玉屏風(fēng)散對肺氣虛型變應(yīng)性鼻炎豚鼠模型IL-4、IL-12、TNF-γ表達(dá)水平及鼻腔黏病理變化的影響

賓驥 朱鎮(zhèn)華 楊偉麗

本文引用： 賓? 驥， 朱鎮(zhèn)華， 楊偉麗.玉屏風(fēng)散對肺氣虛型變應(yīng)性鼻炎豚鼠模型IL-4、IL-12、TNF-γ表達(dá)水平及鼻腔黏病理變化的影響[J]. 湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)， 2024， 44（4）： 545-550.

〔摘要〕 目的 探討玉屏風(fēng)散對肺氣虛型變應(yīng)性鼻炎（allergic rhinitis， AR）豚鼠的作用機(jī)制。方法 將40只健康雜色英國種豚鼠，隨機(jī)分為空白組、模型組、玉屏風(fēng)組、氯雷他定組。除空白組外，其余各組均以雞卵清蛋白（ovalbumin， OVA）與煙熏法建立肺氣虛型AR模型。造模成功后，玉屏風(fēng)組、氯雷他定組分別予玉屏風(fēng)散[4.52 g/（kg·d）]、氯雷他定片（0.903 mg/kg）灌胃，空白組及模型組予等體積生理鹽水灌胃，處理15 d后，取各組豚鼠血清及鼻腔黏膜。經(jīng)HE染色法觀察鼻腔黏膜細(xì)胞形態(tài)，ELISA與免疫組化法檢測豚鼠血清中白細(xì)胞介素-4（interleukin-4， IL-4）、白細(xì)胞介素-12（interleukin-12， IL-12）、γ干擾素（interferon-γ， IFN-γ）等細(xì)胞因子表達(dá)水平。結(jié)果 HE染色發(fā)現(xiàn)，模型組細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)明顯紊亂，玉屏風(fēng)組、氯雷他定組細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)異常狀態(tài)相對減輕。ELISA結(jié)果顯示，與空白組比較，模型組、玉屏風(fēng)組、氯雷他定組豚鼠血清中IL-4、IL-12表達(dá)水平升高（P<0.05），IFN-γ表達(dá)水平降低（P<0.05）;與模型組比較，玉屏風(fēng)組、氯雷他定組豚鼠血清IL-4與IL-12含量降低（P<0.05），氯雷他定組IFN-γ表達(dá)水平升高（P<0.05）。免疫組化染色顯示，與空白組比較，模型組豚鼠鼻腔黏膜IL-4、IL-12表達(dá)明顯降低（P<0.05），IFN-γ表達(dá)明顯升高（P<0.01）;與模型組比較，玉屏風(fēng)組與氯雷他定組IL-4表達(dá)明顯降低（P<0.05），氯雷他定組IL-12表達(dá)明顯降低（P<0.05）。結(jié)論 玉屏風(fēng)散可能通過影響IL-4、IL-12、IFN-γ水平，改變鼻腔黏膜細(xì)胞形態(tài)治療肺氣虛型AR。

〔關(guān)鍵詞〕 玉屏風(fēng)散;變應(yīng)性鼻炎;肺氣虛型;鼻腔黏膜細(xì)胞形態(tài);白細(xì)胞介素

〔中圖分類號〕R285.5? ? ? ? ?〔文獻(xiàn)標(biāo)志碼〕A? ? ? ? ? 〔文章編號〕doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2024.04.003

Effects of Yupingfeng Powder on expression levels of IL-4， IL-12， and TNF-γ as well as nasal mucosa pathological changes in guinea pig model of allergic rhinitis with lung qi deficiency pattern

BIN Ji， ZHU Zhenhua*， YANG Weili*

The First Hospital of Hunan University of Chinese Medicine， Changsha， Hunan 410007， China

