夫西地酸聯合黃芩素對金黃色葡萄球菌的體內外抗菌作用研究

摘要：目的 研究夫西地酸（fusidic acid， FA）聯合黃芩素（baicalein， BE）在體內和體外對13株金黃色葡萄球菌的抗菌特性。方法 采用微量肉湯稀釋法和微量棋盤法測定最小抑菌濃度（minimum inhibitory concentration， MIC）和部分抑菌濃度指數（fractional inhibitory concentration index， FICI）。采用FICI評價綜合效果，采用時間-殺菌曲線法測定殺菌效果。利用瓊脂二倍稀釋法對5株金黃色葡萄球菌的防耐藥突變濃度（mutant prevention concentration， MPC）和防耐藥突變選擇窗（mutant selective window， MSW）進行測定，比較夫西地酸單獨應用及聯用黃芩素后防耐藥突變窗的變化。使用金黃色葡萄球菌感染肺炎小鼠模型進行體內實驗，測定FA和BE單獨和聯合治療后生命體征、肺臟指數、菌落定植數和血清炎癥因子的變化。結果 研究發現，FA與BE組合的協同效應為53.8%，相加效應為30.8%，無關效應為15.4%。此外，研究人員觀察到，當FA與BE以特定濃度（分別為1MIC和1/2MIC）結合時，在24 h后對3株金黃色葡萄球菌（SA-ATCC29213、MRSA-ATCC43300和MRSA-210702212）均有殺菌作用。FA對這些菌株的MPCs為128～256 μg/mL，而MSWs為64～256 μg/mL。而當BE加入混合物時，菌株的MPCs降低到16～32 μg/mL，MSWs降低了8～16倍，說明BE提高了FA對這些菌株的抗菌活性。FA和BE的組合對金黃色葡萄球菌肺炎小鼠的生命體征影響很小。小鼠肺臟指數、肺部金黃色葡萄球菌定植數、血清中炎癥因子等實驗結果表明，FA和BE組合對金黃色葡萄球菌的影響很小，但聯合用藥組對小鼠肺炎的治療效果明顯優于單藥組。結論 FA單獨應用時，MSW較寬，聯用BE后，FA的MSW明顯縮小。FA聯合BE有協同殺菌效應，治療小鼠金葡菌肺炎效果較單藥組好。

關鍵詞：夫西地酸；黃芩素；金黃色葡萄球菌；防耐藥突變窗；小鼠肺炎模型

中圖分類號：R978.1 文獻標志碼：A

Antibacterial effect of fusidic acid combined with baicalein on Staphylococcus aureus in vitro and in vivo

Feng Qianqian1， Chen Miao1， He Jiali1， Zhang Chenyu2， Xu Rong2， and Chen Chunlin1

（1 College of Chemistry and Biological Engineering， Yichun University， Yichun 336000;

2 Yichun People’s Hospital， Yichun 336000）

Abstract Objective To investigate the antibacterial properties of fusidic acid （FA） in combination with baicalein （BE） against 13 strains of Staphylococcus aureus （SA） both in vivo and in vitro. Methods The minimum inhibitory concentration （MIC） and fractional inhibitory concentration index （FICI） were determined using the microbroth dilution method and the micro checkerboard method. The FICI was used to evaluate the comprehensive effect， while the bactericidal effect was determined using the time-killing curve method. The mutant prevention concentration （MPC） and the mutant selective window （MSW） were determined using the agar double dilution method for the comparison of the change in mutation window of drug resistance after adminstration of FA alone and in combination with BE. In vivo experiments were conducted using a mouse model of pneumonia infected with SA， and the changes in vital signs， lung organ index， colony colonization number， and serum inflammatory factors were measured following single and combined treatment with FA and BE. Results The study found that the combination of FA and BE had a synergistic effect of 53.8%， an additive effect of 30.8%， and an irrelevant effect of 15.4%. Furthermore， the researchers observed that when FA was combined with BE at specific concentrations （1 MIC and 1/2 MIC， respectively）， it had a bactericidal effect on three strains of" SA （SA-ATCC29213， MRSA-ATCC43300， and MRSA-210702212） after 24 hours. The MPCs of FA for these strains ranged from 128～256 μg/mL， while the MSWs ranged from 64～256 μg/mL. However， when BE was added to the mix， the MPCs of the strains decreased to 16～32 μg/mL and the MSWs were reduced by 8～16 times， indicating that BE enhanced the antimicrobial activity of FA against these strains. The combination of FA and BE had minimal impact on the vital signs of mice with SA pneumonia. The experiment showed that the combination of FA and BE had little effect on the lung organ index as well as on the colony colonization number of SA in the lungs and serum inflammatory factors. However， the therapeutic effect on mouse pneumonia was significantly better when compared to the single-drug group. Conclusion The MSW of FA was wider when applied alone， and the MSW of FA was significantly reduced after combined with BE. FA combined with BE has a synergistic bactericidal effect， which is better than a single drug group in the treatment of SA pneumonia.

