藥物性肝損傷（drug-induced liver injury，DILI）是由化學(xué)藥物、生物合成藥物、天然藥物等及其代謝產(chǎn)物引起的肝臟損害，發(fā)病率逐年上升，已成為全球肝病死亡的第五大誘因[1―2]。在我國，引起DILI 的藥物種類包括非甾體抗炎藥、抗結(jié)核藥、抗腫瘤藥等，其中抗結(jié)核藥導(dǎo)致的肝損傷發(fā)生率高達(dá)21.99%[3]。異煙肼是WHO推薦的標(biāo)準(zhǔn)抗結(jié)核治療方案中的首選藥物，但其在抗結(jié)核藥中引起的肝損傷最多，發(fā)生率約為48%[4]。兒童是結(jié)核病的高發(fā)人群，異煙肼預(yù)防性治療可使兒童結(jié)核潛伏感染發(fā)展為活動性結(jié)核病的風(fēng)險降低50%及以上[5]，但由于兒童肝臟功能發(fā)育不成熟等因素，兒童異煙肼用藥誘導(dǎo)產(chǎn)生的肝損傷已成為不容忽視的問題。目前，西醫(yī)治療異煙肼致肝損傷大都存在毒副作用大、療效不理想等問題，而中醫(yī)藥治療肝損傷具有多層次、多靶點、多途徑綜合調(diào)控的特點，在改善患者癥狀、降低肝損傷風(fēng)險、延緩病情進(jìn)展、增強機體修復(fù)能力等方面優(yōu)勢明顯[6]。

氧化應(yīng)激與DILI 的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[7]，沉默信息調(diào)節(jié)因子1（silent information regulator 1，Sirt1）/核轉(zhuǎn)錄因子紅系2 相關(guān)因子2（nuclear factor-erythroid 2-related factor 2，Nrf2）信號通路是機體重要的抗氧化應(yīng)激通路，Sirt1激活能促進(jìn)Nrf2核易位，從而上調(diào)血紅素加氧酶1（heme oxygenase-1，HO-1）、醌氧化還原酶1（quinone oxidoreductase 1，NQO1）等抗氧化因子的轉(zhuǎn)錄與表達(dá)，發(fā)揮對DILI 的改善作用[8]。白花蛇舌草為茜草科植物白花蛇舌草Hedyotis diffusaWilld.的干燥全草，具有清熱解毒、消腫散結(jié)之效[9]。白花蛇舌草多糖（polysaccharides fromH. diffusa，HDP）作為其主要成分和重要活性物質(zhì)，具有抗炎、抗氧化、抗腫瘤、增強免疫等多種藥理作用，尤其是顯著的抗氧化作用為其在氧化損傷類疾病治療中的應(yīng)用提供了有力支撐[10]。本研究基于結(jié)核病兒童發(fā)病特點及異煙肼用藥肝損傷風(fēng)險，選擇生理、發(fā)育和代謝與人類高度相似的斑馬魚幼魚為模型，研究HDP對異煙肼致肝損傷的影響，同時結(jié)合人肝L02細(xì)胞模型，初步探討其改善作用機制，旨在為DILI的治療提供參考。

1 材料

1.1 主要儀器

本研究所用主要儀器包括1260 型高效液相色譜儀（美國Agilent 公司），EP214C 型萬分之一電子天平、AB135-S型十萬分之一天平（瑞士Mettler Toledo公司），EG1150 型石蠟包埋機、RM2235 型石蠟切片機（德國Leica 公司），KQ-250 型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司），H1650-W型臺式高速離心機（湖南湘儀實驗室儀器開發(fā)有限公司），SZX16 型熒光顯微鏡、FSX100型顯微鏡（日本Olympus 公司），HT7800 型透射電子顯微鏡（日本Hitachi公司），F(xiàn)usion FX7型多功能成像系統(tǒng)（法國Vilber公司），CMax Plus型酶標(biāo)儀（上海美谷分子儀器有限公司），CO2恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱（上海精宏實驗設(shè)備有限公司）。