〔Abstract〕 Objective To explore the action of mechanism of Yupingfeng Powder （YPFP） on allergic rhinitis （AR） with lung qi deficiency pattern in guinea pigs. Methods Forty healthy variegated British guinea pigs were randomized into blank group， model group， YPFP group， and loratadine group. Except for the blank group， the AR models with lung qi deficiency pattern were established in the other groups using ovalbumin （OVA） and smoke exposure. After successful modeling， the YPFP group and the loratadine group were treated with YPFP [4.52 g/（kg·d）] and loratadine tablets （0.903 mg/kg） by gavage， respectively， while the blank group and model group were given an equal volume of normal saline by gavage. After 15 days of treatment， the serum and nasal mucosa samples of guinea pigs were collected from each group. The morphology of nasal mucosa cells were observed using HE staining， and the expression levels of cytokines such as interleukin-4 （IL-4）， interleukin-12 （IL-12）， and interferon-γ （IFN-γ） in the serum of guinea pigs were measured by ELISA and immunohistochemical staining. Results HE staining showed that the model group exhibited significant morphological and structural disorders， while the morphological and structural abnormalities were relatively alleviated in the YPFP group and the loratadine group. ELISA results indicated that compared with the blank group， the expression levels of IL-4 and IL-12 in the serum of guinea pigs in the model group， YPFP group， and loratadine group increased （P<0.05）， while the expression level of IFN-γ decreased （P<0.05）. Compared with the model group， the serum levels of IL-4 and IL-12 in the YPFP group and loratadine group decreased （P<0.05）， while the expression level of IFN-γ in the loratadine group increased （P<0.05）. Immunohistochemical staining revealed that compared with the blank group， the expressions of IL-4 and IL-12 in the nasal mucosa of guinea pigs in the model group were significantly lower （P<0.05）， while the expression of IFN-γ was significantly higher （P<0.01）. Compared with the model group， the IL-4 expression decreased significantly in both the YPFP group and loratadine group （P<0.05）， and the IL-12 expression in the loratadine group decreased significantly （P<0.05）. Conclusion YPFP may treat allergic rhinitis with lung qi deficiency pattern by influencing the levels of IL-4， IL-12， and IFN-γ， and changing the morphology of nasal mucosa cells.

〔Keywords〕 Yupingfeng Powder; allergic rhinitis; lung qi deficiency pattern; morphology of nasal mucosa cells; interleukin

變應(yīng)性鼻炎（allergic rhinitis，AR），也稱過敏性鼻炎，是耳鼻咽喉科常見的上呼吸道變應(yīng)性疾病[1]。臨床上常表現(xiàn)為陣發(fā)性噴嚏、大量鼻涕、鼻塞、鼻癢等癥狀，具有病程長、遷延不愈、反復(fù)發(fā)作的特點(diǎn)，嚴(yán)重影響患者健康及生活質(zhì)量[2]。目前，AR西醫(yī)治療有6類主要藥物，分別是糖皮質(zhì)激素、H1受體拮抗劑、抗白三烯藥、減充血劑、抗膽堿藥、肥大細(xì)胞膜穩(wěn)定劑[3]。雖然現(xiàn)有藥物品種繁多，但不良反應(yīng)明顯，效果維持時(shí)間短，容易產(chǎn)生耐藥性。特異性免疫治療亦稱脫敏治療，對花粉、塵螨誘發(fā)的間歇性過敏性鼻炎的療效比較肯定，但治療時(shí)間長導(dǎo)致依從性較差，治療費(fèi)用昂貴，同時(shí)有可能引發(fā)嚴(yán)重的不良反應(yīng)。免疫治療是近年來過敏性疾病的研究熱點(diǎn)之一，但學(xué)術(shù)界對其遠(yuǎn)期療效仍有爭議[4]。手術(shù)治療療效肯定，但易復(fù)發(fā)，且部分患者留有咽干、口干等不良反應(yīng)[5]。因此，尋找更安全有效的療法是AR治療中亟待解決的問題。