Key words Fusidic acid; Baicalein; Staphylococcus aureus; Resistant mutation window; Mouse pneumonia model

金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus， SA）是一種常見的人類病原微生物，可引發多種感染，如皮膚和軟組織感染、心內膜炎、骨髓炎、菌血癥和致死性肺炎等疾病，具有較高的發病率和病死率[1-3]。夫西地酸（FA）是一種窄譜抗菌素，毒性低，耐藥性低，與其他抗生素沒有交叉耐藥性，適用于治療包括耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（methicillin-resistant Staphylococcus aureus，MRSA）在內的革蘭陽性菌引起的各種感染[4-5]。研究發現夫西地酸長期單獨治療易發生耐藥，但與其他抗菌藥物聯合治療時的耐藥率普遍很低[6-8]。黃芩素（BE）抗菌效力強，抗菌譜廣，被認為是一種很有前途的新型有效增效抗菌劑。目前尚未有學者就FA聯合BE對細菌耐藥性的影響進行過研究。因此，本實驗對FA聯合BE對SA和MRSA的抗菌效應進行體內外研究，以期為臨床感染SA特別是MRSA的患者提供合理的用藥方案，為臨床合理應用抗菌藥物從而更加有效的控制細菌感染性疾病提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物

SPF級ICR小鼠，鼠齡8周，體重18～22g。購自湖南斯萊克景達實驗動物有限公司，許可證號：SCXK（湘）2019-0004。

1.1.2 菌株

金黃色葡萄球菌標準菌株SA-ATCC29213，耐甲氧西林金黃色葡萄球菌標準菌MRSA-ATCC43300為宜春學院天然藥物活性成分研究重點實驗室保存的菌株。臨床菌株SA-211007074、SA-210927051、MRSA-210702212、MRSA-211226209、MRSA-220114200、MRSA-211106118、MRSA-220109111、MRSA-210703107、MRS-220117105、MRSA-211108103和MRSA-220106003均分離自宜春市人民醫院檢驗科。菌株采用Phoenix-100型全自動分析儀鑒定并用K-B藥敏紙片法進行藥敏實驗，藥敏結果判定參照2021版美國臨床和實驗室標準協會（CLSI）[9]，分離菌株均用30%甘油凍存于-20 ℃冰箱中。

1.1. 3 藥品與試劑

夫西地酸對照品，規格1 g/瓶，F134821，黃芩素對照品，5 g/瓶，B107324（上海阿拉丁生化科技股份有限公司）；M-H瓊脂，M-H肉湯培養基（青島高科園海博生物技術有限公司）；小鼠白介素6（IL-6）ELISA試劑盒和小鼠腫瘤壞死因子α（TNF-α）ELISA試劑盒（上海科順生物科技有限公司）。

1.1.4 儀器

WGZ-XJ型細菌濁度儀（上海昕瑞儀器儀表有限公司），DGL-50B型立式蒸汽滅菌鍋（江蘇登冠醫療器械有限公司），TECAN Infinite 200PRO型全波段酶標儀（北京世貿遠東儀器有限公司）。

