血清miRNA-199a-5p、α-1-B-糖蛋白反義RNA1 水平與腦膠質(zhì)瘤患者術(shù)后復(fù)發(fā)的關(guān)系

單永雙，萬(wàn)學(xué)鋒，王曉英

駐馬店市中心醫(yī)院神經(jīng)外科，河南 駐馬店 463000

腦膠質(zhì)瘤是常見的顱內(nèi)惡性腫瘤之一，發(fā)生于神經(jīng)外胚層衍化而來(lái)的膠質(zhì)細(xì)胞，具有較高的發(fā)病率，占所有顱內(nèi)腫瘤的35.26%～60.96%[1]。手術(shù)切除是腦膠質(zhì)瘤的主要治療方法[2]，但因腦膠質(zhì)瘤多呈浸潤(rùn)性生長(zhǎng)，術(shù)后仍有較高的復(fù)發(fā)率，這是患者預(yù)后較差的主要原因[3]。臨床實(shí)踐表明，腦膠質(zhì)瘤通常會(huì)在術(shù)后短期內(nèi)復(fù)發(fā)，復(fù)發(fā)后的治療效果較差，患者生存率較低[4]。因此，評(píng)估腦膠質(zhì)瘤的復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)，并采取積極的預(yù)防措施，對(duì)于延緩腦膠質(zhì)瘤患者術(shù)后復(fù)發(fā)，延長(zhǎng)患者生存期具有重要意義。既往研究表明，不具備蛋白質(zhì)編碼能力的長(zhǎng)鏈非編碼RNA（long non-coding RNA，lncRNA）參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程，可作為多種腫瘤（包括腦膠質(zhì)瘤）的潛在生物標(biāo)志物[5]。α-1-B-糖蛋白反義RNA1（alpha-1-B glycoprotein antisense RNA 1，A1BG-AS1）是位于染色體19q13.43 的lncRNA，目前已被證實(shí)在肝癌及乳腺癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中具有重要的調(diào)控作用[6-7]。沈風(fēng)彪等[8]研究表明，血清外泌體中A1BG-AS1 水平升高與腦膠質(zhì)瘤的發(fā)生有關(guān)，但并未探究該指標(biāo)是否與腦膠質(zhì)瘤的術(shù)后復(fù)發(fā)有關(guān)。微小RNA（microRNA，miRNA）是內(nèi)源性非編碼RNA，參與乳腺癌、肝癌等多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程[9]。miRNA-199a-5p 是一種miRNA，屬于成熟的非編碼RNA。李曾仕等[10]研究證實(shí)，miRNA-199a-5p 可通過(guò)調(diào)控盤狀結(jié)構(gòu)域受體家族成員1（discoidin domain receptor family,member 1，DDR1）的表達(dá)抑制人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖和遷移，因此推測(cè)其可能與腦膠質(zhì)瘤患者的術(shù)后復(fù)發(fā)存在一定相關(guān)性。基于此，本研究探討血清miRNA-199a-5p、A1BG-AS1 水平腦膠質(zhì)瘤患者與術(shù)后復(fù)發(fā)的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2018 年3 月至2020 年4 月于駐馬店市中心醫(yī)院接受手術(shù)治療的腦膠質(zhì)瘤患者的病歷資料。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《腦膠質(zhì)瘤診療指南（2022版）》[11]中腦膠質(zhì)瘤的診斷標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)病理檢查確診為腦膠質(zhì)瘤；②年齡＞18 歲；③單發(fā)腫瘤；④臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他惡性腫瘤；②合并嚴(yán)重并發(fā)癥；③合并全身嚴(yán)重感染；④合并內(nèi)分泌系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)及代謝疾病。依據(jù)納入和排除標(biāo)準(zhǔn)，本研究共納入94 例腦膠質(zhì)瘤患者，作為研究組。另選取同期于駐馬店市中心醫(yī)院進(jìn)行體檢的84 例健康體檢者作為對(duì)照組。研究組中，男61例，女33 例；年齡20～68 歲，平均（44.68±11.90）歲；組織學(xué)分級(jí)：Ⅰ級(jí)17 例，Ⅱ級(jí)29 例，Ⅲ級(jí)28 例，Ⅳ級(jí)20 例；腫瘤位置：小腦幕上58 例，小腦幕下36例；腫瘤直徑1.5～4.1 cm，平均（3.98±0.57）cm。對(duì)照組中，男55 例，女29 例；年齡19～67 歲，平均（45.03±11.21）歲。兩組受試者的年齡和性別比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審批通過(guò)，所有患者均知情同意。