中醫(yī)中藥在治療變應(yīng)性鼻炎中具有獨(dú)特優(yōu)勢，AR在中醫(yī)學(xué)中又名“鼻鼽”，中醫(yī)病機(jī)多為臟腑虛損，衛(wèi)表不固。肺氣虛型AR以肺氣虛損為主要病機(jī)，肺主氣，生衛(wèi)氣，行氣周身，調(diào)控湊理，肺氣虛則腠理疏松，風(fēng)寒邪氣均易乘虛侵襲而致肺失通條，肺失宣降，水行不暢，津液壅塞鼻竅而發(fā)病。臨床表現(xiàn)為鼻癢，噴嚏，鼻塞，嗅覺減退，畏風(fēng)怕冷，自汗，少氣懶言，舌淡胖，脈濡弱;查體可見鼻甲蒼白水腫。治則益氣固表、溫肺散寒;方以玉屏風(fēng)散加減[6]。基于此，本研究以O(shè)VA與煙熏法構(gòu)建肺氣虛型AR豚鼠模型，經(jīng)玉屏風(fēng)與氯雷他定干預(yù)，通過比較豚鼠血清與黏膜中IL-4、IL-12、IFN-γ的表達(dá)水平，確定玉屏風(fēng)散對肺氣虛型AR的治療效果，以期為開發(fā)更有效的AR治療藥物提供新參考。

1 材料與方法

1.1? 實(shí)驗(yàn)動物

英國種雜色豚鼠（雄性）40只，體質(zhì)量250～300 g，由湖南中醫(yī)藥大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)中心提供，許可證書：SCXK（湘）2020-0005，飼養(yǎng)于湖南中醫(yī)藥大學(xué)動物中心實(shí)驗(yàn)室。飼養(yǎng)在濕度42%～65%、溫度19～25 ℃的環(huán)境下，常規(guī)標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)，自由飲水，晝夜交替循環(huán)照明，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。本實(shí)驗(yàn)經(jīng)過湖南中醫(yī)藥大學(xué)動物倫理委員會批準(zhǔn)（備案編號LLBH-202007020001），符合實(shí)驗(yàn)動物福利倫理原則。

1.2? 實(shí)驗(yàn)藥物

玉屏風(fēng)散方組成：黃芪、白術(shù)各20 g，防風(fēng)10 g。中藥飲片由湖南省中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院中藥房提供。經(jīng)湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院鑒定為正品，煎煮方法為適量清水沒過藥材1 cm浸泡30 min后武火將藥液煮開，文火保持沸騰20 min，留取藥液。

氯雷他定片（拜耳醫(yī)藥上海有限公司，批號：JS08187，國藥準(zhǔn)字號：H10970410，規(guī)格：10 mg/粒）。

1.3? 主要試劑

雞卵清蛋白、曲拉通X-100（Solarbio公司，批號：A8041、T8200）;氫氧化鋁（Thermo Fisher公司，批號：PF201964）;豚鼠IFN-γ、IL-4、IL-12ELISA試劑盒（江蘇菲亞生物科技有限公司，批號：FY3705-A、FY3692-A、FY3718-A）;烏拉坦（Sigma公司，批號：MF-CD00007966）;蘇木素-伊紅染液、檸檬酸修復(fù)液（皮諾飛生物公司，批號：P0064、P0026）;INF-γ抗體（Servicebio公司，批號：AC221121093）;IL-4抗體、IL-12抗體（艾方生物，批號：20220824、20220517），HRP標(biāo)記山羊抗兔二抗（Abbkine公司，批號：A21020）;氨水（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號：10002108）。

1.4? 主要儀器

Tianshi98型洗板機(jī)（北京拓普分析儀器有限責(zé)任公司）;Rayto RT-6100型酶標(biāo)儀（深圳雷杜生命科學(xué)股份有限公司）;TG16W型微量高速離心機(jī)（長沙湘智離心機(jī)儀器有限公司）;TGL16M型臺式高速冷凍離心機(jī)（上海盧湘儀離心機(jī)儀器有限公司）;HT-111B型恒溫?fù)u床（上海赫田科學(xué)儀器有限公司）;AE1204型電子分析天平（上海良平儀器儀表有限公司）;XB220A型瑞士PRECISA電子分析天平（深圳市朗普電子科技有限公司）;81-2型恒溫磁力攪拌器（北京世紀(jì)科信科學(xué)儀器有限公司）。

