寒邪對大鼠腰椎間盤突出癥機(jī)體影響的實(shí)驗(yàn)研究

摘要：目的" 探討寒邪在大鼠腰椎間盤突出癥模型中的影響。方法" 將30只SD級大鼠按照隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組、對照組和空白組，各10例。實(shí)驗(yàn)組和對照組通過自體髓核移植至L4、L5神經(jīng)根建立大鼠腰椎間盤突出癥模型，空白組不做處理，實(shí)驗(yàn)組和空白組連續(xù)7 d每天12∶00-16∶00將大鼠置于溫度為（4±0.5）℃、濕度為50%±2%的人工氣候箱中飼養(yǎng)4 h，其余時間按常規(guī)室溫飼養(yǎng)。對照組放置于（25±0.5）℃、濕度為50%±2%的常溫中標(biāo)準(zhǔn)化飼養(yǎng)1周。觀察三組大鼠生存質(zhì)量、髓核中PLA2含量、血清炎癥因子TNF-α、IL-6含量變化、椎間盤病理切片情況。結(jié)果" 造模完成后，三組大鼠全部存活，無死亡、癱瘓、感染案例，但于實(shí)驗(yàn)第3天，三組大鼠均有明顯癥狀，神經(jīng)功能評分均在3級以上。實(shí)驗(yàn)第7、14天，實(shí)驗(yàn)組神經(jīng)功能評分均高于對照組和空白組（P＜0.05）；實(shí)驗(yàn)組實(shí)驗(yàn)第14天與第7天神經(jīng)功能評分比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；而對照組、空白組實(shí)驗(yàn)第14天與第7天神經(jīng)功能評分，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。實(shí)驗(yàn)第14天血清TNF-α、IL-6水平均低于實(shí)驗(yàn)第7天，但實(shí)驗(yàn)組實(shí)驗(yàn)第7、14天血清TNF-α、IL-6水平高于對照組和空白組（P＜0.05）。三組實(shí)驗(yàn)第14天大鼠髓核中PLA2含量均低于實(shí)驗(yàn)第7天，但實(shí)驗(yàn)組實(shí)驗(yàn)第7、14天大鼠髓核中PLA2含量高于對照組和空白組（P＜0.05）。結(jié)論" 寒邪作用于大鼠腰椎間盤突出癥模型能降低大鼠生存質(zhì)量，提高髓核中PLA2含量及血清炎癥因子TNF-α、IL-6表達(dá)，為腰椎間盤突出癥的重要發(fā)病因素。

關(guān)鍵詞：腰椎間盤突出癥；寒邪；TNF-α；IL-6；PLA2

中圖分類號：R681.5+3" " " " " " " " " " " " " " " " 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A" " " " " " " " " " " " " " " DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2024.14.017

文章編號：1006-1959（2024）14-0090-06

Experimental Study on the Effect of Cold Pathogen on Lumbar Disc Herniation in Rats

XU Li1，LI Xiao-lin2，ZHANG Chao-ju1，PENG Chang-hua1，CHEN Hong-wei1，WU Lei-lei1，HE Chuan1

（1.Orthopedics Department of Jingzhou Institute of Traditional Chinese Medicine/Jingzhou Hospital of Traditional Chinese Medicine，

Jingzhou 434000，Hubei，China;