2 實驗方法

2.1 最低抑菌濃度（MIC）的測定

通過肉湯二倍稀釋法測定13株金葡菌對FA和BE的MIC。利用微量棋盤法測定13株金葡菌對FA聯合BE的聯合MIC，酶標儀600 nm處讀取結果，同時結合肉眼觀察判定MIC。最后確定2種藥物組合產生最佳效應時各自的濃度，并計算出部分抑菌濃度（FICI），每組實驗需重復3次。計算公式：FICI=MICA藥聯用/MICA藥單用+MICB藥聯用/MICB藥單用。判定標準：若FICI≤0.5，為協同作用；若0.5＜FICI≤1，為相加作用；若1＜FICI≤2，表無關作用；若FICI＞2，為拮抗作用[10]。

2.2 時間殺菌曲線

根據已測定的單藥MIC結果，選擇亞抑菌濃度1/4×MIC、1/2×MIC組的BE與亞抑菌濃度1/2×MIC、1×MIC組的FA單藥或聯合用藥與金葡菌SA-ATCC29213，MRSA-ATCC43300和MRSA-210702212菌懸液（含菌終濃度為1×105 CFU/mL）共同孵育。設置1×105 CFU/mL菌液為陰性對照組。分別在第0、3、6、12和24 h每管取菌液100 μL，用M-H肉湯梯度稀釋適當倍數后均勻涂布到無菌空白MH瓊脂平板上，37 ℃下培養24 h后對菌落進行計數，平行操作3次。判斷標準如下：細菌菌落數較初始細菌數的對數值降低≥3為殺菌效應；聯用后細菌菌落數較最有效單藥對數值降低gt;1且lt;2為相加作用，降低≥2為協同作用[11]。

2.3 FA聯合BE對金黃色葡萄球菌防耐藥突變窗（MSW）的影響

2.3.1 菌懸液的制備

將凍存的金黃色葡萄球菌從-20℃冰箱中取出，室溫復蘇后用移液槍吸取2 mL菌液于200 mL M-H肉湯培養基中，37 ℃培養18 h。分裝于50 mL離心管中，常溫離心機4000 r/min離心10 min，棄去上清液，調整細菌濃度為3×1010" CFU/mL備用。

2.3.2 FA單用時藥物溶液配制及瓊脂平板的制備

FA和BE的溶劑均為二甲亞砜，配制成濃度為5120 μg/mL的藥物儲備液保存于冰箱中，臨用前稀釋為所需要的濃度。按照二倍稀釋的方法，制備成一系列濃度梯度的藥物溶液（二甲亞砜的濃度小于1%則視為對細菌無影響）[11]。測定時加入不同濃度的抗菌藥物1 mL于19 mL新鮮配制的滅菌瓊脂培養基內，混勻后迅速倒入90 mm的培養皿中，待瓊脂冷卻凝固后，即得含單藥的瓊脂平板[12]。

2.3.3 FA聯用BE時藥物溶液配制和瓊脂平板的制備

藥液配制方法同上，參考已測定的MIC和防耐藥突變濃度（mutant prevention concentration， MPC）數據，以倍比稀釋法配制1/2×MIC～MPC不同濃度的FA藥物溶液和1/8×MIC～5/2×MIC不同濃度的BE藥物溶液。將上述不同濃度的FA和BE兩兩聯合，向18 mL瓊脂培養基中加入每藥各1 mL，混勻后迅速倒入平板中，冷卻后即為不同濃度組合的含藥平板。

2.3.4 FA單用及聯用BE后對金黃色葡萄球菌MPC的測定

單藥MPC的測定：在每個不同濃度的含藥平板上均勻涂布100 μL 3×1010 CFU/mL的菌液，37 ℃培養72 h，每個濃度含藥平板做3個平行對照。肉眼觀察，記錄平板菌落數，無菌生長平板對應的最小藥物濃度即為MPC。對于接近MPC藥物濃度的菌株，篩選出來后，傳代培養2次，再次接種于原藥物濃度篩選的平板上，以確認該菌株是耐藥突變株。