1.2 檢測(cè)方法

1.2.1 血清miRNA-199a-5p 水平檢測(cè) 研究組患者于治療前、對(duì)照組受試者于體檢當(dāng)日清晨采集靜脈血約5 ml，2500 r/min 離心10 min，離心半徑為10 cm，取上層血清置于-80 ℃冰箱中保存待檢。應(yīng)用RNA 提取試劑盒提取總RNA，然后采用紫外分光光度計(jì)檢測(cè)吸光度，計(jì)算RNA 濃度。將RNA 反轉(zhuǎn)錄為單鏈互補(bǔ)DNA（complementary DNA，cDNA），以cDNA 為模板進(jìn)行聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction，PCR）。反應(yīng)條件：95 ℃30 s；95 ℃1 min，72 ℃1 min，60 ℃30 s，共35 個(gè)循環(huán)。以甘油醛-3-磷酸脫氫酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）為內(nèi)參，采用2-ΔΔCt法計(jì)算miRNA-199a-5p 水平。

1.2.2 血清A1BG-AS1 水平檢測(cè) ①外泌體制備：取上述處理好的血清樣本，解凍后在4 ℃條件下3000 r/min 離心15 mim，去除細(xì)胞及細(xì)胞碎片，然后加入1/4 體積的ExoQuick 溶液，混合后在4 ℃條件下孵育30 min，1500 r/min 離心30 min，收集含有外泌體的顆粒用于RNA 提取。②定量檢測(cè)：采用miRNeasy Serum/Plasma Kit 從外泌體中提取總RNA，采用分光光度計(jì)檢測(cè)吸光度，計(jì)算RNA 濃度，反轉(zhuǎn)錄合成cDNA，然后進(jìn)行PCR。反應(yīng)條件：95 ℃30 s；95 ℃1 min，72 ℃1 min，60 ℃30 s，共35 個(gè)循環(huán)。以GAPDH為內(nèi)參，采用2-ΔΔCt法計(jì)算A1BG-AS1 水平。

1.3 觀察指標(biāo)

①比較兩組受試者的血清miRNA-199a-5p、A1BG-AS1 水平。②術(shù)后所有腦膠質(zhì)瘤患者均隨訪2 年，依據(jù)是否復(fù)發(fā)分為復(fù)發(fā)組（n=71）和非復(fù)發(fā)組（n=23），比較兩組患者的血清miRNA-199a-5p、A1BG-AS1 水平。③分析血清miRNA-199a-5p、A1BG-AS1 水平與腦膠質(zhì)瘤患者術(shù)后復(fù)發(fā)的相關(guān)性。④分析血清miRNA-199a-5p、A1BG-AS1 單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)對(duì)腦膠質(zhì)瘤患者術(shù)后復(fù)發(fā)的評(píng)估價(jià)值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以例數(shù)和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；采用Spearman 相關(guān)分析法進(jìn)行相關(guān)性分析；繪制受試者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲線，計(jì)算曲線下面積（area under the curve，AUC），分析血清miRNA-199a-5p、A1BG-AS1 單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)對(duì)腦膠質(zhì)瘤患者術(shù)后復(fù)發(fā)的評(píng)估價(jià)值。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 研究組與對(duì)照組血清miRNA-199a-5p、A1BG-AS1 水平的比較

研究組患者血清miRNA-199a-5p 水平明顯低于對(duì)照組，血清A1BG-AS1 水平明顯高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。（表1）

表1 研究組與對(duì)照組血清miRNA-199a-5p、A1BG-AS1 水平的比較（±s）

表1 研究組與對(duì)照組血清miRNA-199a-5p、A1BG-AS1 水平的比較（±s）

組別研究組（n=94）對(duì)照組（n=84）t值P值miRNA-199a-5p 5.79±1.17 7.45±0.57 11.809 0.000 A1BG-AS1 3.81±0.97 1.88±0.37 17.151 0.000

2.2 復(fù)發(fā)組與非復(fù)發(fā)組患者血清miRNA-199a-5p、A1BG-AS1 水平的比較

復(fù)發(fā)組患者血清miRNA-199a-5p 水平低于非復(fù)發(fā)組，血清A1BG-AS1 水平高于非復(fù)發(fā)組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。（表2）

