重癥腦梗死患者血清中miR-206和miR-210的表達變化及臨床意義

郭發瑞,郭 囡,兀瑞儉,柴曉波,劉世福

(黃河三門峽醫院 重癥醫學科,河南 三門峽472000)

急性腦梗死(ACI)是一種常見的臨床疾病,近年來重癥ACI的發病率急劇增加,約占所有腦血管疾病的80%[1]。由于神經元的不可再生性質,重癥ACI具有非常高的致殘率,給家庭帶來了沉重的負擔[2]。因此,早期診斷重癥ACI,恢復腦組織血液供應減緩腦損傷非常重要。miRNA可以通過減少巨噬細胞中的脂質形成來減少泡沫細胞的形成,還可以通過影響炎癥因子的產生來調節動脈粥樣硬化。研究顯示,動脈粥樣硬化組織樣本中miR-206的表達降低[3-4]。與正常對照組相比,ACI患者血清中miR-210的表達顯著增加[5],循環miR-210具有作為ACI早期診斷新型生物標志物的潛力[6]。目前,影像技術主要用于ACI患者的診斷和治療,掃描成像需要很長時間,患者在檢測過程中長時間保持相同的姿勢,活動會造成運動偽影,從而給ACI疾病的診斷和治療帶來的影響[7]。本研究通過探究miR-206和miR-210在重癥ACI患者血清中的水平變化,旨在探討二者在重癥ACI中的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2021年6月至2022年6月在黃河三門峽醫院收治的重癥ACI患者96例為重癥ACI組,男性56例,女性40例,年齡在30～65歲之間,平均年齡為(45.00±5.32)歲,體質指數(BMI)為(22.46±3.41)kg/m2。同期收集在醫院治療的輕型ACI患者90例為輕型ACI組,男性50例,女性40例,年齡在28～68歲之間,平均年齡為(45.50±5.64)歲,BMI為(22.57±3.57)kg/m2。選擇同期在醫院體檢健康的志愿者94例為對照組,男性52例,女性42例,年齡在31～65歲,平均年齡為(46.00±5.54)歲,BMI為(22.48±3.73)kg/m2。三組一般資料比較差異無統計學意義(P>0.05)。納入標準:(1)符合《中國急性缺血性腦卒中診治指南2014》有關重癥腦梗死的診斷標準[8]。(2)均為首次發病的患者且發病時間≤24 h。排除標準:(1)患有惡性腫瘤的患者;(2)患有傳染性疾病的患者;(3)處于妊娠期或者哺乳期的患者;(4)患有免疫性疾病的患者;(5)肝臟、腎臟功能障礙的患者;(6)無法正常交流的患者。本研究已通過本院倫理委員會審核批準,患者及其家屬對本研究均知情并自愿簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1腦梗死體積計算 對所有患者入院時進行頭顱CT檢測,計算腦梗死體積,腦梗死體積=長×寬×CT陽性層數×層厚×1/2。

1.2.2美國國立衛生研究院卒中量表(NIHSS)評分 對所有患者入院時進行NIHSS評分統計[9]。

1.2.3miR-206和miR-210的表達水平測定 抽取所有患者入院當天就診和對照組體檢當天清晨靜脈血10 mL,靜置20 min,以4 500 rpm/min離心15 min,離心半徑為10 cm。收集上清液放置于-20℃冰箱內待用。使用TRIzol試劑(賽默飛世爾科技公司)提取總RNA,然后將總RNA逆轉錄合成cDNA(上海研卉生物科技有限公司)。qRT-PCR檢測miR-206和miR-210的相對表達水平(U6作為內參),引物由南京擎科生物科技有限公司合成,見表1,采用2-ΔΔCt算法計算miR-206和miR-210表達水平。

表1 qRT-PCR引物序列

2 結果

2.1 一般資料比較

與輕型ACI組相比,重癥ACI組NIHSS評分、腦梗死體積顯著升高(P<0.05)。3組性別、年齡、BMI比較差異無統計學意義(P>0.05)。見表2。

表2 一般資料比較

2.2 三組miR-206和miR-210的表達水平比較

重癥ACI組miR-206的表達水平顯著低于輕型ACI組及對照組,輕型ACI組顯著低于對照組;重癥ACI組miR-210的表達水平顯著高于輕型ACI組及對照組,輕型ACI組顯著高于對照組(P<0.05)。見表3。