兩藥聯用時MPC的測定：測定、觀察與記錄的方法同上，無菌生長平板對應的最小藥物濃度組合即為藥物聯用后對金葡菌的MPC值，按下述公式計算MSW：MSW=MPC/MIC，比較兩藥聯合后對金葡菌MSW的影響。

2.4 FA聯用BE對金黃色葡萄球菌小鼠肺炎的保護作用

2.4.1 肺炎模型建立

適應性喂養小鼠在12 h黑/12 h白交替，溫度（23±2） ℃，濕度55%±5%的室內環境中一周。制備細菌濃度為1×109 CFU/mL的菌懸液。感染當天用0.5%戊巴比妥鈉（0.1 mL/10 g）對小鼠進行腹腔注射使其麻醉后，在小鼠鼻腔前端滴注30 μL 1×109 CFU/mL菌液，并保持30 s直立狀態，使菌液能正常進入氣管及肺泡中，從而誘發肺炎[12]。本實驗依據國內外有關規范，并經宜春學院醫學倫理委員會批準，本實驗批準號為倫審科第2022（016）號。

2.4.2 肺炎模型實驗分組

小鼠生命體征、肺組織病理觀察、臟器指數、肺組織菌落數及血清炎性因子測定實驗中，將小鼠隨機分為5組，每組8只：正常組、模型組、夫西地酸組（65 mg/kg，每日3次）、黃芩素組（100 mg/kg，每日2次）和聯合組（夫西地酸65 mg/kg，每日3次+黃芩素100 mg/kg，每日2次）。按照“2.4.1”方法使小鼠感染2 h后，各治療組小鼠灌胃不同劑量的藥物，正常組和模型組灌胃同體積生理鹽水。小鼠感染模型建立后，連續灌胃72 h，每24 h觀察各組小鼠體重、進食、飲水和精神狀況等體征進行觀察并記錄。

2.4.3 肺組織臟器指數

實驗結束后將小鼠頸椎脫臼處死，無菌操作下取小鼠肺組織。將上述肺臟，去除組織周圍脂肪和結締組織，稱重并按分組編號記錄，按下述公式計算肺臟器指數。肺臟指數=肺臟濕重（g）/空腹體重（g）×100%。

2.4.4 肺組織菌落數及病理觀察

實驗結束后，處死小鼠，無菌操作下取小鼠肺組織，觀察、記錄肺臟的眼觀變化。用4%福爾馬林溶液固定肺臟，進行石蠟包埋、切片、HE染色后觀察肺臟病理組織學變化，采集圖像。往無菌研磨器中加入1 mL滅菌生理鹽水，冰上進行組織勻漿。將勻漿后的液體稀釋適當倍數后，用移液槍吸取100 μL后，均勻涂布于MH瓊脂平板上，37 ℃培養24 h。對平板上的菌落進行計數，并根據稀釋度計算出每組小鼠肺組織中的菌落數。

2.4.5 小鼠血清炎性因子測定

實驗結束后，眼眶取血1 mL于1.5 mLEP管內，3000 r/min，4 ℃離心10 min，取上清液保存于-80 ℃待測。血清的IL-6和TNF-α檢測具體步驟均按照該試劑盒的使用說明書進行，在450 nm波長的酶標儀下依次測量各孔的吸光值。

2.5 統計學分析

實驗數據采用Graphpad Prism 8.0進行統計學分析及處理，多個樣本之間使用單因素方差分析；t檢驗分析各組小鼠肺組織臟器指數及細菌數等生化指標的差異。

3 結果

3.1 FA和BE單用及聯用對金黃色葡萄球菌的作用效果

除MRSA-210702212、MRSA-210703107和MRSA-220117105外，其余幾株金葡菌對FA表現敏感（MIC≤1 μg/mL）[14]。合用BE后，這兩株金葡菌對FA的敏感性均有所提高。FA聯合BE有53.8%為協同作用，30.8%為相加作用，15.4%為無關作用。反映出FA聯合BE后可提高對金葡菌的抑制作用。結果見表1。