表2 復(fù)發(fā)組與非復(fù)發(fā)組患者血清miRNA-199a-5p、A1BGAS1 水平的比較（±s）

表2 復(fù)發(fā)組與非復(fù)發(fā)組患者血清miRNA-199a-5p、A1BGAS1 水平的比較（±s）

組別復(fù)發(fā)組（n=71）非復(fù)發(fā)組（n=23）t值P值miRNA-199a-5p 5.65±1.05 6.23±0.87 2.394 0.019 A1BG-AS1 4.07±0.81 3.01±0.44 5.982 0.000

2.3 血清miRNA-199a-5p、A1BG-AS1 水平與腦膠質(zhì)瘤患者術(shù)后復(fù)發(fā)的相關(guān)性

Spearman 相關(guān)分析結(jié)果顯示，血清miRNA-199a-5p 水平與腦膠質(zhì)瘤患者術(shù)后復(fù)發(fā)呈負(fù)相關(guān)（r=-0.382，P＜0.05），血清A1BG-AS1 水平與腦膠質(zhì)瘤患者術(shù)后復(fù)發(fā)呈正相關(guān)（r=0.423，P＜0.05）。

2.4 血清miRNA-199a-5p、A1BG-AS1 單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)對(duì)腦膠質(zhì)瘤患者術(shù)后復(fù)發(fā)的評(píng)估價(jià)值

ROC 曲線顯示，血清miRNA-199a-5p、A1BGAS1 聯(lián)合檢測(cè)評(píng)估腦膠質(zhì)瘤患者術(shù)后復(fù)發(fā)的AUC和靈敏度均高于二者單獨(dú)檢測(cè)。（表3、圖1）

圖1 血清miRNA-199a-5p、A1BG-AS1單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)評(píng)估腦膠質(zhì)瘤患者術(shù)后復(fù)發(fā)的ROC曲線

表3 血清miRNA-199a-5p、A1BG-AS1 單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)對(duì)腦膠質(zhì)瘤患者術(shù)后復(fù)發(fā)的評(píng)估價(jià)值

3 討論

腦膠質(zhì)瘤的主要臨床特點(diǎn)是浸潤(rùn)性生長(zhǎng)，因此腫瘤組織與周圍正常組織分界不清，腫瘤組織釋放的溶解性物質(zhì)及毒素會(huì)損害周圍正常組織，因此其惡性程度較高，患者預(yù)后不佳[12]。顯微鏡下手術(shù)切除是腦膠質(zhì)瘤的主要治療方法，但術(shù)后短期內(nèi)復(fù)發(fā)率較高，會(huì)對(duì)顱內(nèi)多個(gè)腦葉造成侵犯，導(dǎo)致腦內(nèi)轉(zhuǎn)移，從而加速病情進(jìn)展[13]。因此，早期評(píng)估腦膠質(zhì)瘤的復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)是臨床研究的重點(diǎn)。影像學(xué)技術(shù)在腦膠質(zhì)瘤的診斷、治療方案評(píng)估及預(yù)后分析中發(fā)揮重要作用，尤其是影像組學(xué)技術(shù)的應(yīng)用，可以為腦膠質(zhì)瘤的預(yù)后評(píng)估提供豐富的信息，但影像學(xué)數(shù)據(jù)的讀取存在一定的主觀性，對(duì)診斷醫(yī)師的經(jīng)驗(yàn)及專業(yè)度要求極高[14]。因此，尋求更加快速、靈敏的生物學(xué)指標(biāo)成為臨床研究的主要方向。