1.2 主要藥品與試劑

異煙肼對照品（批號MKBQ8553V，純度≥99%）購自德國Fluka 公司；白花蛇舌草飲片（批號220602，產(chǎn)地河南確山）購自安徽億源藥業(yè)股份有限公司；丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（alanine transaminase，ALT）、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（aspartate transaminase，AST）、谷胱甘肽（glutathione，GSH）酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）試劑盒和BCA 蛋白測定試劑盒（批號分別為20220412、20211215、20220354、20211224）均購自南京建成生物工程研究所；蘇木精-伊紅（HE）染色試劑盒（批號20211218）購自北京索萊寶科技有限公司；DMEM 高葡萄糖培養(yǎng)基（批號70090200）購自北京蘭杰柯科技有限公司；胎牛血清（批號22020702）購自美國Gibco 公司；CCK-8 檢測試劑盒（批號G2026-1000T）購自武漢賽維爾生物科技有限公司；吖啶橙/碘化丙啶（AO/PI）雙染試劑盒（批號VD144718）購自北京百奧萊博科技有限公司；兔Sirt1 單克隆抗體、兔Nrf2多克隆抗體、兔HO-1單克隆抗體、兔NQO1單克隆抗體、兔甘油醛-3-磷酸脫氫酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）多克隆抗體和辣根過氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔IgG 二抗（批號分別為ab189494、ab137550、ab189491、ab80588、ab9485、ab150077）均購自英國Abcam公司；甲醇、乙醇等其他試劑均為分析純；水為娃哈哈純凈水。

1.3 實驗動物與細(xì)胞

具有肝臟特異性熒光的轉(zhuǎn)基因斑馬魚（L-FABP：EGFP）由齊魯工業(yè)大學(xué)生物研究所提供。斑馬魚的養(yǎng)殖繁育參照TheZebrafish Book，操作遵循經(jīng)濟(jì)合作與發(fā)展組織標(biāo)準(zhǔn)。斑馬魚養(yǎng)殖條件如下：水溫（28±0.5）℃，pH 7.0～7.2，電導(dǎo)率450～550 μs/cm，黑暗/光照周期為10 h/14 h，成年斑馬魚每日喂食豐年蝦幼蟲3 次。斑馬魚胚胎置于斑馬魚胚胎培養(yǎng)液（5 mmol/L NaCl、0.17 mmol/L KCl、0.4 mmol/L CaCl2、0.16 mmol/L MgSO4）中，（28.0±0.5）℃下控光培養(yǎng)，每24 h更換胚胎培養(yǎng)液并及時去除死胚，胚胎密度控制在5枚/mL。

人肝L02細(xì)胞（貨號SNL-141）購自武漢尚恩生物技術(shù)有限公司。

2 方法

2.1 HDP的制備及含量測定

HDP的制備參考文獻(xiàn)方法[11]：取1 000 g白花蛇舌草飲片粉碎，以15 倍量的80%乙醇回流脫脂；收集藥渣，揮干溶劑后，加10倍量水提取2次，每次2 h；合并濾液，減壓濃縮至相對密度約1.015（60 ℃），濾過；濾液過D101型大孔吸附樹脂柱，收集藥液，減壓濃縮至一定體積，采用Savage 法去除蛋白；上清液加入乙醇使醇含量達(dá)90%，靜置過夜，濾過，沉淀用乙醇洗滌，于60 ℃減壓干燥，得HDP。應(yīng)用苯酚-濃硫酸法測定HDP 的質(zhì)量分?jǐn)?shù)[12]。

2.2 基于斑馬魚模型評價HDP對異煙肼致肝損傷的保護(hù)作用

2.2.1 HDP干預(yù)濃度的篩選

斑馬魚胚胎發(fā)育3 d 后，選擇正常發(fā)育的斑馬魚幼魚，以每孔30 尾置于6 孔板中，隨機分為正常組、模型組、HDP 組，每組設(shè)3 個復(fù)孔。正常組斑馬魚給予胚胎培養(yǎng)液，模型組斑馬魚給予含4 mmol/L異煙肼的胚胎培養(yǎng)液[13]，HDP組斑馬魚給予含4 mmol/L異煙肼和不同濃度HDP（800、600、400、200、150、100、50 μg/mL，加胚胎培養(yǎng)液超聲處理使溶解）的胚胎培養(yǎng)液。將所有平板置于28 ℃恒溫培養(yǎng)箱中孵化，浸浴給藥72 h，每24 h 換1次藥液。以心臟驟停作為斑馬魚死亡的標(biāo)準(zhǔn)，通過一般形態(tài)特征來確定畸變評分。以斑馬魚幼魚的存活率和畸變率為指標(biāo)，篩選HDP的干預(yù)濃度。