1.5? 動物分組與造模

1.5.1? 動物分組? 根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表法將40只豚鼠分為空白組、模型組、玉屏風(fēng)散組、氯雷他定組，每組10只。經(jīng)過7 d適應(yīng)性喂養(yǎng)后造模。

1.5.2? AR造模方法? 模型組、玉屏風(fēng)散組、氯雷他定組按卵蛋白致敏法[7]制備AR動物模型。具體步驟如下：按每只豚鼠卵蛋白0.3 mg、氫氧化鋁粉末30 mg，加生理鹽水至1 mL配成混懸液，隔日腹腔注射1次，共注射7次;配制0.25%卵蛋白生理鹽水溶液，按每只豚鼠2 mL行霧化吸入，每日1次，連續(xù)5 d;間歇1周后，以1%卵蛋白生理鹽水溶液滴鼻（40 μL/鼻孔/次）進(jìn)行鼻腔激發(fā)，每日1次，7 d后，觀察大鼠噴嚏次數(shù)、抓鼻次數(shù)和流涕情況，判定AR造模是否成功。

1.5.3? 肺氣虛型造模方法? AR造模成功后，模型組、玉屏風(fēng)散組、氯雷他定組參照陳小野的煙熏法[8]，經(jīng)改良后建立實(shí)驗(yàn)動物肺氣虛證模型。具體步驟為：特制玻璃煙熏造模箱（體積60 cm×40 cm×40 cm），特制煙熏艾條長120 mm（內(nèi)含硫磺粉7 g、艾絨30 g）。將實(shí)驗(yàn)豚放入煙熏箱，點(diǎn)燃艾條，煙熏30 min，每日2次，連續(xù)熏煙15 d。根據(jù)《實(shí)用中醫(yī)證候動物模型學(xué)》中相關(guān)內(nèi)容[9]，篩選記錄可觀察到的6項(xiàng)動物癥狀表現(xiàn)：（1）咳嗽;（2）氣短喘促;（3）痰白清?。诒撬闹芊置谖铮?（4）惡風(fēng)畏寒（蜷足局抱團(tuán)）;（5）神疲乏力（反應(yīng)遲鈍，活動減少）;（6）毛發(fā)枯槁無光澤。采用趙秀杰等的癥狀評分標(biāo)準(zhǔn)[9]，激發(fā)后即刻至30 min觀察動物搔鼻、噴嚏、鼻溢液癥狀，采用疊加量化記分，行為學(xué)總分>5分表示造模成功。

1.5.4? 給藥方法? 給藥方法按臨床用藥，以人體質(zhì)量60 kg為標(biāo)準(zhǔn)，按照體表面積-劑量換算法計(jì)算給藥劑量灌胃[10]。根據(jù)豚鼠每日劑量及每千克質(zhì)量灌胃所能耐受的容量體積配制藥物濃度，玉屏風(fēng)散給藥劑量為4.52 g/（kg·d），氯雷他定片給藥劑量為0.903 mg/kg?？瞻捉M與模型組給予等量的生理鹽水溶液，每日分2次灌胃給藥，連續(xù)處理15 d。

1.5.5? 觀察指標(biāo)及評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)? 最后一次灌胃處理1 h后，使用戊巴比妥鈉溶液（40 mg/kg）腹腔注射麻醉。麻醉成功后，采集實(shí)驗(yàn)用標(biāo)本。

（1）采集血清：麻醉后將豚鼠一側(cè)頸靜脈穿刺，普通干管收集豚鼠新鮮血液2 mL，室溫下靜置1 h后離心（3 500 r/min，10 min），將所得上清液（血清）轉(zhuǎn)移至Eppendorf管，-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

