高效液相色譜-三重四極桿串聯質譜法測定一次性靜脈留置針中雙酚A 殘留量*

劉 慧，王 健，李 奇，王紫蕓，茍彥彥，許靜遠，徐 力△

（1.江蘇省揚州市食品藥品檢驗檢測中心，江蘇揚州 225000； 2.常熟理工學院生物與食品工程學院，江蘇蘇州 215500）

雙酚A 化學名為2，2 - 二（4 - 羥基苯基）丙烷，是一種用于制備環氧樹脂和聚碳酸酯的化工原料，普遍存在于各類塑料制品中，能干擾人體內分泌系統的功能，有胚胎毒性［1］和致畸性［2］，可能對青少年發育產生影響［3］。靜脈留置針是連續性靜脈輸注患者最常接觸的醫療器械，其三通接頭和延長管均由塑料制成，存在殘留雙酚A 的可能性。由于長時間與人體接觸，雙酚A可能遷移到人體中［4-7］，對人體產生潛在危害。目前，用于分析雙酚A的方法主要有液相色譜法［8］、氣相色譜質譜聯用法［9-10］和液相色譜質譜聯用法［11-12］，其中液相色譜質譜聯用法具有專屬性強、靈敏度高、準確度高等特點，應用范圍較廣，在塑料制品、紡織品、食品和藥品包裝材料、環境監測、飲用水、飲料等各行業的應用均有報道。僅1篇文獻報道高效液相色譜法測定一次性靜脈留置針中雙酚A的含量，方法檢測限為0.211 μg/mL［13］。由于塑料醫療器械中雙酚A的含量較低，常規色譜分析方法的檢測限無法滿足，需建立測定痕量雙酚A 的專屬、高效定量檢測方法。目前，尚無針對一次性靜脈留置針中雙酚A殘留量的規定，且未見液質聯用法測定一次性靜脈留置針中雙酚A殘留量的報道。本研究中參考食品行業相關標準［14］和文獻［15- 19］，建立了測定一次性靜脈留置針中雙酚A 殘留量的高效液相色譜-三重四極桿串聯質譜法，并對市售靜脈留置針中雙酚A的殘留量進行檢測?，F報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

SCIEX Triple Quad 4500 型高效液相色譜-三重四極桿質譜儀（上海愛博才思分析儀器貿易有限公司）；XS205DU 型電子分析天平（瑞士Mettler Toledo 公司，精度為十萬分之一）；Milli- Q Refence 型超純水儀（美國Millipore 公司）；KH - 300DV 型數控超聲波清洗器（昆山禾創超聲儀器有限公司，功率為300 W，頻率為40 kHz）；MiniSpin 5452型離心機（Eppendorf<中國>有限公司）。

1.2 試藥

甲醇、乙腈（色譜純，北京迪馬科技有限公司）；氨水（分析純，國藥集團化學試劑有限公司）；水為超純水；雙酚A 對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號為195003 - 201601，純度為99.7%）；一次性靜脈留置針（市售），樣品信息見表1。

表1 樣品信息Tab.1 Information of samples

2 方法與結果

2.1 色譜與質譜條件

2.1.1 色譜條件

色譜柱：Waters Acquity Premier BEH C18柱（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）；流動相：0.05%氨水-甲醇（28∶72，V/V），等度洗脫3 min；流速：0.3 mL/ min；柱溫：30 ℃；進樣量：2 μL。

2.1.2 質譜條件

三重四極桿質譜；離子源：電噴霧電離（ESI）；掃描方式：負離子、多反應監測（MRM）模式；氣簾氣氣壓（CUR）：25 psi；離子化電壓（ISVF）：4 500 V；噴霧氣氣壓GS1：55 psi；輔助加熱氣氣壓GS2：55 psi；溫度：550 ℃；接口加熱：開；碰撞氣（CAD）：Medium。雙酚A 的離子對及質譜參數見表2。

表2 雙酚A的離子對及質譜參數Tab.2 Ion pairs and mass spectrometry parameters of bisphenol A

2.2 溶液制備

取雙酚A 對照品10.87 mg，精密稱定，置100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容，配制成質量濃度為0.108 4 mg/mL的對照品貯備液。精密量取對照品貯備液1 mL，置100 mL 容量瓶中，加甲醇定容，即得質量濃度為1.084 μg/ mL 的對照品溶液。取一次性靜脈留置針軟管適量，剪碎，取1.5 g，精密稱定，加乙腈10 mL，超聲提取（頻率為40 kHz，溫度為20 ℃）50 min，取1.5 mL提取液，置離心管中，離心（轉速為12 000 r/min）15 min，氮氣吹干，加500 μL甲醇復溶，離心（轉速為12 000 r/min）5 min，取上清液，0.22 μm 微孔濾膜濾過，即得供試品溶液。以甲醇為空白溶液。

2.3 方法學考察

專屬性試驗：MRM 模式下對m/z為227.1/ 133.0的離子對進行定量檢測。結果供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相同保留時間處有峰出現，表明方法專屬性良好。質譜圖見圖1。