3.2 FA和BE單用及聯用對金葡菌的殺菌曲線

FA與BE聯用對SA-ATCC29213及MRSA-ATCC43300的殺菌曲線顯示，BE（1/2×MIC）與FA（1/2×MIC）聯用在12 h時細菌菌落數的對數值較FA及BE單藥應用時下降，且相比降低大于2，說明兩藥聯用具有協同效應，且隨著聯用濃度的增大（1×MIC FA）抑菌效果更明顯，在24 h細菌菌落數的對數值與初始接種數的對數值相比減少大于3，顯示殺菌作用。FA與BE聯用對臨床菌株MRSA-210702212的殺菌曲線顯示，BE（1/2×MIC）與FA（1/2×MIC）聯用在3 h細菌菌落數的對數值與初始接種數的對數值相比減少大于1但小于2，說明兩藥聯用具有相加效應，在12 h細菌菌落數的對數值與初始接種數的對數值相比減少大于3，顯示殺菌作用。隨著FA（1×MIC）濃度增大，聯用組合在3h時細菌菌落數的對數值較單藥應用時下降大于2，顯示協同作用，在12 h顯示殺菌作用（圖1a～c）。

3.3 FA聯合BE對金黃色葡萄球菌防耐藥突變窗的影響

3.3.1 FA對金黃色葡萄球菌單獨用藥時的MPC和MSW

FA對金葡菌SA-ATCC29213、MRSA-ATCC43300和MRSA-210702212的MPC值分別為256、256和128 μg/mL；MSW為512、256和64。FA的MSW偏寬，其防突變能力較弱，單用易產生耐藥現象（表2）。

3.3.2 FA聯合BE對SA-ATCC29213、MRSA-ATCC43300和MRSA-210702212MSW的影響

當BE濃度為3/2×MIC（192 μg/mL），FA濃度達到32×MIC（16 μg/mL）即可抑制SA-ATCC29213耐藥突變株的產生，即FA與BE聯合應用（32×MIC+3/2×MIC）可使FA的MSW縮小16倍。當BE濃度為3/2×MIC（192 μg/mL），FA濃度達到16×MIC（16 μg/mL）即可抑制MRSA-ATCC43300耐藥突變株的產生，即FA與BE聯合應用（16×MIC+3/2×MIC）可使FA的MSW縮小16倍。當BE濃度為2×MIC（256 μg/mL），FA濃度達到8×MIC（16 μg/mL）即可抑制MRSA-210702212耐藥突變株的產生，即FA與BE聯合應用（8×MIC+2×MIC）可使FA的MSW縮小8倍，能夠明顯縮小FA的MSW，防耐藥突變能力增強。結果詳見表3～5。

3.4 FA聯合BE對金黃色葡萄球菌小鼠肺炎的保護作用

3.4.1 各組小鼠感染金葡菌后的生命體征變化

在感染金黃色葡萄球菌的72 h內，空白對照組小鼠的體重基本平穩上升，精神狀態良好，食欲較佳，活潑好動。感染金葡菌后的小鼠均出現精神萎靡，食欲不振，運動遲緩，豎毛，弓背的現象，給藥后稍有緩解。但模型組小鼠的體重呈現持續下降現象。單用夫西地酸組和單用黃芩素組的小鼠大部分出現體重下降，但總體下降趨勢沒模型組小鼠明顯。聯合給藥組的小鼠體重基本全部上升，說明夫西地酸聯合黃芩素可以有效減緩金黃色葡萄球菌感染肺炎（圖2）。