（2）鼻黏膜標(biāo)本的采集：經(jīng)頸靜脈抽血完備后，使用耳科杯狀咬鉗咬取部分鼻腔黏膜，生理鹽水清洗后，平鋪于硬紙片上放入10%甲醛中固定，以待后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。

1.6? 指標(biāo)檢測

1.6.1? ELISA檢測血清中炎性因子水平? 按照IL-4、IL-12、IFN-γ ELISA試劑盒說明書，經(jīng)加抗原包被4 ℃過夜后，加入待檢血清，37 ℃孵育2 h后清洗，加入酶標(biāo)抗體，37 ℃ 孵育2 h后再次清洗，加入底物液37 ℃孵育30 min后，加終止液，于450 nm波長測定吸光度值，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中相關(guān)因子含量。

1.6.2? HE染色觀察豚鼠鼻黏膜形態(tài)? 使用10%中性緩沖液福爾馬林對鼻黏膜組織進(jìn)行固定，梯度乙醇脫水、二甲苯透明、浸蠟包埋后切片（厚約3 μm），經(jīng)60 ℃烤片2 h、二甲苯與梯度乙醇脫蠟后，進(jìn)行HE 染色。染色步驟為：蘇木精染色2 min，沖洗，1%鹽酸乙醇分化液10 s，沖洗，氨水返藍(lán)2 min，梯度乙醇脫水，伊紅染色2 min，沖洗，無水乙醇脫水，二甲苯透明。經(jīng)中性樹膠封閉后，于鏡下觀察鼻黏膜組織細(xì)胞形態(tài)。

1.6.3? 免疫組化檢測豚鼠鼻黏膜? 脫蠟后將玻片置于高壓鍋中，使用1×檸檬酸（pH 6.0）修復(fù)液進(jìn)行抗原修復(fù)，經(jīng)組化筆圈定檢測組織范圍后，依次使用過氧化物酶阻斷劑阻斷30 min，10%山羊血清封閉30 min，孵育相應(yīng)一抗過夜，孵育二抗30 min，DAB顯色1 min，復(fù)染蘇木素2 min，1%鹽酸乙醇分化液分化10 s、氨水返藍(lán)2 min，梯度乙醇脫水，二甲苯透明。經(jīng)中性樹膠封閉后，于鏡下觀察并獲取圖像。

1.7? 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

計(jì)量資料采用“x±s”表示，多組樣本均數(shù)滿足方差齊性者用F檢驗(yàn)，兩組之間比較采用q檢驗(yàn)，否則用軼和檢驗(yàn)。應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。以P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1? HE染色觀察豚鼠鼻黏膜形態(tài)差異

空白組黏膜層上皮細(xì)胞排列規(guī)則緊密，結(jié)構(gòu)清晰，黏膜下層細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰，間隔正常;模型組黏膜層上皮細(xì)胞可見部分萎縮，細(xì)胞結(jié)構(gòu)異常，黏膜下層細(xì)胞部分融合，結(jié)構(gòu)紊亂;玉屏風(fēng)散組細(xì)胞結(jié)構(gòu)可見恢復(fù)，部分黏膜層上皮細(xì)胞排列相對正常，但較空白組仍有部分紊亂;氯雷他定組較造模前細(xì)胞形態(tài)部分恢復(fù)，細(xì)胞結(jié)構(gòu)仍較紊亂。詳見圖1。

2.2? ELISA法檢測豚鼠血清中 IL-4、IL-12、IFN-γ含量

與空白組比較，模型組IL-4、IL-12表達(dá)升高，IFN-γ表達(dá)降低（P<0.05）;與模型組比較，玉屏風(fēng)散組及氯雷他定組血清IL-4與IL-12含量降低，氯雷他定組IFN-γ含量升高（P<0.05），玉屏風(fēng)散組IFN-γ雖有升高但不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）;與氯雷他定組比較，玉屏風(fēng)散組IL-4、IL-12、IFN-γ含量基本相當(dāng)。詳見表1。