1.雙酚AA.空白溶液（甲醇） B.對照品溶液 C.供試品溶液圖1 高效液相色譜-三重四極桿串聯質譜圖1.Bisphenol AA.Blank solution（methanol） B.Reference solution C.Test solutionFig.1 HPLC - MS / MS spectrograms

線性關系考察：取2.2 項下雙酚A 對照品溶液，加甲醇稀釋成質量濃度分別為5.42，10.84，21.68，54.20，108.4，216.8 ng/mL 的系列標準溶液，按2.1 項下色譜與質譜條件進樣測定，以峰面積（A）為縱坐標、雙酚A 質量濃度（C，ng/ mL）為橫坐標進行線性回歸，得回歸方程A=0.098 8C+0.037 1（r=0.999 9，n=6）。結果表明，雙酚A的質量濃度在5.42～216.8 ng/mL范圍內與峰面積線性關系良好。

檢測限與定量限確定：取2.2 項下對照品溶液適量，加甲醇稀釋成系列質量濃度的溶液，按2.1 項下色譜與質譜條件進樣測定，以信噪比（S/N）為10 時的質量濃度為定量限，以S/N為3 時的質量濃度為檢測限。結果定量限為1.084 ng/mL，檢測限為0.108 4 ng/mL。

精密度試驗：取質量濃度分別為5.42，21.68，108.4 ng/mL 的對照品溶液各適量，按2.1 項下色譜與質譜條件于1 d內連續進樣測定5次，或分別連續進樣測定3 d，記錄峰面積。結果日內精密度試驗結果的RSD分別為2.40%，2.37%，1.83%（n=5），日間精密度試驗結果的RSD分別為3.51%，2.89%，2.64%（n=3），表明儀器精密度良好。

重復性試驗：取粉碎后的樣品（批號為20220602），按2.2項下方法制備供試品溶液，平行6份，按2.1項下色譜與質譜條件進樣測定，根據回歸方程計算樣品中雙酚A 的殘留量。結果殘留量為97.62 mg/ g，RSD為0.59%（n=6），表明方法重復性良好。

加樣回收試驗：取粉碎后的樣品（批號20220602）1.5 g，精密稱定，精密加入一定量的雙酚A 對照品，按2.2 項下方法制備供試品溶液，按2.1 項下色譜與質譜條件進樣測定6次，計算加樣回收率。結果見表3。

表3 加樣回收試驗結果（n=6）Tab.3 Results of the recovery test（n = 6）

2.4 樣品殘留量測定

取粉碎后的樣品適量，精密稱定，按2.2 項下方法制備供試品溶液，按2.1 項下色譜與質譜條件進樣測定，根據回歸方程計算樣品中雙酚A 的殘留量。結果編號為SX 的樣品中雙酚A 的殘留量最高，其他編號樣品中雙酚A的殘留量較低或未檢出。詳見表4。

表4 樣品中雙酚A殘留量測定結果（ng/g）Tab.4 Results of the content determination of bisphenol A residues in samples（ng / g）

3 討論

3.1 質譜條件選擇

取雙酚A 對照品溶液適量，直接進樣到離子源中，在負離子母離子、全掃描（Q1 SCAN）模式下進行掃描，得到雙酚A 的分子離子峰，在負離子產物離子掃描（Product Ion）模式下對雙酚A 分子離子峰進行掃描，得到雙酚A 的碎片分子離子峰。分別優化去簇電壓（DP）和裂解電壓（CE）獲得最佳電壓，在DP 為-91 V，CE 分別為-32 eV 和-24 eV 時，m/z133.0 和m/z211.2 碎片離子的強度較大。翟美娟等［15］采用超高效液相色譜-質譜法檢測藥包材中的雙酚A 時發現，m/z為133.1 的碎片離子強度較大，適合作為定量離子。故選擇m/z133.0 和211.2 的碎片離子分別作為定量及定性檢測離子。

3.2 色譜條件選擇

流動相的組成會影響雙酚A 定量檢測的準確度［20］。本研究中流動相系統比較了甲醇和乙腈對分離效果的影響，甲醇作為流動相時，色譜峰響應值較高；比較甲醇- 水和甲醇- 0.05%氨水發現，后者色譜峰峰形好，不分叉，響應值較高。林勝軍等［21］的研究發現，以乙腈- 水或甲醇- 水為流動相時，雙酚A 的響應值低于甲醇-5 mmol/L 乙酸銨?？赡苁怯捎陔p酚A 中含有酚羥基，顯弱酸性，而流動相中添加堿性物質（乙酸銨或氨）后可促進雙酚A的離子化，從而提高響應值。故選擇甲醇-0.05%氨水作為流動相。

3.3 方法評價

本研究中建立的方法操作簡便、靈敏度高、重復性好、結果準確，可用于一次性靜脈留置針中雙酚A 的殘留量測定?？蔀橛嘘P部門制訂留置針臨床使用分類指導原則提供理論依據，有利于提高醫療器械生產企業的產品質量。