miRNA-199a-5p 作為一種miRNA，參與調(diào)控多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程。彭靚等[15]研究表明，卵巢癌轉(zhuǎn)移組患者miRNA-199a-5p 表達(dá)水平低于卵巢癌原發(fā)組，提示miRNA-199a-5p 參與調(diào)控卵巢癌的疾病進(jìn)展。周京濤等[16]研究表明，上調(diào)miRNA-199a-5p 的表達(dá)能夠抑制肝癌細(xì)胞增殖、侵襲及上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化過(guò)程。馬素剛等[17]研究證實(shí)，miRNA-199a-5p 在甲狀腺乳頭狀癌中低表達(dá)。李愛(ài)麗等[18]研究發(fā)現(xiàn)，miRNA-199a-5p 在宮頸癌患者宮頸癌組織及血清中的表達(dá)均明顯上調(diào)。以上研究表明，miRNA-199a-5p 可參與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程，但其在不同腫瘤中發(fā)揮不同的生物學(xué)作用。閆兆月等[19]探討了miRNA-199a-5p 對(duì)人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖和遷移的影響，結(jié)果表明，miRNA-199a-5p 可通過(guò)下調(diào)DDR1 的表達(dá)抑制腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖和遷移。因此，筆者推測(cè)miRNA-199a-5p可能與腦膠質(zhì)瘤患者術(shù)后復(fù)發(fā)存在一定的相關(guān)性。A1BG-AS1 是新發(fā)現(xiàn)的lncRNA，與腫瘤進(jìn)展密切相關(guān)。目前關(guān)于A1BG-AS1 在腫瘤中的研究多集中于肝癌，曾雅莉和唐靜[20]的研究證實(shí)，原發(fā)性肝癌患者血漿外泌體A1BG-AS1 呈低表達(dá)，且其表達(dá)可能與患者的臨床特征及預(yù)后有關(guān)。現(xiàn)階段關(guān)于腦膠質(zhì)瘤中miRNA-199a-5p、A1BG-AS1 表達(dá)情況的研究較少，且尚無(wú)相關(guān)研究報(bào)道其是否與腦膠質(zhì)瘤患者的術(shù)后復(fù)發(fā)有關(guān)。

本研究結(jié)果顯示，研究組患者血清miRNA-199a-5p 水平低于對(duì)照組，血清A1BG-AS1 水平高于對(duì)照組，說(shuō)明miRNA-199a-5p、A1BG-AS1 參與腦膠質(zhì)瘤的發(fā)生過(guò)程，與沈風(fēng)彪等[8]研究結(jié)果一致。推測(cè)可能的機(jī)制是，A1BG-AS1/miRNA-485-5p/脂閥結(jié)構(gòu)蛋白1（flotillin 1，F(xiàn)LOT1）和A1BG-AS1/miRNA-216a-5p 信號(hào)通路參與調(diào)控腦膠質(zhì)瘤的發(fā)生過(guò)程，miRNA-199a-5p 可能通過(guò)激活Janus 激酶（Janus kinase，JAK）/信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子3（signal transduction and activator of transcription 3，STAT3）信號(hào)通路參與腦膠質(zhì)瘤的發(fā)生過(guò)程[21]，但兩種機(jī)制均仍需證實(shí)。本研究結(jié)果還顯示，復(fù)發(fā)組患者血清miRNA-199a-5p 水平低于非復(fù)發(fā)組，血清A1BG-AS1 水平高于非復(fù)發(fā)組，提示miRNA-199a-5p、A1BG-AS1 參與了腦膠質(zhì)瘤的術(shù)后復(fù)發(fā)過(guò)程。這可能是因?yàn)椋琺iRNA-199a-5p 可通過(guò)下調(diào)DDR1 的表達(dá)抑制腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖和遷移，因此miRNA-199a-5p 水平越高，術(shù)后復(fù)發(fā)的可能性就越小；A1BG-AS1 可通過(guò)與miRNA-485-5p 相互作用促進(jìn)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖、遷移，因此其水平越高，術(shù)后復(fù)發(fā)的可能性就越大。進(jìn)一步的相關(guān)性分析顯示，血清miRNA-199a-5p 水平與腦膠質(zhì)瘤患者術(shù)后復(fù)發(fā)呈負(fù)相關(guān)，血清A1BG-AS1 水平與腦膠質(zhì)瘤患者術(shù)后復(fù)發(fā)呈正相關(guān)。ROC 曲線顯示，miRNA-199a-5p、A1BG-AS1 單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)評(píng)估腦膠質(zhì)瘤患者術(shù)后復(fù)發(fā)的AUC 分別為0.673、0.887、0.904，靈敏度分別為63.38%、90.14%、95.77%，特異度分別為69.57%、82.61%、69.57%。說(shuō)明血清miRNA-199a-5p、A1BG-AS1 對(duì)腦膠質(zhì)瘤患者術(shù)后復(fù)發(fā)具有一定的評(píng)估價(jià)值，且二者聯(lián)合檢測(cè)的評(píng)估價(jià)值更高。

綜上所述，腦膠質(zhì)瘤患者血清miRNA-199a-5p水平降低，血清A1BG-AS1 水平升高，且其表達(dá)水平與腦膠質(zhì)瘤患者術(shù)后復(fù)發(fā)有關(guān)，聯(lián)合檢測(cè)對(duì)術(shù)后復(fù)發(fā)具有較好的評(píng)估價(jià)值，可為臨床治療方案的制訂提供一定的參考依據(jù)。