2.2.2 斑馬魚肝臟熒光面積及熒光強度的測定

浸浴給藥72 h 后，隨機選取“2.2.1”項下正常組、模型組和HDP 低、高濃度組（50、100 μg/mL，根據(jù)“2.2.1”項下實驗結(jié)果選擇）斑馬魚幼魚8尾，在熒光顯微鏡下觀察斑馬魚的局部肝臟形態(tài)，使用Image J 軟件分析肝臟熒光面積和熒光強度。

2.2.3 斑馬魚肝組織病理學(xué)觀察

浸浴給藥72 h 后，隨機選取“2.2.1”項下正常組、模型組和HDP 低、高濃度組（50、100 μg/mL，根據(jù)“2.2.1”項下實驗結(jié)果選擇）斑馬魚幼魚3尾，用4%多聚甲醛和2.5%戊二醛固定。取4%多聚甲醛固定的幼魚，用分級乙醇脫水，加入二甲苯，石蠟包埋，切片，進(jìn)行HE 染色，使用顯微鏡觀察組織切片并拍照。取2.5%戊二醛固定的斑馬魚幼魚，再用1%鋨酸固定，用分級丙酮脫水，置包埋液中，固化，超薄切片，用醋酸鈾、檸檬酸鉛染色，使用透射電子顯微鏡觀察組織切片并拍照。

2.3 基于L02細(xì)胞模型研究HDP對異煙肼致肝損傷的保護(hù)作用及機制

2.3.1 異煙肼和HDP干預(yù)濃度的篩選

將L02細(xì)胞按1×104個/孔的密度接種于96孔板中，培養(yǎng)24 h后，分別加入濃度為2、4、6、8、16、32 mmol/L的異煙肼培養(yǎng)24 h，每個濃度設(shè)4個復(fù)孔，采用CCK-8法檢測細(xì)胞存活率，具體操作按試劑盒說明書方法進(jìn)行。以同樣方法檢測質(zhì)量濃度分別為1、2、4、8、16、24 mg/mL的HDP處理后的細(xì)胞存活率。細(xì)胞存活率＝（給藥組平均光密度值－校準(zhǔn)平均光密度值）/（細(xì)胞空白對照組平均光密度值－校準(zhǔn)平均光密度值）×100%。

2.3.2 HDP對異煙肼致?lián)p傷L02細(xì)胞存活的影響

按照“2.3.1”項下方法接種、培養(yǎng)細(xì)胞24 h，然后分為正常組、模型組和HDP低、高濃度組（2、4 mg/mL），每組設(shè)4 個復(fù)孔。正常組細(xì)胞給予含10%胎牛血清的DMEM 培養(yǎng)基，模型組細(xì)胞給予含4 mmol/L 異煙肼的培養(yǎng)基，HDP低、高濃度組細(xì)胞分別給予含4 mmol/L異煙肼和相應(yīng)濃度HDP（2、4 mg/mL）的培養(yǎng)基，培養(yǎng)24 h，采用CCK-8法檢測細(xì)胞存活率。同法處理細(xì)胞后，收集細(xì)胞按AO/PI試劑盒說明書方法進(jìn)行雙重染色，使用酶標(biāo)儀觀察細(xì)胞存活情況。

2.3.3 HDP對L02細(xì)胞上清液中ALT、AST水平及細(xì)胞裂解液中GSH含量的影響

將L02細(xì)胞以1×106個/孔的密度接種于6孔板中，培養(yǎng)24 h 后，按“2.3.2”項下方法分組、處理，每組設(shè)3 個復(fù)孔，收集細(xì)胞上清液和細(xì)胞裂解液，按試劑盒說明書方法分別檢測細(xì)胞上清液中AST、ALT水平及細(xì)胞裂解液中GSH含量。