3.4.2 小鼠感染金葡菌后的肺組織病理觀察

肉眼觀察各組小鼠肺組織情況：模型組小鼠雙肺呈現粉紅色，質地松軟，表面富有彈性。模型組小鼠的肺組織表現為肺淤血嚴重、顏色暗紅、質地變硬、彈性降低，說明已成功構建金葡菌感染小鼠肺炎模型。夫西地酸和黃芩素組的小鼠肺組織與模型組小鼠相比，病理癥狀減輕，肺部僅有少量淤血。聯合組小鼠與正常組小鼠相比無明顯病理變化（圖3）。

HE染色結果顯示：正常組小鼠血管局部充血、淤血；肺泡壁無明顯增厚。模型組小鼠血管充血、淤血嚴重；局部肺泡壁中度增厚，肺泡間距增寬，支氣管腔內炎性滲出物較多，可見肺間質性肺炎病變。各治療組小鼠肺部也出現血管充血、淤血情況，但程度相對較輕；炎性滲出物較少，肺部損傷程度低于模型組，聯合組小鼠與模型組相比有較大差異（圖4）。

3.4.3 FA聯合BE對金葡菌感染小鼠肺臟器指數的影響

與正常組相比，小鼠接種金黃色葡萄球菌后，肺臟器指數明顯升高，說明小鼠的肺組織出現嚴重水腫。給予夫西地酸和黃芩素分別治療后，其臟器指數均顯著低于模型組，顯示小鼠肺組織水腫程度得到緩解，說明夫西地酸聯和黃芩素對感染金葡菌的小鼠治療效果較好（圖5）。

3.4.4 FA聯合BE對金葡菌感染小鼠肺內細菌計數的影響

模型組、黃芩素組、夫西地酸組和聯合組小鼠肺組織細菌菌落數分別為9.63×108、8.14×108、7.6×108和7.09×108 CFU/mL。而夫西地酸與黃芩素聯合治療能明顯降低小鼠肺組織內的細菌菌落數，尤其是活菌個數。而且聯合組小鼠肺組織內細菌菌落數較模型組有極其顯著差異（Plt;0.001），表明夫西地酸與黃芩素聯合治療能更大程度上減輕小鼠感染金黃色葡萄球菌的癥狀（圖6）。

3.4.5 FA聯合BE對金葡菌感染小鼠肺組織內細菌計數的影響

與正常組相比，小鼠接種金黃色葡萄球菌后，肺臟器指數明顯升高，說明小鼠的肺組織出現嚴重水腫。給予夫西地酸和黃芩素分別治療后，其臟器指數均顯著低于模型組，顯示小鼠肺組織水腫程度得到緩解，說明夫西地酸聯和黃芩素對感染金葡菌的小鼠治療效果較好（圖7）。

3.4.6 FA聯合BE對金葡菌感染小鼠血清中炎性因子的影響

與正常組比較，模型組和黃芩素組小鼠血清IL-6和TNF-α含量差異均有極其顯著統計學意義（Plt;0.001），表明模型組小鼠的炎癥反應程度更嚴重。而夫西地酸和聯合組血清中IL-6和TNF-α含量與模型組相比有顯著統計學意義（Plt;0.01），表明夫西地酸聯合黃芩素具有更好的療效。與黃芩酸組和夫西地酸組相比，聯合組血清中的IL-6和TNF-α含量下降趨勢更為明顯，表明聯合組小鼠的炎癥反應程度較低，對治療感染肺炎的小鼠有更好的效果（圖8）。