2.3? 免疫組化法檢測豚鼠鼻腔黏膜中IL-4、IL-12、IFN-γ表達(dá)水平

與空白組比較，模型組黏膜層上皮細(xì)胞IL-4、IL-12棕染加深，表達(dá)上調(diào)，IFN-γ棕染減輕，表達(dá)下調(diào)（P<0.05或P<0.01）。與模型組比較，玉屏風(fēng)散組及氯雷他定組IL-4棕染減輕，表達(dá)下調(diào)（P<0.05）;氯雷他定組IL-12棕染減輕，表達(dá)下調(diào)（P<0.05）;玉屏風(fēng)散組雖見IL-12棕染減輕，但與模型組比較差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。詳見圖2。

3 討論

AR屬于Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)，其病理生理過程分為速發(fā)相反應(yīng)和遲發(fā)相反應(yīng)。在接觸變應(yīng)原后5～10 min，肥大細(xì)胞釋放炎性介質(zhì)，導(dǎo)致出現(xiàn)打噴嚏、流清涕、鼻塞和鼻癢等速發(fā)相典型反應(yīng);在4～6 h后可表現(xiàn)為以鼻塞為主的遲發(fā)相反應(yīng)[11]。從免疫學(xué)角度來看，AR是體外環(huán)境因素作用于機(jī)體免疫系統(tǒng)，導(dǎo)致Th1/Th2免疫反應(yīng)失衡，以鼻腔黏膜Th2細(xì)胞免疫反應(yīng)為主的變應(yīng)性炎癥反應(yīng)，其主要的免疫病理學(xué)特征是組織中大量表達(dá)Th2細(xì)胞因子的細(xì)胞浸潤[12-13]。當(dāng)機(jī)體受到異?？乖碳r(shí)，Th1/Th2細(xì)胞間的動態(tài)平衡被破壞，Th2類細(xì)胞因子會過度表達(dá)，Th1類細(xì)胞因子表達(dá)減少，進(jìn)而細(xì)胞免疫反應(yīng)增強(qiáng)，從而導(dǎo)致AR等過敏性疾病的發(fā)生[14]。其中，Th2細(xì)胞主要釋放IL-4、IL-12，二者是AR發(fā)生過程中最重要的細(xì)胞因子，可通過刺激B細(xì)胞促進(jìn)IgE的合成，激活中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的協(xié)調(diào)影響IgE分泌，加強(qiáng)Th2的促炎癥功能，導(dǎo)致變態(tài)反應(yīng)炎癥發(fā)生[15]。IFN-γ為Th1細(xì)胞的標(biāo)志性細(xì)胞因子，和IL-4一樣也是B細(xì)胞合成IgE的調(diào)節(jié)因子之一，能抑制Th2細(xì)胞的活性， 抑制IL-4的產(chǎn)生[16]。

鼻鼽的發(fā)生與肺脾腎三臟關(guān)系密切，自古醫(yī)家就有虛實(shí)兩類區(qū)分。一類為脾胃實(shí)熱，其中以《黃帝內(nèi)經(jīng)》《素問玄機(jī)原病式·六氣為病》《奇效良方》為代表，其代表理論總結(jié)為熱犯陽明，發(fā)于鼻而為癢，主要臨床表現(xiàn)以鼻癢、流濁涕并見咳嗽、鼻衄、嘔逆等癥狀為主[17-18]。另一類則為肺脾氣虛，《諸病源候論》《辨證錄》《醫(yī)法圓通》等著作闡述其肺腎本元虛弱、虛寒內(nèi)生，犯于鼻竅而為清涕，而此類證型不常見其他兼證[19]。還有部分認(rèn)為鼻鼽由素體氣虛，衛(wèi)表不固，復(fù)感風(fēng)寒發(fā)病，其虛實(shí)證候夾雜，臨床表現(xiàn)相對復(fù)雜[20]。