2.3.4 HDP 對L02 細(xì)胞中Sirt1/Nrf2 信號通路相關(guān)蛋白表達(dá)的影響

采用Western blot 法檢測。將“2.3.3”項下各組細(xì)胞裂解液與上樣緩沖液混合，煮沸變性，電泳分離，轉(zhuǎn)膜，用5%脫脂牛奶封閉后，在4 ℃下分別加入Sirt1、Nrf2、HO-1、NQO1、GAPDH 抗體（稀釋比例分別為1∶1 000、1∶1 000、1∶1 000、1∶1 000、1∶2 000），孵育過夜，洗滌3次后，加入二抗（稀釋比例為1∶5 000），室溫孵育1 h，用ECL試劑進(jìn)行顯影，并用多功能成像系統(tǒng)進(jìn)行掃描。采用Image J 軟件分析蛋白條帶灰度值，以目的蛋白條帶灰度值與內(nèi)參蛋白（GAPDH）條帶灰度值的比值評價目的蛋白的表達(dá)水平。

2.4 統(tǒng)計學(xué)處理

采用GraphPad Prism 8.0 軟件進(jìn)行分析。實驗數(shù)據(jù)以±s表示，多組間比較采用單因素方差分析，進(jìn)一步兩兩組間比較采用LSD-t檢驗。檢驗水準(zhǔn)α＝0.05。

3 結(jié)果

3.1 HDP的提取得率與質(zhì)量分?jǐn)?shù)

1 000 g白花蛇舌草飲片，可提取獲得12.35 g HDP，得率為1.24%；HDP的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為61.47%。

3.2 HDP對異煙肼致斑馬魚肝損傷的保護(hù)作用

3.2.1 HDP對斑馬魚存活率和畸變率的影響

HDP質(zhì)量濃度在150 μg/mL及以上時，斑馬魚的存活率均低于95%，畸變率均高于15%，結(jié)果見表1。綜合考慮，選擇100、50 μg/mL 作為后續(xù)斑馬魚實驗HDP 的高、低濃度。

表1 不同濃度HDP 對斑馬魚存活率和畸變率的影響（±s，n＝3）

表1 不同濃度HDP 對斑馬魚存活率和畸變率的影響（±s，n＝3）

組別正常組模型組HDP組藥物濃度4 mmol/L異煙肼4 mmol/L異煙肼+800 μg/mL HDP 4 mmol/L異煙肼+600 μg/mL HDP 4 mmol/L異煙肼+400 μg/mL HDP 4 mmol/L異煙肼+200 μg/mL HDP 4 mmol/L異煙肼+150 μg/mL HDP 4 mmol/L異煙肼+100 μg/mL HDP 4 mmol/L異煙肼+50 μg/mL HDP存活率/%100 98.89±1.92 0 21.51±3.85 35.56±1.92 76.87±3.33 94.84±3.84 100 100畸變率/%0 7.85±1.86 100 56.56±3.15 34.70±2.84 18.82±1.74 10.00±3.33 7.78±1.92

3.2.2 HDP對斑馬魚肝臟熒光面積及熒光強度的影響

與正常組比較，模型組斑馬魚肝臟熒光面積和熒光強度均顯著減小（P＜0.01），說明肝損傷造模成功；與模型組比較，HDP 低、高濃度組斑馬魚肝臟熒光面積均顯著增加（P＜0.05或P＜0.01），HDP高濃度組斑馬魚肝臟熒光強度顯著增加（P＜0.01）。結(jié)果見表2。

表2 各組斑馬魚肝臟熒光面積和熒光強度的測定結(jié)果（±s，n＝8）

表2 各組斑馬魚肝臟熒光面積和熒光強度的測定結(jié)果（±s，n＝8）

a：與正常組比較，P＜0.01；b：與模型組比較，P＜0.05；c：與模型組比較，P＜0.01。

組別正常組模型組熒光面積/%100.00±4.78 75.19±4.55a熒光強度/%100.00±4.67 70.18±3.50a組別HDP低濃度組HDP高濃度組熒光面積/%82.27±2.82b 98.05±1.84c熒光強度/%73.12±3.20 83.78±2.59c

