胃癌組織miR-597、miR-3188表達與患者臨床病理特征及預后的關系

袁志鵬,鄭銳年△,袁淑卿,陳鏡塘,吳依芬

1.廣東醫(yī)科大學,廣東湛江 524023;2.東莞市人民醫(yī)院腫瘤內科,廣東東莞 523000;3.東莞市婦幼保健院超聲科,廣東東莞 523000;4.汕頭大學醫(yī)學院,廣東汕頭 515041

胃癌是常見惡性腫瘤之一,發(fā)病率在全球范圍內居第五位,死亡率在癌癥原因死亡中排第3位,全球胃癌發(fā)病率在地理分布上差異廣泛,高發(fā)地區(qū)約是低發(fā)地區(qū)的15～20倍[1]。在我國,胃癌是最常見的高發(fā)惡性腫瘤之一,其發(fā)病機制尚不明晰,但通常認為與幽門螺桿菌感染、遺傳因素、環(huán)境因素和飲食習慣有關[2]。近年來,盡管胃癌的診斷技術和治療策略取得了較大的提升,但是胃癌患者術后5年生存率只有25%左右,臨床評估患者預后的局限性是造成這種現象的主要原因之一[3]。因此,尋找精準評估外患者預后的指標對提高患者生存率具有重要價值。

非編碼RNA是細胞生物學重要的一員,其參與了腫瘤包括胃癌的發(fā)生和發(fā)展。胃癌中研究最多的非編碼RNA包括微小RNA(miRNA)、長鏈非編碼RNA和環(huán)狀RNA,它們具有調節(jié)細胞增殖、凋亡和侵襲及參與胃癌的轉移的作用[4]。其中,miRNA在基因表達調控中發(fā)揮著重要作用,miR-597位于人類染色體8p23.1,已有研究表明miR-597可以抑制乳腺癌的發(fā)生和發(fā)展[5]。miR-3188可能是乳腺癌、胃癌的治療靶點[6]。目前關于胃癌組織中miR-597和miR-3188表達與患者預后的關系尚鮮見報道,因此,本研究分析胃癌患者組織中miR-597和miR-3188表達情況及其與患者臨床病理特征的關系,并探討了二者對患者預后的影響。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2019年1月至2020年6月在東莞市人民醫(yī)院住院并行手術治療的96例胃癌患者作為研究對象,收集患者術中切除的胃癌組織和癌旁組織(距離癌組織>5 cm)標本。96例胃癌患者年齡44～78歲、平均(61.27±8.33)歲,男49例、女47例。收集患者年齡、性別、腫瘤最大徑、TNM分期、淋巴結轉移、組織分級等臨床病理資料。納入標準:(1)經胃鏡和術后病理確診為原發(fā)性胃癌;(2)首次確診;(3)入組前1周未服用激素類藥物;(4)年齡>18歲,術中成功獲取組織標本并保存完整,隨訪資料齊全;(5)患者入院前未進行過手術、放療、化療等治療。排除標準:(1)合并有其他腫瘤;(2)伴有肝、腎或其他臟器功能障礙;(3)有自身免疫性疾病、全身感染性疾病。本研究獲得東莞市人民醫(yī)院倫理委員會審核批準后實施。所有要就對象詳知此項研究內容,并自愿簽署同意書。

1.2方法 取研究對象術中胃癌組織和癌旁組織置于-80 ℃冰箱保存待測。組織總RNA按照Trizol試劑(上海文韌生物科技有限公司)操作步驟進行分離提取,后進行濃度和純度測定,按逆轉錄試劑盒(德國Qiagen公司)操作步驟逆轉錄合成cDNA,采用ABI 7500型實時熒光定量PCR(RT-PqCR)儀(美國ABI公司)檢測組織中miR-597、miR-3188的相對表達量,U6為內參。所有引物均由上海生工生物工程有限公司合成,引物序列見表1。使用2-ΔΔCt方法(Ct為循環(huán)閾值)計算目的基因miR-597、miR-3188的相對表達量。