2.Medical College of Yangtze University，Jingzhou 434000，Hubei，China）

Abstract：Objective" To investigate the effect of cold pathogen on rat model of lumbar disc herniation.Methods" Thirty SD rats were randomly divided into experimental group， control group and blank group according to the random number table method， with 10 rats in each group. The experimental group and the control group were transplanted with autologous nucleus pulposus to L4 and L5 nerve roots to establish a rat model of lumbar disc herniation. The blank group was not treated. The experimental group and the blank group were placed at 12∶00-16∶00 every day for 7 consecutive days. The rats were raised in an artificial climate box with a temperature of （4±0.5）℃ and a humidity of 50%±2% for 4 h， and the rest of the time was raised at room temperature. The control group was placed in a room temperature of （25±0.5）℃ and a humidity of 50%±2% for standardized feeding for 1 week. The quality of life， the content of PLA2 in nucleus pulposus， the content of serum inflammatory factors TNF-α and IL-6， and the pathological section of intervertebral disc were observed in the three groups.Results" After the completion of the modeling， all the three groups of rats survived without death， paralysis， and infection. On the third day of the experiment， the three groups of rats had obvious symptoms， and the neurological function scores were all above grade 3. On the 7 th and 14 th day of the experiment， the neurological function scores of the experimental group were higher than those of the control group and the blank group （Plt;0.05）， there was no significant difference in neurological function score between the 14th day and the 7th day in the experimental group （Pgt;0.05）， while the neurological function scores of the control group and the blank group on the 14th and 7th days of the experiment were statistically significant （Plt;0.05）. The levels of serum TNF-α and IL-6 on the 14th day of the experiment were lower than those on the 7th day of the experiment， but the levels of serum TNF-α and IL-6 on the 7th and 14th days of the experiment in the experimental group were higher than those in the control group and the blank group （Plt;0.05）. The content of PLA2 in the nucleus pulposus of rats on the 14th day of the three groups was lower than that on the 7th day of the experiment， but the content of PLA2 in the nucleus pulposus of rats on the 7th and 14th days of the experiment in the experimental group was higher than that in the control group and the blank group （Plt;0.05）.Conclusion" The cold pathogen acting on the rat model of lumbar disc herniation can reduce the quality of life of rats， increase the content of PLA2 in the nucleus pulposus and the expression of serum inflammatory factors TNF-α and IL-6， which is an important pathogenic factor of lumbar disc herniation.

Key words：Lumbar disc herniation;Cold pathogen;TNF-α;IL-6;PLA2

腰椎間盤突出癥（lumbar disc herniation）是由于腰椎間盤不同程度的退行性改變后，在外力因素的作用下，椎間盤的纖維環(huán)破裂，髓核組織從薄弱處突出累及椎管，導(dǎo)致相鄰脊神經(jīng)根遭受刺激或壓迫，引起的腰痛、下肢放射痛、麻木等一系列癥狀，是臨床多發(fā)病和常見病，發(fā)病率高達(dá)20%～30%，全球約9.4%的人群受其困擾[1]。早在1934年，Mixter WJ等[2]就對腰椎間盤突出癥做了相關(guān)報道，現(xiàn)如今已然成為世界性的公共衛(wèi)生問題。近年來，國內(nèi)外研究人員進(jìn)行了大量實(shí)驗(yàn)，認(rèn)為腰椎間盤突出癥的發(fā)病機(jī)制主要與機(jī)械壓迫學(xué)說、炎癥刺激學(xué)說、自身免疫學(xué)說有關(guān)。隨著人們生活方式的改變，腰椎間盤突出癥的發(fā)病率也在逐年升高，一旦發(fā)生腰椎間盤突出癥，將會嚴(yán)重影響人們的工作和生活質(zhì)量。該疾病治療方法較多，但大多只能不同程度的緩解癥狀，尚未發(fā)現(xiàn)能夠根治本病的方法。腰椎間盤突出癥屬祖國醫(yī)學(xué)“腰痹病”范疇，其發(fā)作多與受涼、受寒有關(guān)，其癥狀表現(xiàn)為腰腿部怕冷、畏風(fēng)，受涼后癥狀加重。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為這是外界寒邪作用的結(jié)果，因寒邪凝滯收引，易困阻脈絡(luò)而引發(fā)疼痛。從疾病的本質(zhì)來看，寒邪與腰痹病的致病機(jī)理、發(fā)病機(jī)制有待現(xiàn)代醫(yī)學(xué)驗(yàn)證，目前缺乏中醫(yī)致病因素高相關(guān)性及可比性的腰椎間盤突出癥動物模型，因此建立一種理想的動物模型對于研究本病與中醫(yī)致病因素的關(guān)系具有重要意義，同時也為探索各種治療方法提供良好的實(shí)驗(yàn)載體[3]。本研究旨在通過建立腰椎間盤突出癥的大鼠模型并給予外界寒邪刺激，探討寒邪在腰椎間盤突出癥發(fā)病中的機(jī)理，現(xiàn)報道如下。

