火鍋底料中喹諾酮類化合物的測定

康宗華　江露

摘 要：目的：建立火鍋底料中喹諾酮類化合物的測定方法。方法：樣品經0.1 mol·L-1 EDTA-Mcllvaine溶液提取，5%甲醇水溶液凈化后上液相色譜-串聯質譜儀分析。采用SHIMADZU C18色譜柱（2.1 mm×100 mm，3 ?m）進行分離，流動相為0.1%甲酸-乙腈，梯度洗脫。采用電噴霧離子源，正離子掃描。結果：該方法線性關系良好，相關系數≥0.99；樣品在1.0～20.0 μg·kg-1的添加水平下加標回收率為65.20%～110.20%。結論：該方法適用于火鍋底料中喹諾酮類化合物的測定，簡單快速，靈敏度高，重復性好。

關鍵詞：液相色譜-串聯質譜法；火鍋底料；喹諾酮

Determination of Quinolones in Hot Pot Base

KANG Zonghua1，2， JIANG Lu1

（1.Hunan Kouweiwang Group Co.， Ltd.， Yiyang 413000， China;

2.Hunan Tuopu Inspection Institute， Yiyang 413000， China）

Abstract： Objective： To establish a method for the determination of quinolones in hot pot base. Method： Hot pot base sample were extracted by 0.1 mol·L-1 EDTA-Mcllvaine solution， purified by 5% methanol aqueous solution， and analyzed by liquid chromatography-tandem mass spectrometry. Separation was performed using a column SHIMADZU C18 column （2.1 mm×100 mm， 3 ?m） with 0.1% formic acid-acetonitrile as a mobile phase and gradient elution. The ion source is an electrospray ion source， and the scanning method is positive ion scanning. Result： The method has a good linear relationship， and the correlation coefficient is greater than or equal to 0.99. The recoveries of spiked samples at spiked levels of 1.0～20.0 μg·kg-1 ranged from 65.20% to 110.20%. Conclusion： This method is suitable for the determination of quinolones in hotpot seasonings， which is simple， rapid， sensitive and reproducible.

Keywords： liquid chromatography-tandem mass spectrometry; hot pot base; quinolones

近年來，多地質監局在一些商販所用的火鍋底料中檢出了喹諾酮類化合物[1]。由于喹諾酮類化合物對革蘭氏陰性菌具有殺菌作用，被廣泛用作人畜通用的抗生素藥物，可用于治療革蘭氏陰性菌感染的大部分疾病。但根據相關規定，洛美沙星等4種獸藥在食品動物中已經被禁止使用[2]。喹諾酮類化合物會對胃腸道、中樞神經產生不良作用。例如，氧氟沙星是一種喹諾酮類化合物，長期食用氧氟沙星殘留量超標的動物性食品可能會引發胃腸道不良反應，包括刺激性損傷和一些不適癥狀（如頭痛、睡眠不良）等，嚴重者還可能引起肝損害[3]。目前，喹諾酮類化合物的檢測方法主要有液相色譜[4]、液質聯用[1，5]等，但這些檢測方法參數不確定，重復性不佳。因此，本研究旨在采用液相色譜-串聯質譜法，為喹諾酮類化合物的高效檢測提供方法依據。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

火鍋底料，從超市購買；甲醇，優級純，默克；乙腈，優級純，匯虹；甲酸、氨水，分析純，匯虹；磷酸氫二鈉、鹽酸、乙酸銨，分析純，國藥集團；NaOH、EDTA-2Na，分析純，科密歐。除有特殊說明，本文所用試劑均為分析純，試驗用水均為超純水。

1.2 儀器與設備

AB3500液質聯用儀，Sciex TRIPLE QUAD TM3 500；Ax224ZH電子天平，奧豪斯；SHZMADZU C18色譜柱（2.1 mm×100 mm，3 μm）。

1.3 試劑與標準溶液配制

0.1 mol·L-1 EDTA Mcllvaine緩沖溶液（以下簡稱緩沖溶液）：稱取60.5 g EDTA-2Na至1 625 mL Mcllvaine緩沖溶液中，超聲溶解。25%氨水甲醇溶液：量取25 mL氨水于100 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度線。

標準儲備液（有效期6個月）：稱取各標準品約10 mg（精確到0.001 g）于10 mL容量瓶中，加入0.2 mL甲酸，超聲溶解，乙腈定容，得到濃度為1.0 mg·mL-1的標準儲備液，避光保存（＜18 ℃）。

混合標準溶液（有效期3個月）：量取一定量各標準儲備液，用甲醇稀釋，使環丙沙星、沙拉沙星濃度為0.015 mg·mL-1，其他化合物濃度為0.010 mg·mL-1。

混合標準中間溶液：量取混合標準溶液1 mL于10 mL容量瓶中，用甲醇精確稀釋至刻度線，得到環丙沙星、沙拉沙星濃度為1.5 μg·mL-1，其他化合物濃度為1.0 μg·mL-1的混合標準中間溶液，避光保存（＜4 ℃），現用現配。

內標標準儲備液（有效期6個月）：稱取氘代同位素標準品10 mg，加入0.2 mL甲酸，超聲溶解，用乙腈定容至10 mL，得到濃度為1.0 mg·mL-1的內標標準儲備液，避光保存（＜18 ℃）。