肺為相傅之官，主氣行水。肺脾相合可生衛(wèi)氣，行衛(wèi)氣于周身，調(diào)控湊理，防御外邪;肺腎相合可通水道，行水氣于三焦，化生陰精，滋養(yǎng)周身。若肺氣虛損，衛(wèi)氣難以化生，則腠理疏松，津液不得推動，則水飲停聚。鼻為頭面清陽之竅，湊理為遍布周身之竅，此兩者均為陽氣所布之處?！饵S帝內(nèi)經(jīng)》言：陽化氣，陰成形。肺為氣之主，肺氣一虛，陽氣不達(dá)，則外在陰寒邪氣與內(nèi)生陰邪客于清竅，此均易乘虛侵襲而致肺失通條，一旦肺失宣降，水行不暢，則更加重內(nèi)在肺氣虛損。因而，以肺氣虛這一證型切入AR的論治與藥物研究是可行之策?，F(xiàn)有研究也發(fā)現(xiàn)，使用相關(guān)藥物與療法針對肺氣虛證進(jìn)行治療可有效緩解AR癥狀與相關(guān)因子表達(dá)[21-22]。

玉屏風(fēng)散出自元代朱丹溪的《丹溪心法》，組方精煉，特色明確，具有益氣固表、扶正祛邪之功效，常用于治療鼻鼽、咳嗽等疾病的肺氣虛證型[23]。《本草備要》言：黃芪，補(bǔ)氣，固表;白術(shù)，健脾燥濕，甘補(bǔ)脾，溫和中;防風(fēng)，宣，發(fā)表，勝濕。方中黃芪為君，益氣固表，白術(shù)為臣，健脾益氣，防風(fēng)佐使，走表散邪，三藥合用，補(bǔ)氣并益肺，扶正兼祛邪。氣虛得芪則健，水停得術(shù)則化，氣健水化再得防風(fēng)之助，則宣降復(fù)歸于常，表不留邪，三藥合用補(bǔ)中寓疏、散中寓補(bǔ)[24]。現(xiàn)代藥理學(xué)研究證實(shí)，黃芪主要成分為黃芪多糖，其具有抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、抗炎、降血糖、調(diào)整血壓等一系列作用[25-26]，而針對鼻鼽其具有抗炎及對機(jī)體免疫功能的雙向調(diào)節(jié)作用為其治療基礎(chǔ)[27]。白術(shù)主要作用成分可提高巨噬細(xì)胞的活性，增強(qiáng)機(jī)體非特異性免疫功能[28]。而防風(fēng)水煎液有抗Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)的作用[29-30]。

在本研究中，使用了OVA與煙熏法建立肺氣虛型AR模型，經(jīng)玉屏風(fēng)散與氯雷他定處理后取材檢測。HE染色結(jié)果顯示，玉屏風(fēng)散能夠明顯降低肺氣虛型AR豚鼠鼻黏膜水腫程度，減輕鼻黏膜炎性細(xì)胞浸潤，且其效果較氯雷他定更為明顯。同時(shí)ELISA結(jié)果顯示，經(jīng)玉屏風(fēng)散與氯雷他定處理后可降低豚鼠IL-4、IL-12表達(dá)水平，升高IFN-γ表達(dá)水平，說明玉屏風(fēng)散可影響IL-4、IL-12、IFN-γ表達(dá)水平，對肺氣虛型AR產(chǎn)生治療作用，其對IL-4與IFN-γ作用與氯雷他定處理相當(dāng)，提示玉屏風(fēng)散在治療肺氣虛型AR上的強(qiáng)力作用。另外，本研究經(jīng)免疫組化法檢測到玉屏風(fēng)散與氯雷他定處理可明顯降低IL-4表達(dá)水平，但玉屏風(fēng)散對IL-12與IFN-γ的影響不夠明顯，提示玉屏風(fēng)散對其的作用可能不只是簡單的抑制與促進(jìn)表達(dá)作用，可能涉及更復(fù)雜的內(nèi)在機(jī)制，這也是日后值得研究的方向。

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