1材料與方法

1.1動物" SPF級Sprague-Dawley（SD）雄性大鼠，體質(zhì)量（200±20）g，共30只。由長江大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供。本動物實(shí)驗(yàn)經(jīng)荊州市中醫(yī)醫(yī)院倫理委員會審查通過。

1.2試劑" 注射用青霉素鈉（華北制藥股份有限公司，批號：20200815）；10%水合氯醛（青島宇龍海藻有限公司，批號：20210303）；腫瘤壞死因子-α（TNF-α）檢測試劑盒（深圳雷杜生命科學(xué)股份有限公司，批號：202103）。

1.3儀器" MP5001電子天平（上海舜宇恒平有限公司）；Motic B5顯微攝像系統(tǒng)（麥克奧迪實(shí)業(yè)集團(tuán)公司）；SL系列手術(shù)放大鏡（SLE2542，蘇州捷美醫(yī)療器械有限公司）；LEICA DMLB2雙目顯微鏡（德國LEICA公司）；LG10-2.4A高速離心機(jī)（北京醫(yī)用離心機(jī)廠）；Shandon325型石蠟切片機(jī)（英國 Shandon公司）；RT-6000酶標(biāo)儀（深圳雷杜生命科學(xué)股份有限公司）。

1.4方法

1.4.1動物分組" 30只SPF級SD雄性大鼠按照隨機(jī)數(shù)字表法分為實(shí)驗(yàn)組、對照組和空白組，各10例。

1.4.2造模" 實(shí)驗(yàn)組和對照組大鼠參照自體髓核移植法[4]進(jìn)行造模，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后將大鼠稱重后用腹腔注射10%水合氯醛（3.5 ml/kg）進(jìn)行麻醉，麻醉生效后俯臥位固定大鼠，L4～L6棘突偏右側(cè)術(shù)前備皮，沿L4～L6棘突偏右側(cè)縱行切口，逐層分離皮膚、筋膜層，鈍性分離椎旁肌，暴露L4、L5乳狀突、椎板，行L4乳狀突、后關(guān)節(jié)突、部分椎板與L5的乳狀突、前關(guān)節(jié)突、部分椎板切除術(shù)，暴露硬膜及L4、L5背根神經(jīng)節(jié)，在傷口處覆蓋浸有生理鹽水的紗布保濕。在尾部距肛門1 cm處截?cái)辔舶停缓罂v行切口切開尾部皮膚暴露尾椎，切開纖維環(huán)共取4到5個髓核，將髓核輕輕放置在L4、L5背根神經(jīng)節(jié)上形成壓迫，然后逐層縫合傷口，再次消毒傷口，造模后將大鼠放置在室溫下復(fù)蘇，蘇醒后單籠飼養(yǎng)。造模后，連續(xù)3 d腹腔注射青霉素鈉20萬單位/（只·d）以預(yù)防傷口感染。于造模術(shù)后第3天觀察大鼠的行為表現(xiàn)，觀察精神，有無煩躁，后肢有無跛行，飲食、飲水，大便等。實(shí)驗(yàn)大鼠在造模前后及實(shí)驗(yàn)干預(yù)期間的進(jìn)食，精神狀態(tài)，休息等一般行為學(xué)指標(biāo)為判定造模是否成功提供參考。采用神經(jīng)功能判斷六級分法[5]進(jìn)行評分（表1），神經(jīng)功能評分超過2級提示造模成功。空白組同期飼養(yǎng)，不做造模處理。

1.4.3模擬外寒影響實(shí)驗(yàn)" 實(shí)驗(yàn)組：每天中午12∶00-16∶00將大鼠置于溫度為（4±0.5）℃、濕度為50%±2%的人工氣候箱中飼養(yǎng)4 h，其余時間按常規(guī)室溫飼養(yǎng)，連續(xù)1周。對照組：放置于（25±0.5）℃飼養(yǎng)，每天中午12∶00-16∶00將大鼠置于溫度為（4±0.5）℃、濕度為50%±2%的人工氣候箱中飼養(yǎng)4 h，其余時間按常規(guī)室溫飼養(yǎng)。連續(xù)1周。