表3 三組miR-206和miR-210的表達水平比較

2.3 miR-206和miR-210相關性分析

相關性分析顯示,重癥ACI患者血清中miR-206和miR-210表達水平呈負相關關系(r=-0.366,P<0.001)。見圖1所示。

圖1 miR-206和miR-210相關性分析

2.4 ROC曲線分析血清miR-206和miR-210對重癥ACI的診斷價值

ROC曲線顯示,miR-206和miR-210診斷重癥ACI發生的ROC曲線下面積(AUC)分別為0.841(95%CI:0.782～0.900)和0.892(95%CI:0.874～0.950),截斷值分別為0.826和1.325,敏感度分別為75.00%和81.25%,特異性分別為80.00%和77.78%。兩者聯合診斷重癥ACI的AUC為0.946(95%CI:0.917～0.975),其敏感度、特異性分別為89.58%和66.67%,其中二者聯合診斷的AUC高于miR-206和miR-210單獨診斷的AUC值(Z=21.203,P<0.001;Z=35.634,P<0.001),見表4、圖2。

圖2 ROC曲線分析血清miR-206和miR-210對重癥ACI的診斷價值

表4 血清miR-206和miR-210對重癥ACI的診斷效能

2.5 影響重癥ACI發生的Logistic多因素回歸分析

將重癥ACI是否發生作為因變量,將NIHSS評分、腦梗死體積、miR-206和miR-210表達水平作為自變量納入Logistic回歸分析。分析結果顯示,NIHSS評分、腦梗死體積、miR-206和miR-210表達是重癥ACI發生的影響因素(P<0.05)。見表5。

表5 影響重癥ACI發生的Logistic多因素回歸分析

3 討論

重癥ACI是一種由大腦血液供應受阻引起的腦損傷,患者通常突然發作,會在短時間內出現癥狀,其高致殘率嚴重影響了患者的生活質量[10]。在大多數狀況下,重癥ACI的發病突然,腦梗進展迅速,如果沒有早期診斷并給予及時的治療,患者會錯過最佳搶救時間,因此,積極尋找能夠早期診斷重癥ACI疾病的標志物具有重要意義。

研究表明,miRNA是神經發育和各種神經系統疾病的重要介質[11]。MiR-206具有500多個靶基因,主要參與信號傳導和生物合成調控等生物過程[12]。研究發現,冠心病患者的內皮祖細胞和血漿中miR-206低表達,心臟病患者循環血液中miR-206表達降低,這與肺動脈收縮壓升高相關[13-14]。血管平滑肌細胞參與斑塊穩定和血管重塑,在動脈粥樣硬化的形成中起重要作用,miR-206的降低會降低平滑肌細胞的相對存活率[15]。此外,miR-206在糖尿病和高脂血癥大鼠的腎動脈組織中表達降低[16]。本次研究中,重癥ACI組miR-206的表達水平顯著低于輕型ACI組及對照組,輕型ACI組顯著低于對照組,表明miR-206的表達水平在一定程度上能夠反映ACI患者的病情發生過程,miR-206表達水平能夠反映神經系統疾病的發展。Logistic回歸分析顯示,miR-206表達是重癥ACI發生的影響因素,提示miR-206可能參與重癥ACI的整個病理過程,對重癥ACI是否發生的判斷有一定的臨床意義。

miR-210是一種缺氧誘導的miRNA,在腦缺血中起多種作用[17]。目前發現用miR-210抑制劑預處理顯著減輕缺氧缺血誘導的腦梗死面積大小,表明miR-210在腦損傷的病理生理學中具有重要意義[18]。研究表明,miR-210的上調誘導促凋亡基因半胱天冬酶3表達并增加內皮細胞凋亡[19]。缺血性卒中和缺氧大腦或培養的神經細胞中miR-210水平急劇升高[20]。本次研究中,重癥ACI組miR-210的表達水平顯著高于輕型ACI組及對照組,輕型ACI組顯著高于對照組,表明miR-210參與重癥ACI的發生發展過程,miR-210的表達水平與腦梗死大小有關。Logistic回歸分析顯示,miR-210表達是重癥ACI發生的影響因素,提示miR-210在腦損傷中發揮重要作用。 相關性分析顯示,重癥ACI患者血清中miR-206和miR-210表達水平呈負相關關系,表明二者共同參與重癥ACI的病情變化。二者聯合診斷重癥ACI的AUC高于miR-206和miR-210單獨診斷的AUC值,二者聯合診斷ACI發生的敏感度高于單一指標,表明監測miR-206和miR-210的表達水平有助于重癥ACI的早期診斷。

綜上所述,重癥ACI患者血清中miR-206呈低表達,miR-210呈高表達,二者可以作為監測病情嚴重程度的指標,有潛力成為診斷重癥ACI的生物標志物,具有重要的臨床價值。但本次研究納入樣本數量較少,后續需要加大樣本量更深一步進行研究。