3.2.3 HDP對斑馬魚肝組織病理變化的影響

與正常組比較，模型組斑馬魚肝細(xì)胞胞漿稀疏、核萎縮、空泡化及炎癥細(xì)胞聚集，出現(xiàn)明顯的肝損傷壞死特征；與模型組比較，HDP低、高濃度組斑馬魚上述肝損傷壞死特征均有不同程度改善。結(jié)果見圖1。

圖1 各組斑馬魚肝組織病理變化的顯微鏡圖（HE染色）

3.2.4 HDP對斑馬魚肝組織超微病理變化的影響

與正常組比較，模型組斑馬魚肝細(xì)胞核出現(xiàn)萎縮、畸變，線粒體的數(shù)量和嵴均明顯減少、形狀發(fā)生扭曲變形；與模型組比較，HDP低、高濃度組斑馬魚肝細(xì)胞核和線粒體的病理變化均有不同程度改善，其中HDP高濃度組改善更明顯。結(jié)果見圖2。

紅色箭頭：細(xì)胞核萎縮、畸變；黃色箭頭：線粒體的數(shù)量和嵴；藍(lán)色箭頭：線粒體形狀扭曲變形。圖2 各組斑馬魚肝組織超微病理變化的顯微鏡圖（醋酸鈾、檸檬酸鉛染色）

3.3 HDP對異煙肼致L02細(xì)胞損傷的保護(hù)作用及機制

3.3.1 異煙肼和HDP干預(yù)濃度的篩選結(jié)果

如圖3（A）所示，L02細(xì)胞存活率隨異煙肼濃度的升高而降低，當(dāng)異煙肼濃度為4 mmol/L 時，細(xì)胞存活率約為80%，滿足Western blot 實驗提取蛋白的要求，綜合考慮選擇4 mmol/L 作為異煙肼誘導(dǎo)肝損傷的給藥濃度。如圖3（B）所示，L02細(xì)胞存活率隨HDP質(zhì)量濃度的升高而降低，當(dāng)HDP 質(zhì)量濃度大于4 mg/mL 時，細(xì)胞存活率低于100%，綜合考慮選擇2、4 mg/mL 作為HDP 干預(yù)的低、高濃度。

圖3 異煙肼和HDP對L02細(xì)胞存活率的影響

3.3.2 L02細(xì)胞存活率的測定結(jié)果

與正常組比較，模型組L02 細(xì)胞存活率顯著降低（P＜0.01）；與模型組比較，HDP 低、高濃度組L02 細(xì)胞存活率均顯著升高（P＜0.05或P＜0.01）。結(jié)果見圖4。

a：與正常組比較，P＜0.01；b：與模型組比較，P＜0.05；c：與模型組比較，P＜0.01。圖4 各組L02細(xì)胞存活率的測定結(jié)果（±s，n＝4）

3.3.3 L02細(xì)胞存活情況的染色結(jié)果

AO 可透過正常細(xì)胞膜，使細(xì)胞核呈綠色或黃綠色均勻熒光；PI無膜通透性，不能透過活細(xì)胞膜，只能進(jìn)入損傷的細(xì)胞及死細(xì)胞，呈紅色熒光。如圖5所示，正常組視野以綠色熒光的活細(xì)胞為主；與正常組比較，模型組呈綠色熒光的活細(xì)胞數(shù)量明顯減少，呈紅色熒光的損傷或死亡細(xì)胞數(shù)量明顯增加；與模型組比較，HDP低、高濃度組呈綠色熒光的活細(xì)胞數(shù)量均明顯增加，呈紅色熒光的損傷或死亡細(xì)胞數(shù)量均明顯減少。

圖5 各組L02細(xì)胞存活情況AO/PI熒光染色圖

3.3.4 L02 細(xì)胞上清液中AST、ALT 水平及細(xì)胞裂解液中GSH含量的測定結(jié)果

與正常組比較，模型組L02 細(xì)胞上清液中AST 和ALT 水平均顯著升高（P＜0.01），細(xì)胞裂解液中GSH 含量顯著降低（P＜0.01）。與模型組比較，HDP 低濃度組L02 細(xì)胞上清液中AST 水平顯著降低（P＜0.05）；HDP高濃度組L02細(xì)胞上清液中AST、ALT水平均顯著降低（P＜0.05），細(xì)胞裂解液中GSH 含量顯著升高（P＜0.01）。結(jié)果見圖6。

a：與正常組比較，P＜0.01；b：與模型組比較，P＜0.05；c：與模型組比較，P＜0.01。圖6 各組L02 細(xì)胞上清液中AST、ALT 水平及細(xì)胞裂解液中GSH含量的測定結(jié)果（±s，n＝3）