表1 引物序列

1.3隨訪 所有患者均進行電話隨訪或門診隨訪,第1年每3個月進行1次隨訪,主要以門診復查的方式進行,第2年每6個月進行1次隨訪,主要以電話隨訪的方式進行,第3年每1年進行1次隨訪。當患者出現癌癥復發(fā)或死亡時則隨訪終止,患者隨訪率為100%。生存時間定義為術后至患者死亡或隨訪終止的時間。

2 結 果

2.1胃癌組織和癌旁組織miR-597、miR-3188表達比較 與癌旁組織相比,胃癌組織中miR-597和miR-3188表達水平明顯降低(P<0.05)。見表2。

表2 胃癌組織和癌旁組織miR-597、miR-3188表達比較

2.2胃癌組織miR-597、miR-3188表達與患者臨床病理特征的關系 以胃癌組織miR-597(0.46)和miR-3188(0.39)表達水平的中位數為臨界值,將胃癌患者分為miR-597高表達48例,miR-597低表達48例;miR-3188高表達48例,miR-3188低表達48例。結果顯示,miR-597表達水平與患者年齡、性別、腫瘤最大徑、浸潤深度無相關性(P>0.05),與TNM分期、淋巴結轉移、腫瘤分化程度有關(P<0.05);miR-3188表達水平與患者年齡、性別、腫瘤最大徑無相關性(P>0.05),與TNM分期、淋巴結轉移、浸潤深度、腫瘤分化程度有關(P<0.05)。見表3。

2.3胃癌組織miR-597、miR-3188表達與患者預后的關系 Kaplan-Meier分析結果顯示,胃癌組織miR-597高表達患者3年生存率(30/48,62.50%)高于miR-597低表達患者(14/48,29.17%),胃癌組織miR-3188高表達患者3年生存率(33/48,68.75%)高于miR-3188低表達患者(11/48,22.92%),差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見圖1、2。

圖1 胃癌組織miR-597表達與患者3年總生存率的關系

圖2 胃癌組織miR-3188表達與患者3年總生存率的關系

2.4多因素COX回歸分析胃癌患者預后的影響因素 單因素分析顯示,miR-597、miR-3188、TNM分期、淋巴結轉移、腫瘤分化程度均與患者預后有關(P<0.05);以胃癌患者3年內是否死亡為因變量,以miR-597、miR-3188、TNM分期、淋巴結轉移、腫瘤分化程度為自變量進行多因素COX回歸分析,結果顯示,TNM分期、淋巴結轉移是胃癌患者死亡的獨立危險因素(P<0.05),miR-597、miR-3188是胃癌患者死亡的保護因素(P<0.05)。見表4、5。

表4 胃癌患者預后死亡的單因素分析

表5 多因素COX回歸分析胃癌患者預后的影響因素

3 討 論

胃癌是導致癌癥患者死亡的第三大因素,僅次于肺癌和腸癌,胃癌患者約占全世界癌癥患者總數的6%。據統(tǒng)計,2020年全球范圍內新增癌癥病例超過100萬,死亡病例約77萬[7]。胃癌的發(fā)展是一個長期的過程,主要是從正常黏膜發(fā)展到慢性胃炎再到黏膜萎縮、腸道化生、上皮內化膿最終發(fā)展成為胃癌。這一過程可能會持續(xù)數年,長期的炎癥可能是導致胃癌發(fā)展的主要致病因素[8]。臨床中胃癌患者的治療方式有化療、分子靶向治療、免疫治療等[9-10],盡管治療手段和技術發(fā)展迅速,但是患者術后的生存情況仍不容樂觀,因此,尋找與胃癌患者預后關系密切的指標具有重要意義。