1.4.4標(biāo)本采集" 分別于實(shí)驗(yàn)第7、14天隨機(jī)選取各組5只大鼠，使用10%水合氯醛（3.5 ml/kg）進(jìn)行腹腔內(nèi)注射麻醉，麻醉完成后，按原手術(shù)位置逐層打開，暴露L4、L5背根神經(jīng)節(jié)，將移植的髓核組織標(biāo)本取出保存于-80 ℃的冰箱，樣本在60 ℃水浴30 min后冷卻，置4 ℃冰箱備用。實(shí)驗(yàn)組、對照組、空白組三組標(biāo)本分開標(biāo)注并保存。打開大鼠胸腔，暴露心臟行心臟采血3～5 ml，放置于血漿抗凝管中，置于室溫30 min后，用高速冷凍離心機(jī)3000 r/min離心10 min，分離血清，放置于-20 ℃的冷藏柜中待用，實(shí)驗(yàn)組、對照組、空白組三組標(biāo)本分開標(biāo)注并保存。最后進(jìn)行心臟灌注，用灌注針頭（由50 ml針頭改制）從心尖插入，通過左心室進(jìn)入主動脈，固定針頭，打開灌注裝置（由輸液器改制），剪開右心耳，先用灌注生理鹽水至肺與肝臟顏色由深紅逐漸變白，血色變淡，再灌注400 ml含4%多聚甲醛的0.1 mol/L磷酸緩沖液（pH約為7.4）進(jìn)行固定，先快速灌注，觀察大鼠抽搐等情況，待抽搐結(jié)束，轉(zhuǎn)為慢速滴入，灌注約30 min。灌注結(jié)束后，大鼠軀體僵硬，按原手術(shù)位置逐層打開，暴露L4、L5背根神經(jīng)節(jié)，將背根神經(jīng)節(jié)、神經(jīng)根、椎間盤取出后放入4%多聚甲醛中常溫保存?zhèn)溆茫瑢?shí)驗(yàn)組和對照組兩組標(biāo)本分開標(biāo)注并保存。

1.5觀察指標(biāo)

1.5.1神經(jīng)功能評分" 實(shí)驗(yàn)組和對照組在術(shù)后第3、7、14天，空白組在實(shí)驗(yàn)的第7、14天參照神經(jīng)功能判斷六級分法進(jìn)行評分，評分由課題組2人完成，取平均值。

1.5.2血清腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白介素-6（IL-6）測定" 嚴(yán)格按照ELISA法試劑盒說明書步驟測定三組大鼠血清TNF-α、IL-6含量：將三組留存?zhèn)溆玫难鍢?biāo)本用RT-6000酶標(biāo)儀于450 nm波長測定血清樣本吸光度值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品濃度及對應(yīng)的吸光度值，計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣本的吸光度值，在回歸方程上計(jì)算出對應(yīng)的血清TNF-α、IL-6含量。

1.5.3髓核中磷脂酶A2（PLA2）含量" 將三組留存?zhèn)溆玫乃韬藰?biāo)本取出，各取2只25 ml燒杯分別作為A管和B管。B管加入8 ml底物緩沖液，1.1 ml乙二胺四乙酸，樣本0.4 ml；8 ml A管加入底物緩沖液，0.2 ml CaCl2溶液，樣本0.4 ml。37 ℃水浴后，B管加入0.2 ml CaCl2溶液，A管再加入1.1 ml乙二胺四乙酸，混勻后以高靈敏度pH計(jì)測量A管、B管的pH值，以微量吸槍吸取新標(biāo)定的稀鹽酸，將B管的pH滴定至與A管的相同的pH值，PLA2的活力通過所消耗的鹽酸測定。