4 討論

據2021年中國CHINET細菌耐藥性監測結果數據分析，2021年1—12月主要臨床分離菌種中的革蘭陽性菌中只有金黃色葡萄球菌檢出率較高，約占8.93%，其中耐甲氧西林葡萄球菌中的MRSA檢出率為30%[15]。FA是目前為數不多的能安全有效地治療MRSA感染的藥物，因此我們應設法保護FA的臨床應用價值，避免其產生耐藥。研究發現FA與其他類抗生素聯用可以縮小FA的防耐藥突變窗，避免FA耐藥。徐麗麗等[10]將FA分別與頭孢唑林、頭孢丙烯、頭孢曲松聯合作用于金黃色葡萄球菌，發現它們可以顯著降低FA的MSW，防止對FA產生耐藥性。肖瑤等[12]發現將FA與多西環素進行聯合應用后，FA的MSW被顯著縮小，FA發生耐藥性的機率降低。而BE作為一種潛在的臨床治療價值的中藥單體，與其它抗生素聯合應用，可降低細菌發生耐藥性的機率，聯合后的抑菌、殺菌效果較單用抗生素更好。Chang等[16]發現BE（32 μg/mL）與慶大霉素（128 μg/mL）聯用，對萬古霉素耐藥腸球菌的抑制作用可持續48 h，聯用組藥物抑菌效果明顯優于BE單用組，表明BE可與慶大霉素聯合治療萬古霉素耐藥的腸球菌。Cai等[17]的研究證明BE與頭孢噻肟合用后對肺炎克雷伯菌表現出協同抑制作用主要與抑制CTX-M-1基因表達有關。

本實驗研究表明，FA聯合BE后不僅表現出較為強烈的協同殺菌作用，還可顯著降低FA的MPC，明顯縮小FA的MSW，能有效抑制金黃色葡萄球菌耐藥突變菌株的富集，降低FA發生耐藥性的機率。小鼠肺炎模型治療效果也肯定了FA聯合BE治療金黃色葡萄球菌感染肺炎的可行性。這種聯合用藥的方案極大程度上降低了FA的用量，可減少不良反應的發生，給臨床患者帶來福利。但有研究指出BE的口服生物利用度低，可能達不到192 μg/mL[18]。為解決BE生物利用度的問題，Zhou等[19]提出可將BE與磷脂絡合物（BaPC-MD）制成BE磷脂復合物，新型BaPC-MD在不破壞BE和磷脂絡合狀態情況下可通過改善BE的溶解度和滲透性，顯著提高BE的口服生物利用度。

FA與BE協同殺菌效果顯著，原因可能是：①細菌生物膜（Biofilm，BF）是由細菌及其分泌的菌體外多聚物組成的細菌膜狀群體結構，可阻擋抗生素進入菌體內，增加了細菌對抗生素產生耐藥性的機率[20]。而BE可破壞BF，從而增強FA的通透性，有效抑制金黃色葡萄球菌群體感應系統生物膜形成，進一步降低FA對金葡菌的耐藥性。②BE可通過誘導tRNA甲基化酶基因trmD表達，抑制DNA甲基化酶基因adaB及SACOL0346基因的表達及核糖體蛋白的表達，阻礙正常的蛋白質合成過程發揮抗菌效應。而FA主要是通過干擾延長因子G，阻斷核糖體的易位和細菌蛋白質的合成而產生殺菌作用。FA聯合BE可增強對細菌蛋白質的破壞，從而增強抗菌效力。③BE可抑制MRSA產生的青霉素結合蛋白（PBP2a），從而抑制細胞壁合成，增加了FA的細胞穿透性，使其聯用抗菌效應增強[21]。④BE可抑制丙酮酸激酶（PK）酶活性阻斷細菌的能量代謝，從而提高BE的抗菌活性及與FA的協同作用。

目前兩藥的協同作用具體機制有待進一步研究，但BE能增強FA抗MRSA等金葡菌作用，并提高FA的防耐藥性，這將為FA治療MRSA等金葡菌提供有利支持，同時為臨床用藥提供參考。

參 考 文 獻

Long L J， Lin M， Chen Y R， et al. Evaluation of the loop-mediated isothermal amplification assay for Staphylococcus aureus detection： A systematic review and meta-analysis[J]. Ann Clin Microb Anti， 2022， 21（1）： 1-9.

Saleh M M， Yousef N， Shafik S M， et al. Attenuating the virulence of the resistant superbug Staphylococcus aureus bacteria isolated from neonatal sepsis by ascorbic acid， dexamethasone， and sodium bicarbonate[J]. BMC， 2022， 22（1）： 1-17.