miRNA是一種非編碼RNA,近年來在腫瘤中被廣泛研究,尤其是在癌癥的診斷和預后中,miRNA發(fā)揮著重要作用[11]。研究表明,在胃癌的發(fā)展進程中,miRNA會影響胃癌細胞的生長、侵襲和凋亡過程,其可激活磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信號通路,促進胃癌細胞生長和遷移,并對胃癌細胞的凋亡也起到抑制效果[12]。有研究顯示,miR-4513可以靶向抑制賴氨酸乙酰轉移酶6B,致使胃癌細胞增殖和上皮-間充質轉化,從而增強胃癌細胞的抗凋亡能力[13]。杜鑫等[14]研究結果表明,miR-183高表達和miR-144-3p低表達均是老年胃癌患者的獨立影響因素,且與患者的預后較差有關。黃金麗等[15]研究也發(fā)現,miR-501通過靶向下調抑癌基因eIF4E3的表達,進一步促進胃癌細胞的增殖、遷移和侵襲能力,同時指出miR-501可能成為胃癌治療的潛在靶點。此外,miRNA可通過抑制PTEN/PI3K/AKT通路及其部分通路、上皮-間充質轉化過程、Wnt/β-連環(huán)蛋白信號通路等發(fā)揮抑癌作用。李欣等[16]研究發(fā)現,miR-30a-5p主要通過負調控靶基因SNAIL1的表達,抑制BGC-823胃癌細胞的遷移,從而發(fā)揮其抑癌作用。

目前,miR-597在乳腺癌及胰腺癌癌組織中呈低表達,主要發(fā)揮抑癌作用[17]。本研究結果顯示,miR-597在胃癌組織中低表達且miR-597高表達患者3年生存率可達62.50%,顯著高于miR-597低表達患者,這一結果與文獻[17]研究一致,進一步多因素COX分析結果表明,miR-597是胃癌患者的保護因素,提示miR-597可能在作為抑癌因子在胃癌中發(fā)揮作用。研究表明,miR-3188可在多種癌癥的發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮重要作用,在鼻咽癌中miR-3188作為腫瘤抑制因子可以直接靶向mTOR參與FOXO1介導的細胞生長抑制、腫瘤發(fā)生和鼻咽癌化療耐藥等[18]。miR-3188在肝癌組織中呈高表達,miR-3188在肝癌細胞中過表達促進了肝癌細胞的生長和增殖,同時抑制了肝癌細胞的凋亡,miR-3188可以靶向Cxcl14調節(jié)肝癌細胞的生長和凋亡[19]。而王坤男等[20]分析發(fā)現,miR-3188在胃癌細胞中呈低表達,miR-3188過表達能夠抑制胃癌細胞HGC-27的侵襲、增殖和遷移并促使其進行凋亡,miR-3188可能在胃癌的發(fā)生和發(fā)展過程起抑癌作用。本研究結果顯示,miR-3188在胃癌組織中呈低表達,miR-3188高表達患者3年生存率顯著高于miR-3188低表達患者,這一結果與文獻[20]一致。多因素COX分析結果表明,miR-3188是胃癌患者的保護因素,提示miR-3188也可能在作為抑癌因子在胃癌組織中發(fā)揮作用。miR-597和miR-3188表達與胃癌患者病理特征關系分析結果表明,miR-597和miR-3188表達均與TNM分期、淋巴結轉移、腫瘤分化程度有關。多因素COX分析結果顯示,TNM分期、淋巴結轉移均是胃癌患者死亡的獨立危險因素,因此,miR-597和miR-3188可能參與了胃癌的發(fā)生和發(fā)展,且與胃癌患者預后密切相關。

綜上所述,miR-597和miR-3188均在胃癌組織中低表達,二者表達均與TNM分期、淋巴結轉移、腫瘤分化程度有關;miR-597和miR-3188高表達患者的生存率高于低表達患者,二者均是胃癌患者死亡的保護因素。miR-597和miR-3188有可能是評估胃癌患者預后的重要指標。