1.5.4組織形態(tài)學(xué)觀察" 將三組標(biāo)本在甲醛固定液中固定48 h，各級酒精梯度脫水，石蠟包埋，石蠟切片機(jī)自神經(jīng)根組織分叉近端開始切成厚度4 μm石蠟切片，將切片置于58 ℃烤箱中烘烤18 h，行H-E染色，中性樹脂封片，光學(xué)顯微鏡下觀察神經(jīng)根組織的病理改變，用Motic B5顯微攝像系統(tǒng)觀察并攝影記錄結(jié)果。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法" 所有數(shù)據(jù)采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以（x±s）表示，采用t檢驗(yàn)及方差分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1生存情況" 造模完成后，模型組大鼠全部存活，無死亡、癱瘓、感染案例，均納入結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析，樣本無脫落。術(shù)后第3天，均有明顯癥狀，神經(jīng)功能評分均在3級以上。

2.2三組大鼠神經(jīng)功能情況比較" 從行為表現(xiàn)上看，實(shí)驗(yàn)第7天，實(shí)驗(yàn)組和對照組大鼠均有乏力、站立不穩(wěn)的情況，但實(shí)驗(yàn)組大鼠精神萎靡、目光呆滯、聲音低微等情況更明顯。實(shí)驗(yàn)第14天，對照組明顯好轉(zhuǎn)，活動度明顯增加，后肢行走乏力、痿軟；實(shí)驗(yàn)組后肢乏力，跛行明顯，經(jīng)常有舔舐后肢等動作。空白組實(shí)驗(yàn)第7、14天均無明確的行走受限，但第7天因寒冷環(huán)境下活動量減少，精神稍差。從具體評分來看，實(shí)驗(yàn)第7、14天，實(shí)驗(yàn)組神經(jīng)功能評分均高于對照組和空白組（P＜0.05）；實(shí)驗(yàn)組實(shí)驗(yàn)第14天與第7天神經(jīng)功能評分比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；而對照組、空白組實(shí)驗(yàn)第14天與第7天神經(jīng)功能評分，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

2.3三組大鼠血清TNF-α、IL-6比較" 三組實(shí)驗(yàn)第14天血清TNF-α、IL-6水平均低于實(shí)驗(yàn)第7天，但實(shí)驗(yàn)組實(shí)驗(yàn)第7、14天血清TNF-α、IL-6水平高于對照組和空白組（P＜0.05），見表3、表4。

2.4三組大鼠髓核中PLA2含量比較" 三組實(shí)驗(yàn)第14天大鼠髓核中PLA2含量均低于實(shí)驗(yàn)第7天，但實(shí)驗(yàn)組實(shí)驗(yàn)第7、14天大鼠髓核中PLA2含量高于對照組和空白組（P＜0.05），見表5。

2.5神經(jīng)及神經(jīng)節(jié)病理學(xué)改變" 造模術(shù)后第7天，對照組神經(jīng)節(jié)及神經(jīng)根周圍小血管擴(kuò)張充血，神經(jīng)組織內(nèi)可見小靜脈擴(kuò)張充血，神經(jīng)組織水腫，炎性細(xì)胞浸潤，但未見神經(jīng)束受壓表現(xiàn)。實(shí)驗(yàn)組可見出血及炎癥細(xì)胞細(xì)胞浸潤，同時有神經(jīng)受壓表現(xiàn)。造模術(shù)后第14天時，對照組出血及炎癥細(xì)胞細(xì)胞浸潤明顯好轉(zhuǎn)，神經(jīng)元輕度水腫；實(shí)驗(yàn)組顯示較明顯的炎性細(xì)胞浸潤，浸潤的炎性細(xì)胞以中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞為主，且神經(jīng)組織腫脹明顯、神經(jīng)髓鞘腫脹、碎裂，軸突腫脹或消失，許旺氏細(xì)胞自溶、軟化，見圖1。