3.3.5 L02 細(xì)胞中Sirt1/Nrf2 信號通路相關(guān)蛋白表達(dá)的測定結(jié)果

與正常組比較，模型組L02 細(xì)胞中Sirt1、NQO1、HO-1 蛋白表達(dá)水平均顯著降低（P＜0.05 或P＜0.01），Nrf2 蛋白表達(dá)水平有升高趨勢，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；與模型組比較，HDP 低濃度組L02 細(xì)胞中Nrf2、NQO1 蛋白表達(dá)水平均顯著升高（P＜0.05），HDP高濃度組L02 細(xì)胞中Sirt1、Nrf2、NQO1、HO-1 蛋白表達(dá)水平均顯著升高（P＜0.05 或P＜0.01）。結(jié)果見圖7、圖8。

圖7 各組L02細(xì)胞中Sirt1、Nrf2、NQO1、HO-1蛋白表達(dá)的電泳圖

4 討論

異煙肼誘導(dǎo)的肝損傷與線粒體呼吸鏈酶活性抑制、通透性轉(zhuǎn)化孔持續(xù)開放、動力學(xué)失衡等功能障礙密切相關(guān)，其可導(dǎo)致線粒體膜通透性增加、腫脹畸形、數(shù)量減少、嵴密度降低等[6]，這與本研究結(jié)果一致。HDP能顯著改善異煙肼誘導(dǎo)的斑馬魚肝組織病理變化，尤其是對線粒體形態(tài)、嵴密度等有較好的恢復(fù)作用，提示HDP 對肝損傷的改善作用可能與調(diào)控線粒體功能相關(guān)。后期本研究團(tuán)隊將進(jìn)一步探討HDP對線粒體功能的影響。

異煙肼可誘導(dǎo)氧化還原蛋白Nrf2核外表達(dá)積累，抑制Nrf2 入核，導(dǎo)致肝細(xì)胞抗氧化能力降低而發(fā)生損傷，故氧化應(yīng)激是異煙肼致肝損傷的重要因素[14]。Sirt1 作為細(xì)胞氧化還原狀態(tài)的傳感器和氧化應(yīng)激的保護(hù)器，可增加下游Nrf2靶基因的轉(zhuǎn)錄活性并上調(diào)其蛋白表達(dá)，促進(jìn)Nrf2核易位及下游抗氧化因子GSH、HO-1等表達(dá)，提高機體抗氧化能力，在肝損傷氧化應(yīng)激反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。研究表明，激活Sirt1/Nrf2 信號通路可保護(hù)細(xì)胞避免氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的損傷進(jìn)而改善膽汁淤積肝損傷[7]；Sirt1可通過增加Nrf2核移位提高機體抗氧防御能力，對四氯化碳、對乙酰氨基酚誘導(dǎo)的肝損傷產(chǎn)生良好的保護(hù)作用[15]。本研究結(jié)果表明，與正常組比較，模型組L02細(xì)胞中Nrf2蛋白表達(dá)水平有升高趨勢，Sirt1、NQO1、HO-1蛋白表達(dá)水平均顯著降低，這可能是肝損傷過程中導(dǎo)致的Nrf2 代償性增加；而HDP 可顯著提高L02 細(xì)胞中Sirt1、Nrf2、NQO1、HO-1 蛋白表達(dá)水平，提示HDP 可能通過激活Sirt1/Nrf2信號通路，提高抗氧化能力，發(fā)揮對異煙肼致肝損傷的改善作用。

綜上所述，HDP對異煙肼誘導(dǎo)的肝損傷具有一定的改善作用，其機制可能與激活Sirt1/Nrf2信號通路、改善線粒體功能、提高抗氧化能力相關(guān)。后期本研究團(tuán)隊將進(jìn)一步對HDP成分的分離純化、構(gòu)效評價、作用靶點等方面進(jìn)行深入研究，旨在為HDP的綜合開發(fā)利用提供支撐。