1.4 實驗方法

1.4.1 樣品處理

火鍋底料樣品制備：稱取待檢樣品約500 g，用絞肉機充分絞碎均勻，裝入干凈容器中，密封，做好相關信息標記，4 ℃冷藏存放。

1.4.2 樣品制備

樣品制備參考相關標準方法[6]。

（1）提取。稱取5.0 g均勻樣品（精確至0.001 g）于50 mL離心管中，加入混合內標標準中間溶液0.1 mL，加入20 mL 0.1 mol·L-1 EDTA-Mcllvaine緩沖溶液，渦旋混勻1 min，超聲提取15 min，8 000 r·min-1離心5 min，將上清液轉移至50 mL容量瓶中，殘渣用EDTA-Mcllvaine緩沖溶液重復提取兩次，每次10 mL，合并上清液至同一容量瓶中，用EDTA-Mcllvaine緩沖溶液定容至刻度，混勻。用濾紙過濾（必要時10 000 r·min-1離心5 min后過濾），續濾液待凈化。

（2）凈化。精密吸取上述待凈化液25.0 mL，以1 mL·min-1的流速全部通過固相小柱，用3 mL 5%甲醇水溶液淋洗，抽干，依次以6 mL甲醇、3 mL氨水甲醇洗脫，合并甲醇及氨水甲醇洗脫液，45 ℃氮吹至近干，準確加入2.0 mL流動相初始比例復溶液溶解殘渣，過0.22 ?m濾膜，濾液供液相色譜-串聯質譜儀分析。

1.4.3 標準曲線配制

基質標準工作溶液的制備：稱取5 g空白試樣（精確至0.001 g）于50 mL離心管中，除不加入混合內標標準中間溶液外，其余操作同1.4.2中樣品處理，得到空白基質，共制備6份。

分別準確吸取混合標準中間溶液0 mL、0.010 mL、0.020 mL、0.050 mL、0.100 mL、0.200 mL及混合內標標準中間溶液0.025 mL于試管中，氮吹至近干，加入1.0 mL空白基質復溶，過0.22 μm濾膜，得到濃度分別為0 ng·mL-1、10 ng·mL-1、20 ng·mL-1、50 ng·mL-1、100 ng·mL-1、200 ng·mL-1的基質標準工作溶液用以上機。用內標法繪制標準曲線。

1.4.4 測試條件

色譜柱：SHIMADZU C18柱（2.1 mm×100 mm，3 ?m）；流動相：A-0.1%的甲酸水溶液，B-乙腈；經過前期多次預實驗，最終優化得到梯度洗脫程序見表1；流速：300 μL·min-1；柱溫：40 ℃；進樣量：20 μL。

質譜條件：電噴霧離子源；采用正離子掃描；進行多反應監測；電噴霧電壓：-4 500 V；噴霧氣（GS1）壓力：30 psi；氣簾氣壓力：10 psi；輔助加熱氣（GS2）：28 psi；離子源溫度：350℃；碰撞氣：8 psi。

1.4.5 加標回收試驗和精密度試驗

（1）加標回收試驗。制備高、中、低3個加標水平的火鍋底料樣品，按照樣品前處理方法提取、凈化后，按1.4.4條件測定加標回收率。

（2）精密度試驗。進行兩次平行實驗，計算測定結果的絕對差值。

2 結果與分析

2.1 線性相關性和方法檢出限

分別稱取樣品8份，按照1.4處理。由表2可知，11種喹諾酮類化合物在0～200 ng·mL-1線性關系良好。檢出限為1 ?g·kg-1，定量限為3 ?g·kg-1。

2.2 回收率和重復性

由表3可知，樣品在1.0～20.0 μg·kg-1添加水平下的加標回收率為65.20%～110.20%。

2.3 樣品檢測

對從超市購買的火鍋底料進行喹諾酮類化合物含量測定，結果顯示未檢出。

3 結論

本實驗建立了高效液相色譜-串聯質譜法測定火鍋底料中喹諾酮類化合物的方法，應用此方法對實際樣品中喹諾酮類化合物進行測定，結果為未檢出。該方法簡單快速，靈敏度高，重復性好，可推廣應用于更多食品中喹諾酮類化合物的檢測，如麻辣燙、豆制品等。

參考文獻

[1]趙飛，高廣慧，賈宏新，等.超高效液相色譜-串聯四極桿質譜法測定麻辣燙中喹諾酮類藥物殘留[J].分析測試學報，2017，36（6）：768-772.

[2]佚名.市場監管總局關于發布《水產品及水中丁香酚類化合物的測定》等2項食品補充檢驗方法的公告（2019年第15號）[J].中國食品衛生雜志，2019，31（3）：204.

[3]史艷艷，高琳，李俊，等.液相色譜-串聯質譜法檢測飼料中洛美沙星、培氟沙星、氧氟沙星、諾氟沙星殘留[J].食品安全質量檢測學報，2019，10（11）：3367-3375.

[4]重慶市食品藥品檢驗檢測研究院.香辛料及其制品中真菌毒素的檢測方法：202111678178.8[P].2022-04-05.

[5]溫穎婉，黎艷，孫樹周.用液相色譜-串聯質譜法同時檢測化妝品中17種喹諾酮類抗生素方法的研究[J].當代醫藥論叢，2019，17（9）：220-222.

[6]國家市場監督管理總局.豆芽、豆制品、火鍋及麻辣燙底料中喹諾酮類、磺胺類、硝基咪唑類、四環素類化合物的測定：BJS 202310[S].北京：中國標準出版社，2023.