3討論

腰椎間盤突出癥是骨科臨床中的常見病和多發(fā)病，是引起腰腿疼痛的主要病因，由于腰椎間盤的退行性改變導(dǎo)致脊柱內(nèi)外生物力學(xué)失衡，在伴隨損傷或不伴損傷條件下出現(xiàn)纖維環(huán)破裂，髓核組織向后突出刺激或壓迫硬膜囊和神經(jīng)根，引發(fā)一系列如腰部疼痛、下肢放射性疼痛、麻木、間歇性跛行等臨床癥狀[6-8]。中醫(yī)學(xué)將腰椎間盤突出癥歸納為腰痛、腰腿痛、痹證等范疇，《素問·刺腰痛篇》中記載：“衡絡(luò)之脈令人腰痛，不可以俯仰，仰則恐仆，得之舉重傷腰”。引起腰椎間盤突出癥的病因復(fù)雜，椎間盤退行性改變是基本因素，外界因素是加劇椎間盤變性突出的誘發(fā)條件。《素問·痹論》云：“痛者，寒氣多也”。寒邪所具有的凝滯致病特點(diǎn)而致氣血運(yùn)行不暢，同時寒屬陰邪，易傷陽氣，陽氣損傷又可致內(nèi)寒更甚，進(jìn)而復(fù)傷陽氣，機(jī)體陽氣受損，不能溫運(yùn)，全身的氣血津液則不能正常運(yùn)行，這都導(dǎo)致氣血凝結(jié)阻滯于筋脈，不通則痛，便可見四肢疼痛、麻木等表現(xiàn)。寒性收引而表現(xiàn)為所累肢體拘急不利，故而可見腰椎間盤突出癥患者腰背屈伸不利、行走活動受限。以本實(shí)驗(yàn)結(jié)果可見，實(shí)驗(yàn)組和空白組大鼠在受寒后均不同程度表現(xiàn)后肢無力、行走不穩(wěn)；從神經(jīng)功能情況來看，實(shí)驗(yàn)組實(shí)驗(yàn)第7、14天神經(jīng)功能評分高于對照組和空白組（P＜0.05），可見外界寒邪的刺激明顯改變和加重大鼠的神經(jīng)功能。寒邪凝滯、瘀血內(nèi)生，瘀血又作為一種致病因素和寒邪疊加致使癥狀加重，這也是實(shí)驗(yàn)組神經(jīng)功能評分較高的原因。瘀血一旦形成則較難去除，故可見實(shí)驗(yàn)組在實(shí)驗(yàn)第14天神經(jīng)功能評分下降不明顯，和對照組及空白組比較仍有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，這也為臨床治療寒邪所致腰椎間盤突出癥在應(yīng)用溫經(jīng)驅(qū)寒藥物的同時要加用活血祛瘀藥物提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