Guo Y， Song G， Sun M， et al. Prevalence and therapies of antibiotic-resistance in Staphylococcus aureus[J]. Front Cell Infect Microb， 2020， 10： 107.

張鵬. 熊果酸與夫西地酸聯用對金黃色葡萄球菌的協同抗菌作用[D]. 宜春： 宜春學院， 2022.

Tu B， Cao N， Zhang B， et al. Synthesis of novel fusidic acid derivatives as two-in-one agent with potent antibacterial and anti-Inflammatory activity[J]. Antibiotics， 2022， 11（8）： 1026.

Bourles A，Tristan A，Vandenesch F， et al.A fusidic acid-resistant （PVL+） clone is associated with the increase in methicillin-resistant Staphylococcus aureus in New Caledonia[J]. J Glob Antimicrob Resist， 2022， 30： 363-369.

Hajikhani B， Goudarzi M， Kakavandi S， et al. The global prevalence of fusidic acid resistance in clinical isolates of Staphylococcus aureus： A systematic review and meta-analysis[J].Antimicrob Resist In， 2021， 10（1）： 1-14.

周紅霞， 張永信. 夫西地酸的再評價[J]. 世界臨床藥物， 2003， 24（12）： 725-728.

Humphries R， Bobenchik A M， Hindler J A， et al. Overview of changes to the clinical and laboratory standards institute performance standards for antimicrobial susceptibility testing， M100[J]. J Clin Microb， 2021， 59（12）： e00213-21.

徐麗麗， 陳春林， 劉楨宇， 等. 夫西地酸聯合頭孢類抗生素縮小金黃色葡萄球菌耐藥突變選擇窗的研究[J]. 中國臨床藥理學與治療學， 2016， 21（9）： 995.

易小翠， 李娜， 常國偉， 等．頭孢哌酮舒巴坦聯合磷霉素對多重耐藥鮑曼不動桿菌的體內外抗菌作用研究[J]. 中國臨床藥理學雜志， 2020， 36（9）： 1144-1148.

肖瑤. 夫西地酸聯合多西環素對金黃色葡萄球菌的抗菌作用及防耐藥突變選擇窗的影響[D]. 宜春學院， 2022.

朱淼， 李琳， 張騰龍， 等. 黃芩苷對小鼠金黃色葡萄球菌肺炎的保護作用研究[J]. 北方藥學， 2014， 11（6）： 65-67.

陳舒影， 林純嬋， 盧超慧， 等. 金黃色葡萄球菌臨床分離株對夫西地酸的耐藥性分析[J]. 中國臨床藥理學雜志， 2015， 31（19）： 1971-1973.

胡付品， 郭燕， 朱德妹， 等. 2021年CHINET中國細菌耐藥監測[J]. 中國感染與化療雜志， 2022， 22（5）： 521-530.

Chang P C， Li H Y， Tang H J， et al. In vitro synergy of baicalein and gentamicin against vancomycin-resistant Enterococcus[J]. J Microb Immun Infect， 2007， 40（1）： 56-61.

Cai W， Fu Y， Zhang W， et al. Synergistic effects of baicalein with cefotaxime against Klebsiella pneumoniae through inhibiting CTX-M-1 gene expression[J]. BMC， 2016， 16（1）： 1-9.

郭曉宇， 楊琳， 陳穎， 等. 黃芩素與黃芩苷大鼠體內藥動學比較研究[J]. 中國藥學雜志， 2008， 43（7）： 524-526.

Zhou Y， Dong W， Ye J， et al. A novel matrix dispersion based on phospholipid complex for improving oral bioavailability of baicalein： Preparation， in vitro and in vivo evaluations[J].Drug Delivery， 2017， 24（1）： 720-728.

Jacques M， Malouin F. One Health-One Biofilm[J].Veterinary Research， 2022， 53（1）： 1-4.

馮倩倩， 陳淼， 何嘉麗， 等. 黃芩素抗菌作用研究進展[J].宜春學院學報， 2022， 44（9）： 21-24.