祖國醫(yī)學(xué)沒有腰椎間盤突出癥這一病名，其屬于“腰痹病”范疇，在臨床診治該病時，更注重的是其證型，其中寒凝血瘀證是該病的主要證型，其治療方法較多，無論是內(nèi)治還是外治都是從其寒凝的本質(zhì)出發(fā)，標(biāo)本同治、療效顯著，多能緩解患者癥狀，改善其生活質(zhì)量。但基礎(chǔ)研究尚顯不足，尤其是用于實(shí)驗(yàn)研究的寒凝模型報道較少。本研究借鑒了其他疾病寒凝證動物模型的造模方法及腰椎間盤突出癥的大鼠自體髓核移植造模方法，結(jié)合應(yīng)用兩種造模方法，利用大鼠尾椎椎間盤髓核放置于腰椎神經(jīng)根處模擬椎間盤突出致神經(jīng)的機(jī)械壓迫，同時利用低溫寒凝刺激模擬外感寒邪[9]，綜合作用而模擬腰椎間盤突出癥的寒凝證，從造模后實(shí)驗(yàn)大鼠的神經(jīng)學(xué)表現(xiàn)及神經(jīng)功能評分來看，該方法是有效的，造模是成功的。該方法造模具有操作方便、可控性強(qiáng)、成功率高等特點(diǎn)，可被用于腰椎間盤突出癥寒凝證的相關(guān)研究。臨床研究發(fā)現(xiàn)[10-13]，腰椎間盤突出癥患者體內(nèi)血清TNF-α與IL-1β、IL-6等細(xì)胞炎性因子有不同程度的升高。通過大量的動物實(shí)驗(yàn)研究[14-16]，進(jìn)一步表明腰椎間盤突出癥的發(fā)病與TNF-α、IL-1β、IL-6等細(xì)胞因子有關(guān)。同時，P物質(zhì)和降鈣素基因相關(guān)肽是痛覺傳導(dǎo)的神經(jīng)遞質(zhì)，有研究發(fā)現(xiàn)其在腰椎間盤突出癥患者血清中含量升高[17]。還有學(xué)者研究表明[18，19]，PLA2、IL-6、TNF-α具有誘導(dǎo)髓核細(xì)胞凋亡，加速纖維環(huán)變性破壞，導(dǎo)致椎間盤突出。而寒冷環(huán)境下可以使血漿中TNF-α、IL-6和PLA2等炎癥因子的濃度升高。Nie Y等[20]將小鼠暴露于4 ℃的低溫環(huán)境中飼養(yǎng)21 d，發(fā)現(xiàn)寒冷可以使血漿中TNF-α和IL-6水平升高；Sánchez-Gloria JL等[21]把大鼠分別置于（23.5±2）℃和（5.0±1℃）中10 d，對比得出寒冷刺激會加重TNF-α、IL-6等炎癥因子水平升高；董彥文等[22]研究寒冷刺激對急性心肌梗死患者內(nèi)皮素、炎癥因子的影響，結(jié)果表明寒冷刺激可導(dǎo)致TNF-α、IL-6和PLA2等炎癥因子水平增加。本實(shí)驗(yàn)研究中發(fā)現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)組大鼠在寒邪模擬環(huán)境下髓核中PLA2含量較對照組和空白組升高，血清中TNF-α、IL-6也較對照組和空白組升高，再次表明寒邪環(huán)境下可加速髓核變性突出。

本研究不足之處：本造模方法尚不能模擬單純的寒凝所致的腰椎間盤突出癥，雖然空白組大鼠在寒冷刺激后也表現(xiàn)出了一定的神經(jīng)功能受損的表現(xiàn)，但缺乏腰椎間盤突出癥髓核突出的直接依據(jù)；寒邪刺激的溫度比較單一，尚未就不同溫度作對比研究；未深入探討寒邪促進(jìn)TNF-α、IL-6和PLA2等炎癥因子表達(dá)的機(jī)制。

綜上所述，寒邪作用于大鼠腰椎間盤突出癥模型能降低大鼠生存質(zhì)量，提高髓核中PLA2含量及血清炎癥因子TNF-α、IL-6表達(dá)，為腰椎間盤突出癥的重要發(fā)病因素。

參考文獻(xiàn)：

[1]王國基，王國軍，彭健民，等.腰椎間盤突出癥致病因素的流行病學(xué)研究[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2009，36（13）：2401-2403．

[2]Mixter WJ，Barr JS.Rupture of the intervertebral disc with involvement of the spinal canal[J].New England Journal of Medicine，1934，211（5）：210-215.

[3]Ji D，Xing W，Li F，et al.Correlation of EYS POLYMORPHISMS with lumbar disc herniation risk among Han Chinese population[J].Mol Genet Genomic Med，2019，7（9）：e890.

[4]Kaneuchi Y，Sekiguchi M，Kameda T，et al.Temporal and Spatial Changes of μ-Opioid Receptors in the Brain， Spinal Cord and Dorsal Root Ganglion in a Rat Lumbar Disc Herniation Model[J].Spine （Phila Pa 1976），2019，44（2）：85-95.

[5]師振予，郭亦杰，曾嶸，等.腰椎間盤突出癥大鼠模型的建立及病理動態(tài)研究[J].湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2020，40（1）：28-33.

[6]田鳳娟，鄭艷，張敏.腰椎間盤突出癥術(shù)后家庭參與早期康復(fù)護(hù)理效果分析[J].河南外科學(xué)雜志，2023，29（4）：182-184.

[7]Shi R，Wang F，Hong X，et al.Comparison of percutaneous endoscopic lumbar discectomy versus microendoscopic discectomy for the treatment of lumbar disc herniation： a meta-analysis[J].Int Orthop，2019，43（4）：923-937.

[8]Shenoy K，Stekas N，Donnally CJ 3rd，et al.Retrolisthesis and lumbar disc herniation： a postoperative assessment of outcomes at 8-year follow-up[J].Spine J，2019，19（6）：995-1000.

[9]楊士友，孫備，裴月梅，等，風(fēng)寒表證和寒凝血瘀證動物模型的研究[J].中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)，1997，3（1）：54-56.

[10]何川，龐啟雄，陳洪衛(wèi)，等．腰椎間盤突出癥中醫(yī)證型與血清炎性因子相關(guān)性分析[J].長江大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2020，17（4）：97-100.

[11]楊小榮，周文來，吳良紹.微創(chuàng)和開放手術(shù)治療腰椎間盤突出癥的療效及其炎性因子水平比較[J].臨床骨科雜志，2017，20（3）：297-300.

[12]李洪濤，魏心然，孫曉偉，等.脊痛消膠囊對腰椎間盤突出癥的療效及對IL-1β、IL-6、TNF-α因子的影響[J].中醫(yī)藥信息，2020，37（2）：95-99．

[13]焦鋒，唐望，黃荷，等.消腫定痛合劑治療急性腰椎間盤突出癥90例臨床觀察及對腫瘤壞死因子-α、α-顆粒膜糖蛋白、白細(xì)胞-1β、MMP-3的干預(yù)作用[J].遼寧中醫(yī)雜志，2020，47（2）：117-120.

[14]牛輝，鮑朝輝，張文明，等.基于c-JNK/CXCL1信號通路研究椎間盤丸對腰椎間盤突出癥大鼠脊髓炎癥的抑制作用[J].中藥新藥與臨床藥理，2021，32（5）：655-660.

[15]楊文文，許蘭，吳繼新，等.針刺對腰椎后路減壓融合內(nèi)固定術(shù)大鼠的抑炎鎮(zhèn)痛作用及Akt/NF-κB通路的影響[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報，2022，28（5）：47-51.

[16]馮濤，張麗萍.針刀松解法對腰椎間盤突出癥根性神經(jīng)痛模型大鼠鎮(zhèn)痛與抗炎效果分析[J].廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2019，36（8）：1213-1218.

[17]顧敦星，孫翾，陳常玉，等.熱敏灸聯(lián)合腰大肌肌間溝神經(jīng)阻滯對腰椎間盤突出癥患者M(jìn)RI影像特征及血清P物質(zhì)、β-內(nèi)啡肽水平的影響[J].河北北方學(xué)院學(xué)報（自然科學(xué)版），2020，36（10）：27-31.

[18]張維國，姜才美，雷征.PLDD聯(lián)合射頻熱凝術(shù)治療腰椎間盤突出癥的療效及對血清6-keto-PGE1α、PLA2、M-ENK水平的影響[J].臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2018，17（19）：2094-2097.

[19]賈松濤，武佐元，喬兆輝，等.調(diào)督理筋針法聯(lián)合撳針治療腰椎間盤突出癥的療效及對血清白細(xì)胞介素6、白細(xì)胞介素17、腫瘤壞死因子α的影響[J].河北中醫(yī)，2021，43（3）：478-482.

[20]Nie Y，Yan Z，Yan W，et al.Cold exposure stimulates lipid metabolism， induces inflammatory response in the adipose tissue of mice and promotes the osteogenic differentiation of BMMSCs via the p38 MAPK pathway in vitro[J].Int J Clin Exp Pathol，2015，8（9）：10875-10886.

[21]Sánchez-Gloria JL，Carbó R，Buelna-Chontal M，et al.Cold exposure aggravates pulmonary arterial hypertension through increased miR-146a-5p， miR-155-5p and cytokines TNF-α， IL-1β， and IL-6[J].Life Sci，2021，287：120091.

[22]董彥文，牧騎，孫秀杰，等.寒冷刺激對急性心肌梗死患者內(nèi)皮素、炎癥因子的影響[J].心腦血管病防治，2018，18（2）：126-127.

收稿日期：2023-08-18；修回日期：2023-09-01

編輯/杜帆